河南全基因組甲基化重測(cè)序分析

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2021-10-23

DNA甲基化過(guò)程在一些生物學(xué)現(xiàn)象中起重要作用。例如,在原核生物中,它參與毒力、細(xì)胞周期調(diào)控、基因表達(dá)和對(duì)外源 DNA 導(dǎo)入的保護(hù)(DNA-宿主特異性)等過(guò)程。在高等真核生物中,DNA 甲基化參與調(diào)控染色體穩(wěn)定性、印記、X 染色體失活和cancer 變等多個(gè)細(xì)胞過(guò)程。在哺乳動(dòng)物中,DNA 甲基化主要發(fā)生在胞嘧啶堿基的第五個(gè)碳原子上,形成 5-甲基胞嘧啶或 5-甲基胞嘧啶核苷 (5-mC)。DNA甲基化幾乎只存在于CpG二核苷酸上,是一個(gè)關(guān)鍵的表觀遺傳標(biāo)記和基因表達(dá)調(diào)控因子?;騿?dòng)子或 CpG 島處的甲基化 CpG 簇與基因失活有關(guān)。DNA 甲基化由一個(gè)被稱為 DNA 甲基轉(zhuǎn)移酶并包括 DNMT1、DNMT3a 和 DNMT3b 的酶家族催化。DNMT3a 和 DNMT3b是從頭合成的甲基轉(zhuǎn)移酶,能夠甲基化之前未甲基化的 CpG二核苷酸。相反,DNMT1是一種維持性甲基轉(zhuǎn)移酶,在復(fù)制過(guò)程中修飾半甲基化的 DNA。DNA甲基化主要發(fā)生在CpG位點(diǎn)。在哺乳動(dòng)物中,70%到80%的CpG位點(diǎn)的胞嘧啶是甲基化的。河南全基因組甲基化重測(cè)序分析

目標(biāo)區(qū)域甲基化重測(cè)序(Hi-MethylSeq),又叫重亞硫酸鹽擴(kuò)增子測(cè)序(Bisulfite Amplicon Sequencing, BSAS)。在前期全基因組甲基化測(cè)序、全基因組甲基化芯片等工作基礎(chǔ)上,或者依據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道目的基因甲基化與性狀/疾病關(guān)聯(lián),選擇感興趣的目的區(qū)間或候選基因,利用Hi-MethylSeq技術(shù)對(duì)大規(guī)模群體的候選基因甲基化水平進(jìn)行檢測(cè)。Hi-MethylSeq技術(shù)通過(guò)亞硫酸氫鹽(bisulfite)處理,用多重PCR擴(kuò)增目的片段,添加barcode和測(cè)序通用接頭,在Illumina X10二代測(cè)序平臺(tái)對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行高通量測(cè)序,利用生物信息學(xué)方法,精確定量計(jì)算目標(biāo)區(qū)間內(nèi)的甲基化位點(diǎn)的甲基化狀態(tài),在完成目標(biāo)區(qū)域檢測(cè)的同時(shí)大幅降低研究費(fèi)用。廣州目標(biāo)甲基化重測(cè)序準(zhǔn)確度高亞硫酸氫鹽處理能夠?qū)⒒蚪M中未發(fā)生甲基化的C堿基轉(zhuǎn)換成U,進(jìn)行PCR擴(kuò)增后變成T。

DNA甲基化能引起染色質(zhì)結(jié)構(gòu)、DNA構(gòu)象、DNA穩(wěn)定性及DNA與蛋白質(zhì)相互作用方式的改變,從而控制基因+表達(dá)。在甲基轉(zhuǎn)移酶的催化下,DNA的CG兩個(gè)核苷酸的胞嘧啶被選擇性地添加甲基,形成5-甲基胞嘧啶,這常見(jiàn)于基因的5'-CG-3'序列。大多數(shù)脊椎動(dòng)物基因組DNA都有少量的甲基化胞嘧啶,主要集中在基因5’端的非編碼區(qū),并成簇存在。甲基化位點(diǎn)可隨DNA的復(fù)制而遺傳,因?yàn)镈NA復(fù)制后,甲基化酶可將新合成的未甲基化的位點(diǎn)進(jìn)行甲基化。DNA的甲基化可引起基因的失活。

DNA甲基化可以抑制基因表達(dá)。其機(jī)制是當(dāng)DNA甲基化出現(xiàn)在啟動(dòng)子區(qū),其會(huì)強(qiáng)化啟動(dòng)子序列的異染色質(zhì)化(染色體擰巴在一起),而使轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物無(wú)法接近和結(jié)合,從而強(qiáng)化基因的轉(zhuǎn)錄抑制。只有保持開(kāi)放性常染色質(zhì)狀態(tài)的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn),才能保證轉(zhuǎn)錄起始蛋白復(fù)合物可接近并結(jié)合這個(gè)區(qū)域,從而保證基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。當(dāng)DNA甲基化出現(xiàn)在編碼基因不同區(qū)域的時(shí)候(上游,基因區(qū)或下游),其對(duì)基因表達(dá)的影響也是不同的。同時(shí),DNA甲基化不僅只影響基因轉(zhuǎn)錄,實(shí)際上其與組蛋白修飾、DNA突變、小RNA表達(dá)等都有非常復(fù)雜的相互調(diào)控作用。DNA甲基化幾乎只存在于CpG二核苷酸上,是一個(gè)關(guān)鍵的表觀遺傳標(biāo)記和基因表達(dá)調(diào)控因子。

DNA甲基化一般是指DNA復(fù)制后,在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的作用下,將S-腺甘酰甲硫氨酸分子上的甲基轉(zhuǎn)移到DNA分子中胞嘧啶殘基的第5位碳原子上,形成5-甲基胞嘧啶的過(guò)程,它是真核細(xì)胞生物基因組重要的修飾方式之一。DNA甲基化包括從頭甲基化和維持甲基化2種模式。從頭甲基化是指在從未發(fā)生甲基化的位點(diǎn)上發(fā)生甲基化修飾,建立DNA甲基化的過(guò)程;而維持甲基化是指維持甲基化的酶可識(shí)別新合成的半甲基化雙鏈DNA,并將甲基添加到新鏈的非甲基化胞嘧啶上。上海翼和生物通過(guò)亞硫酸氫鹽(bisulfite)處理,用多重PCR擴(kuò)增目的片段,添加barcode和測(cè)序通用接頭。安徽CPG島甲基化重測(cè)序準(zhǔn)確度高

上海翼和生物甲基化測(cè)序采用的是重亞硫酸鹽擴(kuò)增子測(cè)序法,重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化是研究DNA甲基化的金標(biāo)方法。河南全基因組甲基化重測(cè)序分析

DNA甲基化是指在甲基轉(zhuǎn)移酶的催化下,DNA的CG二核苷酸中的胞嘧啶被選擇性的添加甲基,形成5-甲基胞嘧啶,常見(jiàn)于基因的5′—CG—3′序列。DNA甲基化的位置主要集中在基因5′端的非編碼區(qū),DNA高度甲基化首先會(huì)影響DNA結(jié)構(gòu),進(jìn)而阻遏基因轉(zhuǎn)錄,引起基因沉默。DNA甲基化為非編碼區(qū)(如內(nèi)含子等)的長(zhǎng)期沉默提供了一種有效的抑制機(jī)制?;騿?dòng)區(qū)域內(nèi)CpG位點(diǎn)的甲基化通過(guò)三種方式影響基因轉(zhuǎn)錄活性:DNA序列甲基化直接阻礙轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合;甲基CpG結(jié)合蛋白結(jié)合到甲基化CpG位點(diǎn)與其他轉(zhuǎn)錄抑制因子相互作用;染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的凝集阻礙了轉(zhuǎn)錄因子與其調(diào)控序列的結(jié)合。河南全基因組甲基化重測(cè)序分析

上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司坐落在龍騰路1015弄中星創(chuàng)意園2號(hào)502,是一家專業(yè)的第三方檢測(cè)服務(wù);生物專業(yè)領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開(kāi)發(fā)、技術(shù)咨詢、技術(shù)服務(wù);健康衰老評(píng)估;大健康檢測(cè);遺傳學(xué)技術(shù)服務(wù);生物醫(yī)藥行業(yè)質(zhì)控檢測(cè)技術(shù)技術(shù)服務(wù);小鼠遺傳品系鑒定;轉(zhuǎn)基因小鼠基因型鑒定;細(xì)胞點(diǎn)突變檢測(cè);細(xì)胞端粒長(zhǎng)度和端粒酶活性檢測(cè)。公司。目前我公司在職員工以90后為主,是一個(gè)有活力有能力有創(chuàng)新精神的團(tuán)隊(duì)。上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司主營(yíng)業(yè)務(wù)涵蓋細(xì)胞組織小鼠質(zhì)控,大健康檢測(cè),生物技術(shù)服務(wù),堅(jiān)持“質(zhì)量保證、良好服務(wù)、顧客滿意”的質(zhì)量方針,贏得廣大客戶的支持和信賴。公司憑著雄厚的技術(shù)力量、飽滿的工作態(tài)度、扎實(shí)的工作作風(fēng)、良好的職業(yè)道德,樹立了良好的細(xì)胞組織小鼠質(zhì)控,大健康檢測(cè),生物技術(shù)服務(wù)形象,贏得了社會(huì)各界的信任和認(rèn)可。