亞硫酸氫鹽測序法用亞硫酸氫鈉對 DNA 進(jìn)行化學(xué)處理會(huì)使甲基化特異性序列變異，從而可以通過NGS進(jìn)行定位和量化，主要的DNA甲基化數(shù)據(jù)分析流程：獲得DNA甲基化數(shù)據(jù)之后，首先，需要對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和質(zhì)量的基本控制，包括原始測序和芯片數(shù)據(jù)的讀取、轉(zhuǎn)換到產(chǎn)生準(zhǔn)確的DNA甲基化圖譜；其次，需要對DNA甲基化位點(diǎn)的結(jié)果進(jìn)行可視化，并且利用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法鑒定樣本特異性差異的DNA甲基化位點(diǎn)；第三，驗(yàn)證 DNA 甲基化差異位點(diǎn)，并且對其進(jìn)行生物學(xué)解釋。DNA甲基化主要發(fā)生在啟動(dòng)子區(qū)CPG島,在調(diào)節(jié)基因表達(dá)和其他功能方面起著關(guān)鍵作用.杭州目標(biāo)區(qū)段甲基化重測序哪里做
全基因組重亞硫酸鹽甲基化測序（WGBS）可以在全基因組范圍內(nèi)精確的檢測所有單個(gè)胞嘧啶堿基（C堿基）的甲基化水平，是DNA甲基化研究的金標(biāo)準(zhǔn)。WGBS能為基因組DNA甲基化修飾的研究提供重要技術(shù)支持，能廣泛應(yīng)用在個(gè)體發(fā)育、衰老和cancer發(fā)生等生命過程的機(jī)制研究中。其原理是用 Bisulfite 處理DNA序列，首先將基因組中未發(fā)生甲基化的 C 堿基轉(zhuǎn)換成U（T），從而與原本具有甲基化修飾的堿基C區(qū)分開來，然后進(jìn)行PCR擴(kuò)增，結(jié)合高通量測序技術(shù)，適用于全基因組范圍內(nèi)繪制單堿基分辨率的DNA 甲基化圖譜。河南目標(biāo)甲基化重測序哪里做WGBS全稱全基因組重亞硫酸鹽測序，該方法通過Bisulfite處理。
5甲基胞嘧啶 (5-methylcytosine, 5mC) 是一種常見的DNA修飾類型，能調(diào)節(jié)基因表達(dá)、轉(zhuǎn)座子及染色體的狀態(tài)等。全基因組重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化的WGBS法，能夠?qū)崿F(xiàn)單堿基分辨率的甲基化位點(diǎn)準(zhǔn)確、高效定位。通過***分析不同處理方式下的全基因組甲基化水平，快速準(zhǔn)確鑒定出差異甲基化區(qū)域，有助于我們更加***深入地了解動(dòng)、植物的甲基化模式和表觀調(diào)控機(jī)制，在動(dòng)物行為、植物脅迫、植物性狀、胚胎發(fā)育、cancer疾病、生物標(biāo)記物等方面具有普遍的應(yīng)用。
DNA甲基化過程在一些生物學(xué)現(xiàn)象中起重要作用。例如，在原核生物中，它參與毒力、細(xì)胞周期調(diào)控、基因表達(dá)和對外源 DNA 導(dǎo)入的保護(hù)（DNA-宿主特異性）等過程。在高等真核生物中，DNA 甲基化參與調(diào)控染色體穩(wěn)定性、印記、X 染色體失活和cancer 變等多個(gè)細(xì)胞過程。在哺乳動(dòng)物中，DNA 甲基化主要發(fā)生在胞嘧啶堿基的第五個(gè)碳原子上，形成 5-甲基胞嘧啶或 5-甲基胞嘧啶核苷 (5-mC)。DNA甲基化幾乎只存在于CpG二核苷酸上，是一個(gè)關(guān)鍵的表觀遺傳標(biāo)記和基因表達(dá)調(diào)控因子?；騿?dòng)子或 CpG 島處的甲基化 CpG 簇與基因失活有關(guān)。DNA 甲基化由一個(gè)被稱為 DNA 甲基轉(zhuǎn)移酶并包括 DNMT1、DNMT3a 和 DNMT3b 的酶家族催化。DNMT3a 和 DNMT3b是從頭合成的甲基轉(zhuǎn)移酶，能夠甲基化之前未甲基化的 CpG二核苷酸。相反，DNMT1是一種維持性甲基轉(zhuǎn)移酶，在復(fù)制過程中修飾半甲基化的 DNA。亞硫酸氫鹽處理是一種分類5-甲基胞嘧啶和非甲基化堿基的有效方法之一。
亞硫酸氫鈉轉(zhuǎn)化是分析胞嘧啶甲基化效果比較好的工具之一。該方法基于亞硫酸氫鈉對 DNA 的處理，確定其甲基化模式。重亞硫酸鹽測序本質(zhì)上就是重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化與二代測序（NGS）的結(jié)合。甲基化的金標(biāo)準(zhǔn)是亞硫酸氫鹽測序法：用亞硫酸氫鹽處理DNA，未發(fā)生甲基化的胞嘧啶能夠被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶則保持不變，通過后續(xù)的測序即可檢測。利用亞硫酸氫鹽的這種原理，可以衍生出多種甲基化檢測方法，如甲基化特異性的PCR和高分辨率熔解曲線法。常規(guī)全基因組甲基化測序技術(shù)通過T4-DNA連接酶，在超聲波打斷基因組DNA段的兩端連接接頭序列。河南目標(biāo)甲基化重測序哪里做
在前期全基因組甲基化測序等工作基礎(chǔ)上，利用Hi-MethylSeq技術(shù)對大規(guī)模群體的候選基因甲基化水平進(jìn)行檢測。杭州目標(biāo)區(qū)段甲基化重測序哪里做
在表觀遺傳中，DNA甲基化修飾具有非常重要的地位。其中胞嘧啶雜環(huán)5號(hào)位的甲基化修飾，又稱作5-甲基胞嘧啶（5mC），是**常見的甲基化修飾方式，也是迄今為止研究**為普遍的DNA甲基化修飾方式。一般認(rèn)為當(dāng)DNA甲基化出現(xiàn)在基因啟動(dòng)子區(qū)，就會(huì)抑制基因轉(zhuǎn)錄，從而起到負(fù)調(diào)控的作用。DNA甲基化的形成機(jī)制，包括從頭合成（de novo），甲基化的維持（Maintenance）和去甲基化（Demethylation），這些過程分別由不同的基因和通路調(diào)控。這些基因和通路在動(dòng)植物中即保守，又有所區(qū)別。杭州目標(biāo)區(qū)段甲基化重測序哪里做
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