廣州目標甲基化重測序技術服務

來源: 發(fā)布時間:2021-10-25

DNA甲基化可以抑制基因表達。其機制是當DNA甲基化出現(xiàn)在啟動子區(qū),其會強化啟動子序列的異染色質化(染色體擰巴在一起),而使轉錄起始復合物無法接近和結合,從而強化基因的轉錄抑制。只有保持開放性常染色質狀態(tài)的轉錄起始位點,才能保證轉錄起始蛋白復合物可接近并結合這個區(qū)域,從而保證基因的轉錄表達。當DNA甲基化出現(xiàn)在編碼基因不同區(qū)域的時候(上游,基因區(qū)或下游),其對基因表達的影響也是不同的。同時,DNA甲基化不僅只影響基因轉錄,實際上其與組蛋白修飾、DNA突變、小RNA表達等都有非常復雜的相互調控作用。DNA甲基化是研究**為普遍的表觀遺傳修飾,它被認為在許多生物學過程和疾病中有著重要的作用。廣州目標甲基化重測序技術服務

DNA甲基化是表觀遺傳學修飾的主要形式,甲基化模式的異常促進細胞惡性轉化,參與tumour演進。許多基因具有tumour特異性的甲基化表型,一方面基因組普遍的低甲基化引起原cancer基因活化,基因組不穩(wěn)定性增加;另一方面啟動子區(qū)的高甲基化,引起抑cancer基因及錯配修復基因表達沉默,導致tumour的發(fā)生。研究表明,基因組的低甲基化隨著細胞惡性度的增加而愈加明顯,是病情診斷的重要指標;此外,CpG島局部的高甲基化發(fā)生于細胞惡變之前,能在早期預測tumour的發(fā)生,其也能有效地預測tumour的復發(fā)和轉移,在tumour的鑒別診斷中亦發(fā)揮重要作用。因此,檢測tumour發(fā)生中相關基因的甲基化模式具有重要意義,現(xiàn)就近年來中外文獻報道的甲基化檢測方法進行簡要的分析總結。廣州目標甲基化重測序技術服務DNA甲基化的位置主要集中在基因5′端的非編碼區(qū),DNA高度甲基化首先會影響DNA結構,引起基因沉默。

DNA甲基化是表觀遺傳學的重要內容。DNA甲基化是基因組DNA的一種主要表觀遺傳修飾形式。DNA甲基化修飾對于維持正常細胞功能、傳遞基因組遺傳印記、胚胎發(fā)育以及人類tumour發(fā)生,起著至關重要的作用。甲基化研究成為表觀遺傳學的熱點,相應的技術也是層出不窮,根據(jù)實驗目的的不同,這些技術大體能夠分成兩類:全基因組甲基化檢測技術以及特異性位點甲基化檢測技術。翼和特色內容目標區(qū)域甲基化測序自主知識產權超高重PCR為基礎,目標甲基化區(qū)段特異性捕獲,更具針對性,經(jīng)濟型基于二代測序,可以獲得目標區(qū)域內所有C的甲基化數(shù)據(jù)~500X的測序深度,精確計算每個位點C的甲基化程度通量高,可同時對成百上千個區(qū)域進行甲基化程度分析適用于大樣本多區(qū)域的DNA甲基化水平檢測Q30>80%檢出率90%以上,90%以上測序片段測序深度>10X。

DNA甲基化是指在甲基轉移酶的催化下,DNA的CG二核苷酸中的胞嘧啶被選擇性的添加甲基,形成5-甲基胞嘧啶,常見于基因的5′—CG—3′序列。DNA甲基化的位置主要集中在基因5′端的非編碼區(qū),DNA高度甲基化首先會影響DNA結構,進而阻遏基因轉錄,引起基因沉默。DNA甲基化為非編碼區(qū)(如內含子等)的長期沉默提供了一種有效的抑制機制?;騿訁^(qū)域內CpG位點的甲基化通過三種方式影響基因轉錄活性:DNA序列甲基化直接阻礙轉錄因子的結合;甲基CpG結合蛋白結合到甲基化CpG位點與其他轉錄抑制因子相互作用;染色質結構的凝集阻礙了轉錄因子與其調控序列的結合。DNA甲基化屬于表觀遺傳的范疇。

DNA甲基化能引起染色質結構、DNA構象、DNA穩(wěn)定性及DNA與蛋白質相互作用方式的改變,從而控制基因+表達。在甲基轉移酶的催化下,DNA的CG兩個核苷酸的胞嘧啶被選擇性地添加甲基,形成5-甲基胞嘧啶,這常見于基因的5'-CG-3'序列。大多數(shù)脊椎動物基因組DNA都有少量的甲基化胞嘧啶,主要集中在基因5’端的非編碼區(qū),并成簇存在。甲基化位點可隨DNA的復制而遺傳,因為DNA復制后,甲基化酶可將新合成的未甲基化的位點進行甲基化。DNA的甲基化可引起基因的失活。將序列與未經(jīng)處理的序列進行比較,判斷CpG位點是否發(fā)生甲基化。廣州目標甲基化重測序技術服務

如果在細胞分裂過程中不被糾正,就會誘發(fā)遺傳病或tumour,而且,生物體甲基化的方式是穩(wěn)定的, 可遺傳的。廣州目標甲基化重測序技術服務

DNA甲基化是研究 為普遍的表觀遺傳修飾,它被認為在許多生物學過程和疾病中有著重要的作用。隨著測序技術的快速發(fā)展,二代測序與重亞硫酸鹽處理基因組DNA相結合產生了可以在全基因組單堿基水平上測量DNA甲基化水平的全基因組重亞硫酸鹽測序(whole-genome bisulfite sequencing,WGBS)技術。WGBS的流程與全基因組DNA測序主要區(qū)別于DNA文庫的構建。以MethlyC-seq為例,將DNA 段化后收集特定長度的片段并修復DNA末端,再將雙端加上3′-dAMP然后連接上甲基化的接頭,接著用重亞硫酸鹽處理DNA使未甲基化的胞嘧啶(C)轉化為尿嘧啶(U), 終進行低循環(huán)數(shù)的PCR擴增后完成建庫,建庫完后上機測序,得到原始數(shù)據(jù)(fastq文件)后,完成一定的質量控制后就可以進行mapping分析。廣州目標甲基化重測序技術服務

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