5甲基胞嘧啶 (5-methylcytosine, 5mC) 是一種常見的DNA修飾類型，能調(diào)節(jié)基因表達(dá)、轉(zhuǎn)座子及染色體的狀態(tài)等。全基因組重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化的WGBS法，能夠?qū)崿F(xiàn)單堿基分辨率的甲基化位點(diǎn)準(zhǔn)確、高效定位。通過***分析不同處理方式下的全基因組甲基化水平，快速準(zhǔn)確鑒定出差異甲基化區(qū)域，有助于我們更加***深入地了解動(dòng)、植物的甲基化模式和表觀調(diào)控機(jī)制，在動(dòng)物行為、植物脅迫、植物性狀、胚胎發(fā)育、cancer疾病、生物標(biāo)記物等方面具有普遍的應(yīng)用。以MethlyC-seq為例，將DNA段化后收集特定長度的片段并修復(fù)DNA末端.成都目標(biāo)位點(diǎn)甲基化重測(cè)序分析
Hi-Methylseq結(jié)合了亞硫酸鹽轉(zhuǎn)換、靶向擴(kuò)增子高通量測(cè)序技術(shù)，可實(shí)現(xiàn)多區(qū)段、多位點(diǎn)的甲基化精確定量分析，適用于感興趣的目的片段的甲基化研究和在大樣本中進(jìn)一步確認(rèn)全基因組甲基化研究挑選的陽性位點(diǎn)。采用翼和自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的多重PCR捕獲技術(shù)，確保目的片段有效富集，經(jīng)亞硫酸氫鹽處理后，DNA序列復(fù)雜度嚴(yán)重降低，嚴(yán)格控制建庫PCR的循環(huán)數(shù)，降低非特異性擴(kuò)增，通過將參考序列中的C堿基全部替換為T堿基，然后將測(cè)序reads比對(duì)到轉(zhuǎn)換后的參考序列上，針對(duì)每一個(gè)CpG位點(diǎn)，統(tǒng)計(jì)C和T堿基的讀數(shù)（類似于SNP calling），來判斷該位點(diǎn)的甲基化。蘇州目標(biāo)區(qū)段甲基化重測(cè)序技術(shù)服務(wù)常規(guī)全基因組甲基化測(cè)序技術(shù)通過T4-DNA連接酶，在超聲波打斷基因組DNA段的兩端連接接頭序列。
DNA甲基化是在DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(Dnmt)的作用下將甲基選擇性地添加到胞嘧啶上形成5-胞嘧啶的過程，剛被發(fā)現(xiàn)時(shí)被定義為第五種堿基，實(shí)際上它是一種重要的表觀遺傳學(xué)標(biāo)記，在調(diào)控基因表達(dá)、維持染色質(zhì)結(jié)構(gòu)、基因印記、X染色體失活以及胚胎發(fā)育等生物學(xué)過程中發(fā)揮著重大的作用，獲得全基因組范圍內(nèi)所有C位點(diǎn)的甲基化水平數(shù)據(jù)，對(duì)表觀遺傳學(xué)的時(shí)空特異性研究具有重要意義，Bisulfite甲基化測(cè)序是以新一代高通量測(cè)序平臺(tái)為基礎(chǔ)，結(jié)合全基因組Bisulfite處理和生物信息數(shù)據(jù)分析技術(shù)，進(jìn)行低成本、高效率、高準(zhǔn)確度的全基因組DNA甲基化水平圖譜繪制。
在表觀遺傳中，DNA甲基化修飾具有非常重要的地位。其中胞嘧啶雜環(huán)5號(hào)位的甲基化修飾，又稱作5-甲基胞嘧啶（5mC），是**常見的甲基化修飾方式，也是迄今為止研究**為普遍的DNA甲基化修飾方式。一般認(rèn)為當(dāng)DNA甲基化出現(xiàn)在基因啟動(dòng)子區(qū)，就會(huì)抑制基因轉(zhuǎn)錄，從而起到負(fù)調(diào)控的作用。DNA甲基化的形成機(jī)制，包括從頭合成（de novo），甲基化的維持（Maintenance）和去甲基化（Demethylation），這些過程分別由不同的基因和通路調(diào)控。這些基因和通路在動(dòng)植物中即保守，又有所區(qū)別。重亞硫酸鹽測(cè)序可以從單個(gè)堿基水平分析基因組中甲基化的胞嘧啶。
WGBS（Whole Genome Bisulfite Sequence）全基因組甲基化測(cè)序，利用重亞硫酸氫鹽使DNA中未發(fā)生甲基化的胞嘧啶(C)脫氨基轉(zhuǎn)變成尿嘧啶(U)，而甲基化的胞嘧啶保持不變，然后通過PCR將U變?yōu)锳，*有甲基化的C可以成功保留，***通過測(cè)序就可判斷CpG位點(diǎn)是否發(fā)生甲基化。特點(diǎn)是精確度高、重復(fù)性好，檢測(cè)范圍廣，可以覆蓋全基因組范圍內(nèi)的每一個(gè)C堿基的甲基化狀態(tài)；但需要的數(shù)據(jù)量比較大，成本較高。上海翼和生物是上海市遺傳學(xué)會(huì)理事單位，上海市高新技術(shù)企業(yè)，至今已有16年的歷史。Hi-Methylseq方案一次測(cè)序反應(yīng)每個(gè)位點(diǎn)測(cè)序上百次節(jié)約時(shí)間、成本、定量準(zhǔn)確。杭州亞硫酸鹽甲基化重測(cè)序怎么解決
DNA甲基化在DNA復(fù)制起始、錯(cuò)配修復(fù)以及轉(zhuǎn)座子的失活等過程中對(duì)維持遺傳信息的穩(wěn)定性發(fā)揮著重要的作用。成都目標(biāo)位點(diǎn)甲基化重測(cè)序分析
DNA甲基化即在DNA上增加甲基基團(tuán)，是使基因的轉(zhuǎn)錄抑制或沉默的主要方式。該修飾特異性地發(fā)生在CpG位點(diǎn)，胞嘧啶通過磷酸鹽與鳥苷酸連接(圖1)。甲基基團(tuán)的插入改變了DNA的表觀和結(jié)構(gòu)，可能會(huì)直接阻礙DNA的識(shí)別及與轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合，或者吸引其他因子優(yōu)先與DNA結(jié)合，干擾轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合。目前已鑒定了三個(gè)與甲基化DNA結(jié)合的蛋白家族，包括MBD蛋白、Kaiso和Kaiso樣蛋白、以及SRA蛋白。通過招募這些蛋白，DNA甲基化可促進(jìn)某些組蛋白狀態(tài)的維持，如去乙酰作用，從而保持轉(zhuǎn)錄后的組蛋白修飾。例如，MBD家族的甲基CpG結(jié)合蛋白2(MeCP2)與甲基CpG結(jié)合，招募HDACs，可促使染色體濃縮和轉(zhuǎn)錄抑制。成都目標(biāo)位點(diǎn)甲基化重測(cè)序分析
上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司位于龍騰路1015弄中星創(chuàng)意園2號(hào)502，交通便利，環(huán)境優(yōu)美，是一家服務(wù)型企業(yè)。公司是一家私營有限責(zé)任公司企業(yè)，以誠信務(wù)實(shí)的創(chuàng)業(yè)精神、專業(yè)的管理團(tuán)隊(duì)、踏實(shí)的職工隊(duì)伍，努力為廣大用戶提供高品質(zhì)的產(chǎn)品。公司擁有專業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊(duì)，具有細(xì)胞組織小鼠質(zhì)控，大健康檢測(cè)，生物技術(shù)服務(wù)等多項(xiàng)業(yè)務(wù)。翼和生物順應(yīng)時(shí)代發(fā)展和市場(chǎng)需求，通過高端技術(shù)，力圖保證高規(guī)格高質(zhì)量的細(xì)胞組織小鼠質(zhì)控，大健康檢測(cè)，生物技術(shù)服務(wù)。