WGBS（Whole Genome Bisulfite Sequence）全基因組甲基化測序，利用重亞硫酸氫鹽使DNA中未發(fā)生甲基化的胞嘧啶(C)脫氨基轉(zhuǎn)變成尿嘧啶(U)，而甲基化的胞嘧啶保持不變，然后通過PCR將U變?yōu)锳，*有甲基化的C可以成功保留，***通過測序就可判斷CpG位點是否發(fā)生甲基化。特點是精確度高、重復(fù)性好，檢測范圍廣，可以覆蓋全基因組范圍內(nèi)的每一個C堿基的甲基化狀態(tài)；但需要的數(shù)據(jù)量比較大，成本較高。上海翼和生物是上海市遺傳學(xué)會理事單位，上海市高新技術(shù)企業(yè)，至今已有16年的歷史。這種DNA修飾方式在不改變基因序列前提下實現(xiàn)對基因表達的調(diào)控。北京bisulfite甲基化重測序準(zhǔn)確度高
DNA甲基化是表觀遺傳學(xué)修飾的主要形式，甲基化模式的異常促進細胞惡性轉(zhuǎn)化，參與tumour演進。許多基因具有tumour特異性的甲基化表型，一方面基因組普遍的低甲基化引起原cancer基因活化，基因組不穩(wěn)定性增加；另一方面啟動子區(qū)的高甲基化，引起抑cancer基因及錯配修復(fù)基因表達沉默，導(dǎo)致tumour的發(fā)生。研究表明，基因組的低甲基化隨著細胞惡性度的增加而愈加明顯，是病情診斷的重要指標(biāo)；此外，CpG島局部的高甲基化發(fā)生于細胞惡變之前，能在早期預(yù)測tumour的發(fā)生，其也能有效地預(yù)測tumour的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，在tumour的鑒別診斷中亦發(fā)揮重要作用。因此，檢測tumour發(fā)生中相關(guān)基因的甲基化模式具有重要意義，現(xiàn)就近年來中外文獻報道的甲基化檢測方法進行簡要的分析總結(jié)。成都目標(biāo)位點甲基化重測序準(zhǔn)確度高WGBS全稱全基因組重亞硫酸鹽測序，該方法通過Bisulfite處理。
DNA甲基化是指在甲基轉(zhuǎn)移酶的催化下，DNA的CG二核苷酸中的胞嘧啶被選擇性的添加甲基，形成5-甲基胞嘧啶，常見于基因的5′—CG—3′序列。DNA甲基化的位置主要集中在基因5′端的非編碼區(qū)，DNA高度甲基化首先會影響DNA結(jié)構(gòu)，進而阻遏基因轉(zhuǎn)錄，引起基因沉默。DNA甲基化為非編碼區(qū)（如內(nèi)含子等）的長期沉默提供了一種有效的抑制機制?；騿訁^(qū)域內(nèi)CpG位點的甲基化通過三種方式影響基因轉(zhuǎn)錄活性：DNA序列甲基化直接阻礙轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合；甲基CpG結(jié)合蛋白結(jié)合到甲基化CpG位點與其他轉(zhuǎn)錄抑制因子相互作用；染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的凝集阻礙了轉(zhuǎn)錄因子與其調(diào)控序列的結(jié)合。
DNA去甲基化分為兩類：主動去甲基化（Active DNA Demethylation）和被動去甲基化（Passive DNA Demethylation）。基因組甲基化模式的形成主要依賴于主動去甲基化，主要涉及一類具有DNA去甲基化功能的蛋白，可能存在的五種機制a. DNA轉(zhuǎn)葡糖基酶參與的堿基切除修復(fù)（base excision repair；BER）：5-mC 由DNA 轉(zhuǎn)葡糖基酶直接去除。此途徑主要存在于植物體內(nèi)，動物體內(nèi)也可能存在。b.脫氨酶參與的堿基切除修復(fù)：5-mC 脫氨變成胸腺嘧啶T，形成G/T 錯配，進入BER 途徑。這一途徑主要存在于動物體中，植物體中也可能存在。c.核苷酸外切修復(fù)機制（nucleotide excision repair；NER）：直接移除甲基化的CpG 二核苷酸。d.氧化去甲基化：發(fā)生氧化反應(yīng)打開碳-碳鍵，直接去除甲基基團。e.水解去甲基化：水解胞嘧啶的甲基基團，使其以甲醇的形式被釋放。DNA被動去甲基化是指當(dāng)DNMTs活性被抑制或濃度過低時，無法維持原有的甲基化狀態(tài)，使DNA甲基化程度降低的過程，這類去甲基化通常發(fā)生在細胞復(fù)制的兩個周期之間，涉及到某些可與DNMTs結(jié)合的因子，其結(jié)合后形成的復(fù)合物可以阻止DNMTs與DNA的結(jié)合。目標(biāo)區(qū)域甲基化重測序（Hi-Methylseq）結(jié)合了亞硫酸鹽轉(zhuǎn)換、靶向擴增子高通量測序技術(shù)。
DNA甲基化一直以來都是表觀遺傳學(xué)領(lǐng)域研究的重點之一。DNA甲基化（Methylation）是指在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（DNA methyltransferase, 縮寫DNMT）的作用下，基因組DNA序列上CpG島的二核苷酸5′端胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)?′甲基胞嘧啶（5′ methylcytosine, 縮寫5mC）。這種DNA修飾的方式并未改變基因的序列, 但能抑制某些基因的表達。在哺乳動物中，基因組DNA的甲基化可分為兩種類型：維持甲基化（maintenance DNA methylation）和重新甲基化（de novo methylation）。維持甲基化是指在甲基轉(zhuǎn)移酶的作用下，DNA的半保留復(fù)制過程中，會在子鏈的相應(yīng)的位置進行甲基化修飾的過程。重新甲基化是指在甲基轉(zhuǎn)移酶的作用下，原來沒有甲基化的DNA雙鏈上，進行甲基化的過程，之后由維持甲基化酶來維持穩(wěn)定的DNA甲基化狀態(tài)。對于這兩種甲基化機制來說，有兩種對應(yīng)類型的甲基化酶：維持甲基轉(zhuǎn)移酶和重新甲基轉(zhuǎn)移酶。表觀遺傳屬于一種可以對環(huán)境產(chǎn)生應(yīng)答和改變的遺傳機制。成都目標(biāo)區(qū)域甲基化重測序哪個公司做
重亞硫酸鹽測序可以從單個堿基水平分析基因組中甲基化的胞嘧啶。北京bisulfite甲基化重測序準(zhǔn)確度高
DNA甲基化是在DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(Dnmt)的作用下將甲基選擇性地添加到胞嘧啶上形成5-胞嘧啶的過程，剛被發(fā)現(xiàn)時被定義為第五種堿基，實際上它是一種重要的表觀遺傳學(xué)標(biāo)記，在調(diào)控基因表達、維持染色質(zhì)結(jié)構(gòu)、基因印記、X染色體失活以及胚胎發(fā)育等生物學(xué)過程中發(fā)揮著重大的作用，獲得全基因組范圍內(nèi)所有C位點的甲基化水平數(shù)據(jù)，對表觀遺傳學(xué)的時空特異性研究具有重要意義，Bisulfite甲基化測序是以新一代高通量測序平臺為基礎(chǔ)，結(jié)合全基因組Bisulfite處理和生物信息數(shù)據(jù)分析技術(shù)，進行低成本、高效率、高準(zhǔn)確度的全基因組DNA甲基化水平圖譜繪制。北京bisulfite甲基化重測序準(zhǔn)確度高
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