相比Taqman熒光探針法,KASP技術(shù)只要合成兩個(gè)通用熒光探針,兩個(gè)通用淬滅探針,通用熒光探針來代替針對(duì)位點(diǎn)的熒光探針,極大節(jié)約成本。同時(shí)配套SNPline基因分型儀器平臺(tái),可以進(jìn)行高通量的SNP分型規(guī)模。該方法利用多重PCR技術(shù),同時(shí)捕獲數(shù)十上百個(gè)SNP位點(diǎn),Barcode引物區(qū)分不同樣本,實(shí)現(xiàn)一次上機(jī)測(cè)序,完成多位點(diǎn),大樣本的高通量分型實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹6嘀豍CR特性,也極大降低了對(duì)樣本量的需求。上海翼和專家團(tuán)隊(duì)富有開創(chuàng)精神,朝氣蓬勃,在肖君華博士的帶領(lǐng)下,秉承“專業(yè)、協(xié)作、進(jìn)取”的企業(yè)精神,為科研用戶提供性價(jià)比高、可靠的遺傳學(xué)技術(shù)服務(wù)和產(chǎn)品。多態(tài)性是一個(gè)群體概念,多態(tài)性指這個(gè)差異占群體的1%以上。否則就叫突變(小于1%)。浙江STR/SSRSNP分型機(jī)構(gòu)
2.SNaPshot法該技術(shù)由美國(guó)應(yīng)用生物公司(ABI)開發(fā),是基于熒光標(biāo)記單堿基延伸原理的分型技術(shù),也稱小測(cè)序,主要針對(duì)中等通量的SNP分型項(xiàng)目。在一個(gè)含有測(cè)序酶、四種熒光標(biāo)記ddNTP、緊臨多態(tài)位點(diǎn)5’-端的不同長(zhǎng)度延伸引物和PCR產(chǎn)物模板的反應(yīng)體系中,引物延伸一個(gè)堿基即終止,經(jīng)ABI測(cè)序儀檢測(cè)后,根據(jù)峰的移動(dòng)位置確定該延伸產(chǎn)物對(duì)應(yīng)的SNP位點(diǎn),根據(jù)峰的顏色可得知摻入的堿基種類,從而確定該樣本的基因型。對(duì)于PCR產(chǎn)物模板可通過多重PCR反應(yīng)體系來獲得。通常用于10-30個(gè)SNP位點(diǎn)分析。山東微衛(wèi)星標(biāo)記strSNP分型機(jī)構(gòu)SNP這個(gè)概念被提出時(shí),是為了描述一個(gè)群體內(nèi)不那么罕見的堿基突變。
3.HRM法高分辨率熔解曲線分析(HRM)是近幾年興起的SNP研究工具,它通過實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)升溫過程中雙鏈DNA熒光染料與PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的結(jié)合情況,來判斷是否存在SNP,而且不同SNP位點(diǎn)、是否是雜合子等都會(huì)影響熔解曲線的峰形,因此HRM分析能夠有效區(qū)分不同SNP位點(diǎn)與不同基因型。這種檢測(cè)方法不受突變堿基位點(diǎn)與類型的局限,無需序列特異性探針,在PCR結(jié)束后直接運(yùn)行高分辨率熔解,即可完成對(duì)樣品基因型的分析。該方法無需設(shè)計(jì)探針,操作簡(jiǎn)便、快速,成本低,結(jié)果準(zhǔn)確,并且實(shí)現(xiàn)了真正的閉管操作。
高分辨率熔解(High-resolutionmelting,簡(jiǎn)稱HRM)分析是一門新興的技術(shù)。它通過PCR之后的熔解曲線分析,就能檢測(cè)PCR片段的微小序列差異,從而應(yīng)用在突變掃描、序列配對(duì)和基因分型等多個(gè)方面。憑借其速度和簡(jiǎn)便性,高分辨率熔解這種方法正在迅速普及。其實(shí)雙鏈DNA的熔解分析可追溯到上世紀(jì)六十年代,當(dāng)時(shí)是通過紫外吸收來監(jiān)測(cè)的。分析需要幾微克的DNA,而樣品以0.1-1.0°C/分鐘的速率緩慢加熱,常常要花上幾個(gè)小時(shí)才能完成。后來,LightCycler定量PCR儀的出現(xiàn),讓熒光熔解分析變得流行。樣品量因毛細(xì)管而縮減至納克級(jí),且熔解速率更快,達(dá)0.1-1.0°C/秒,這樣熔解時(shí)間縮短至幾分鐘。當(dāng)時(shí)使用的染料是SYBR?GreenI。對(duì)于候選SNP的遴選,有很多種考慮,總的趨勢(shì)和出發(fā)點(diǎn)是能夠涵蓋的SNP越多越好。
隨著二代測(cè)序技術(shù)的普及,相比Sanger測(cè)序,二代測(cè)序雖然降低了測(cè)序讀長(zhǎng),但是極大增加的測(cè)序通量同時(shí)大幅降低測(cè)序成本。利用二代測(cè)序進(jìn)行SNP分型,不僅測(cè)序讀長(zhǎng)滿足分型需求,并且可以同時(shí)對(duì)數(shù)十?dāng)?shù)百個(gè)位點(diǎn),上千樣本進(jìn)行分型。二代測(cè)序結(jié)果判斷準(zhǔn)確直觀,相比RFLP,Taqman,LDR等方法都通過間接結(jié)果來進(jìn)行分型結(jié)果的判定,直接測(cè)序或二代測(cè)序法分型能都直接看到位點(diǎn)具體序列情況,SNP位點(diǎn)判斷更加直觀。上海翼和專家團(tuán)隊(duì)富有開創(chuàng)精神,朝氣蓬勃,在肖君華博士的帶領(lǐng)下,秉承“專業(yè)、協(xié)作、進(jìn)取”的企業(yè)精神,為科研用戶提供性價(jià)比高、可靠的遺傳學(xué)技術(shù)服務(wù)和產(chǎn)品。SNP已經(jīng)廣泛應(yīng)用于人類致病基因篩選、致病風(fēng)險(xiǎn)診斷及預(yù)測(cè)、個(gè)體化藥物篩選等生物、醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域。江蘇SSRSNP分型售后服務(wù)周到
SNP對(duì)于樣本量,我們是比較有優(yōu)勢(shì)的,人口基數(shù)大,有大量的病例資源。浙江STR/SSRSNP分型機(jī)構(gòu)
查詢進(jìn)入如下界面后,再點(diǎn)擊左側(cè)欄的“Exportdata”。進(jìn)入如下界面后,選擇output格式,這里選擇“BEDFormat”,繼續(xù)點(diǎn)擊“Next”。選擇輸出格式,根據(jù)自己需求選擇。選擇輸出格式,如“HTML”,結(jié)果呈現(xiàn)如下圖所示。通過上面的幾個(gè)步驟,就完成了特定區(qū)段內(nèi)所有SNP位點(diǎn)的查詢,是不是也很方便,大家趕快去實(shí)際操作試試吧~上海翼和生物技術(shù)PCR-LDR分型方法,擁有十二年分型經(jīng)驗(yàn),每年協(xié)助客戶發(fā)表研究論文,包括“NatureGenetics”等期刊,在客戶中形成良好口碑。浙江STR/SSRSNP分型機(jī)構(gòu)
上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司致力于醫(yī)藥健康,是一家服務(wù)型公司。翼和生物致力于為客戶提供良好的細(xì)胞組織小鼠質(zhì)控,大健康檢測(cè),生物技術(shù)服務(wù),一切以用戶需求為中心,深受廣大客戶的歡迎。公司秉持誠(chéng)信為本的經(jīng)營(yíng)理念,在醫(yī)藥健康深耕多年,以技術(shù)為先導(dǎo),以自主產(chǎn)品為重點(diǎn),發(fā)揮人才優(yōu)勢(shì),打造醫(yī)藥健康良好品牌。翼和生物秉承“客戶為尊、服務(wù)為榮、創(chuàng)意為先、技術(shù)為實(shí)”的經(jīng)營(yíng)理念,全力打造公司的重點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)力。