安徽微衛(wèi)星SSRSNP分型準(zhǔn)確度高

來源: 發(fā)布時(shí)間:2021-10-19

高分辨率熔解(High-resolutionmelting,簡稱HRM)分析是一門新興的技術(shù)。它通過PCR之后的熔解曲線分析,就能檢測PCR片段的微小序列差異,從而應(yīng)用在突變掃描、序列配對和基因分型等多個(gè)方面。憑借其速度和簡便性,高分辨率熔解這種方法正在迅速普及。其實(shí)雙鏈DNA的熔解分析可追溯到上世紀(jì)六十年代,當(dāng)時(shí)是通過紫外吸收來監(jiān)測的。分析需要幾微克的DNA,而樣品以0.1-1.0°C/分鐘的速率緩慢加熱,常常要花上幾個(gè)小時(shí)才能完成。后來,LightCycler定量PCR儀的出現(xiàn),讓熒光熔解分析變得流行。樣品量因毛細(xì)管而縮減至納克級,且熔解速率更快,達(dá)0.1-1.0°C/秒,這樣熔解時(shí)間縮短至幾分鐘。當(dāng)時(shí)使用的染料是SYBR?GreenI。SNP在基礎(chǔ)研究領(lǐng)域發(fā)揮著巨大作用。安徽微衛(wèi)星SSRSNP分型準(zhǔn)確度高

3.HRM法高分辨率熔解曲線分析(HRM)是近幾年興起的SNP研究工具,它通過實(shí)時(shí)監(jiān)測升溫過程中雙鏈DNA熒光染料與PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的結(jié)合情況,來判斷是否存在SNP,而且不同SNP位點(diǎn)、是否是雜合子等都會影響熔解曲線的峰形,因此HRM分析能夠有效區(qū)分不同SNP位點(diǎn)與不同基因型。這種檢測方法不受突變堿基位點(diǎn)與類型的局限,無需序列特異性探針,在PCR結(jié)束后直接運(yùn)行高分辨率熔解,即可完成對樣品基因型的分析。該方法無需設(shè)計(jì)探針,操作簡便、快速,成本低,結(jié)果準(zhǔn)確,并且實(shí)現(xiàn)了真正的閉管操作。北京STR基因SNP分型外包服務(wù)對于SNP 研究,我個(gè)人的感覺是:曾經(jīng)非常的“熱”過,而現(xiàn)在,似乎有些降溫。

相信大家都聽過或已經(jīng)接觸過一些常用的分型方法,如片段長度多態(tài)性(限制性內(nèi)切酶)法,直接測序法,Taqman熒光探針法,LDR連接酶檢測反應(yīng)法,競爭性等位基因特異性PCR法(KASP),二代測序法等,小E就針對以上幾種常用分型方法為大家做一個(gè)介紹和總結(jié)。上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限上海翼和專家團(tuán)隊(duì)富有開創(chuàng)精神,朝氣蓬勃,在肖君華博士的帶領(lǐng)下,秉承“專業(yè)、協(xié)作、進(jìn)取”的企業(yè)精神,為科研用戶提供性價(jià)比高、高質(zhì)量可靠的遺傳學(xué)技術(shù)服務(wù)和產(chǎn)品。

我們利用多重PCR+二代測序技術(shù)為各專業(yè)用戶提供大規(guī)模的SNP分型,目標(biāo)區(qū)段的重測序,目標(biāo)區(qū)段甲基化測序。我們服務(wù)過的高質(zhì)量客戶包括:復(fù)旦大學(xué)金力院士團(tuán)隊(duì)、上海交通大學(xué)賀林院士團(tuán)隊(duì)和中科院韓斌院士團(tuán)隊(duì)。上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司總公司(地址):上海市松江區(qū)龍騰路1015弄中星創(chuàng)意園2號502上海翼和專家團(tuán)隊(duì)富有開創(chuàng)精神,朝氣蓬勃,在肖君華博士的帶領(lǐng)下,秉承“專業(yè)、協(xié)作、進(jìn)取”的企業(yè)精神,為科研用戶提供性價(jià)比高、高質(zhì)量可靠的遺傳學(xué)技術(shù)服務(wù)和產(chǎn)品。對于候選SNP的遴選,有很多種考慮,總的趨勢和出發(fā)點(diǎn)是能夠涵蓋的SNP越多越好。

這種熔解分析只能區(qū)分在片段大小和GC含量上差別較比較明顯的DNA序列,比如檢查PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中是否存在引物二聚體及其他非特異性的擴(kuò)增。如果要區(qū)分SNP,分辨率還不夠。為什么呢?這里有必要先介紹一下飽和染料和非飽和染料。SYBRGreenI就屬于非飽和性染料,由于它對PCR的抑制作用,在實(shí)驗(yàn)中的使用濃度很低,遠(yuǎn)未將DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)中的小溝飽和。這樣,DNA雙鏈高溫變性時(shí),單鏈部分的熒光染料分子發(fā)生重排,熒光染料分子重新結(jié)合到雙鏈DNA的空置位點(diǎn),造成熒光信號沒有變化,因此出現(xiàn)假陰性,特異性下降。由于SNP的二態(tài)性,非此即彼,在基因組篩選中SNPs往往只需+/-的分析這就利于發(fā)展自動化技術(shù)篩選或檢測SNPs.廣東微衛(wèi)星標(biāo)記SNP分型質(zhì)量好

只是偶是做tumour的,所以提Cancer Research提得比較多。安徽微衛(wèi)星SSRSNP分型準(zhǔn)確度高

《CandidateGenePolymorphismsandtheirAssociationwithGlycogenContentinthePacificOysterCrassostreagigas》本文作者在野生群體中進(jìn)行了候選基因關(guān)聯(lián)分析,選擇90個(gè)候選基因以及295個(gè)SNP位點(diǎn),并且結(jié)合目標(biāo)基因捕獲測序分型732個(gè)SNP位點(diǎn)。發(fā)現(xiàn)Cg_GD1基因(glycogendebranchingenzyme)中的兩個(gè)SNP位點(diǎn)(Cg_SNP_TY202andCg_SNP_3021)inCg_GD1(glycogendebranchingenzyme)和Cg_GP1基因(glycogenphosphorylase)中的一個(gè)SNP位點(diǎn)(Cg_SNP_4)與糖原含量相關(guān),基因表達(dá)量分析顯示這兩個(gè)基因在高糖原與低糖原中的表達(dá)量也有比較明顯差異。安徽微衛(wèi)星SSRSNP分型準(zhǔn)確度高

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