DNA甲基化是表觀遺傳學(xué)的重要內(nèi)容。DNA甲基化是基因組DNA的一種主要表觀遺傳修飾形式。DNA甲基化修飾對于維持正常細胞功能、傳遞基因組遺傳印記、胚胎發(fā)育以及人類tumour發(fā)生，起著至關(guān)重要的作用。甲基化研究成為表觀遺傳學(xué)的熱點，相應(yīng)的技術(shù)也是層出不窮，根據(jù)實驗?zāi)康牡牟煌?，這些技術(shù)大體能夠分成兩類：全基因組甲基化檢測技術(shù)以及特異性位點甲基化檢測技術(shù)。翼和特色內(nèi)容目標區(qū)域甲基化測序自主知識產(chǎn)權(quán)超高重PCR為基礎(chǔ)，目標甲基化區(qū)段特異性捕獲，更具針對性，經(jīng)濟型基于二代測序，可以獲得目標區(qū)域內(nèi)所有C的甲基化數(shù)據(jù)~500X的測序深度，精確計算每個位點C的甲基化程度通量高，可同時對成百上千個區(qū)域進行甲基化程度分析適用于大樣本多區(qū)域的DNA甲基化水平檢測Q30＞80%檢出率90%以上，90%以上測序片段測序深度＞10X。重亞硫酸鹽測序可以從單個堿基水平分析基因組中甲基化的胞嘧啶。廣州目標區(qū)段甲基化重測序公司
Hi-Methylseq結(jié)合了亞硫酸鹽轉(zhuǎn)換、靶向擴增子高通量測序技術(shù)，可實現(xiàn)多區(qū)段、多位點的甲基化精確定量分析，適用于感興趣的目的片段的甲基化研究和在大樣本中進一步確認全基因組甲基化研究挑選的陽性位點。采用翼和自主知識產(chǎn)權(quán)的多重PCR捕獲技術(shù)，確保目的片段有效富集，經(jīng)亞硫酸氫鹽處理后，DNA序列復(fù)雜度嚴重降低，嚴格控制建庫PCR的循環(huán)數(shù)，降低非特異性擴增，通過將參考序列中的C堿基全部替換為T堿基，然后將測序reads比對到轉(zhuǎn)換后的參考序列上，針對每一個CpG位點，統(tǒng)計C和T堿基的讀數(shù)（類似于SNP calling），來判斷該位點的甲基化。蘇州目標區(qū)段甲基化重測序送樣要求DNA復(fù)制后胞嘧啶的甲基化會改變DNA的構(gòu)象，使DNA的大溝無法與DNA結(jié)合蛋白正常結(jié)合。
在生物系統(tǒng)內(nèi)，甲基化是經(jīng)酶催化的，這種甲基化涉及重金屬修飾、基因表達的調(diào)控、蛋白質(zhì)功能的調(diào)節(jié)以及核糖核酸(RNA)加工。重金屬修飾可以在生物系統(tǒng)外發(fā)生。組織樣本的化學(xué)甲基化也是組織染色的方法之一。表觀遺傳學(xué)的甲基化包括DNA甲基化或蛋白質(zhì)甲基化。1）DNA甲基化。脊椎動物的DNA甲基化一般發(fā)生在CpG位點（胞嘧啶-磷酸-鳥嘌呤位點，即DNA序列中胞嘧啶后緊連鳥嘌呤的位點）。經(jīng)DNA甲基轉(zhuǎn)移酶催化胞嘧啶轉(zhuǎn)化為5-甲基胞嘧啶。人類基因中約80%-90%的CpG位點已被甲基化，但是在某些特定區(qū)域，如富含胞嘧啶和鳥嘌呤的CpG島則未被甲基化。這與包含所有普遍表達基因在內(nèi)的56%的哺乳動物基因中的啟動子有關(guān)。1%-2%的人類基因組是CpG群，并且CpG甲基化與轉(zhuǎn)錄活性成反比。
DNA甲基化是表觀遺傳調(diào)控的常見機制。啟動子區(qū)域的高度甲基化可導(dǎo)致基因表達改變。甲基化多發(fā)生于胞嘧啶（cytosine, C）位置。在細胞和組織分化、疾病發(fā)生以及適應(yīng)環(huán)境等過程中，甲基化狀態(tài)可發(fā)生改變。高精確度全基因組甲基化修飾狀態(tài)的分析，將為發(fā)育、育種、tumour標志物鑒定或藥物靶標尋找等研究奠定基礎(chǔ)。全基因組甲基化測序結(jié)合了亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化（bisulfite conversion）方法與新一代高通量測序技術(shù)，可在單堿基分辨率水平上高效地檢測全基因組DNA甲基化狀態(tài)。亞硫酸氫鹽處理可以使DNA中未發(fā)生甲基化的胞嘧啶脫氨基轉(zhuǎn)變成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不變，PCR擴增所需片段，則尿嘧啶全部轉(zhuǎn)化成胸腺嘧啶。對PCR產(chǎn)物進行高通量測序，與參考序列比對，即可判斷CpG/CHG/CHH位點是否發(fā)生甲基化。WGBS的流程與全基因組DNA測序主要區(qū)別于DNA文庫的構(gòu)建。
DNA甲基化屬于表觀遺傳的范疇。表觀遺傳屬于一種可以對環(huán)境產(chǎn)生應(yīng)答和改變的遺傳機制。機體細胞在經(jīng)歷脅迫、創(chuàng)傷等環(huán)境變化后，會產(chǎn)生特定的應(yīng)答，并往往會用DNA甲基化、組蛋白修飾等形式將應(yīng)激的模式記錄在DNA修飾中。這種脅迫記憶可以幫助細胞在面臨下一次應(yīng)激的時候快速適應(yīng)。同時，這種表觀修飾可以通過遺傳的方式傳遞給下一代細胞。對于高等動植物，通常壽命都比較漫長。在漫長的一生中，一方面機體會經(jīng)歷大量的環(huán)境應(yīng)答，另一方面細胞將會分裂多代。那么機體就更需要將應(yīng)答的信息，存儲在DNA甲基化中傳遞給后代的細胞，以提高這個物種的環(huán)境適應(yīng)能力。這種DNA修飾方式在不改變基因序列前提下實現(xiàn)對基因表達的調(diào)控。浙江目標區(qū)段甲基化重測序哪個公司做
DNA甲基化可引起基因組中相應(yīng)區(qū)域染色質(zhì)結(jié)構(gòu)變化,使DNA失去核酶限制性內(nèi)切酶的切割位點,。廣州目標區(qū)段甲基化重測序公司
表觀遺傳學(xué)研究已經(jīng)證實了特定基因區(qū)域的DNA甲基化修飾對于染色體構(gòu)象、基因表達調(diào)控機制有著重要影響，而全基因組DNA甲基化研究將是表觀基因組學(xué)為關(guān)注的內(nèi)容之一。Bisulfite處理能夠?qū)⒒蚪M中未發(fā)生甲基化的C堿基轉(zhuǎn)換成U，進行PCR擴增后變成T，與原本具有甲基化修飾的C堿基區(qū)分開來，再結(jié)合高通量測序技術(shù)，可繪制單堿基分辨率的全基因組DNA甲基化圖譜。特定物種的高精確度甲基化修飾模式的分析，必將在表觀基因組學(xué)研究中具有里程碑式的意義，并且為細胞分化、組織發(fā)育等基礎(chǔ)機制研究，以及動植物育種、人類健康與疾病研究奠定基礎(chǔ)。廣州目標區(qū)段甲基化重測序公司
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