CCK-8沒有具體規(guī)定反應(yīng)時間的長短，以具體反映比較好顯色的時間為主。因為不同的細(xì)胞反應(yīng)時間、顯色標(biāo)準(zhǔn)都不一樣，所以一定要設(shè)置預(yù)實驗。預(yù)實驗中，可以先做幾個孔摸索一下接種數(shù)量和培養(yǎng)時間。3、懸浮細(xì)胞比貼壁細(xì)胞難顯色。在加入CCK-8培養(yǎng)后，可每隔一小時觀測一下顏色的變化情況，或者之間用酶標(biāo)儀檢測更為準(zhǔn)確。4、CCK8作用時間越長，OD值就越大，所以對于作用時間也不是越長久越好，要把OD值控制在1左右。5、CCK8要求檢測孔內(nèi)不能有氣泡。***篩選：在測定一個***的毒性和安全有效濃度時，經(jīng)常會用到CCK-8。湖北cck8 ic50
實驗原理：CellCountingKit-8（簡稱CCK-8）試劑可用于簡便而準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖和毒性分析。其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazandye）。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。江蘇cck8詳細(xì)CCK8檢測細(xì)胞增殖和毒性實驗.
CCK8檢測細(xì)胞增殖/毒性的注意事項：1.加入CCK8溶液時不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)；2.要設(shè)計空白對照組；3.對于大多數(shù)情況，加入CCK8溶液后，孵育2h左右就可以了；4.使用酶標(biāo)儀之前要提前開啟10min預(yù)熱；5.若連續(xù)多天檢測，必須保持所有條件一致。相關(guān)鏈接：CCK8的特性、保存方法以及與BrdU的區(qū)別CCK8空白對照，測定參比波長的設(shè)定以及OD值的合適范圍CCK8標(biāo)準(zhǔn)曲線、檢測時間、終止反應(yīng)以及減少加樣誤差的方法外界因素(金屬/***/細(xì)菌/培養(yǎng)基/培養(yǎng)板)對CCK8測定的影響細(xì)胞因素(預(yù)培養(yǎng)/生長方式/狀態(tài)/細(xì)胞數(shù)/死細(xì)胞)對CCK8測定的影響細(xì)胞增殖到底用MTT還是CCK8呢?
CCK-8的用途1.細(xì)胞增殖測定：細(xì)胞增殖實驗在很多領(lǐng)域都會用到，比如**相關(guān)、損傷后修復(fù)等。2.***篩選：在測定一個***的毒性和安全有效濃度時，經(jīng)常會用到CCK-8。3.細(xì)胞毒性測定：這個可以和各個處理因素對細(xì)胞活性和增殖的影響，比如在UV、低氧或者什么化學(xué)物品對細(xì)胞的影響上。4.**藥敏試驗：這個是用的比較廣的，我見過做**的團(tuán)隊，買CCK-8都是一整箱，一整箱的買，比如果子老師所在的團(tuán)隊，哈哈哈。5.微生物對細(xì)胞的毒性或增殖的實驗MTT與CCK8區(qū)別是什么?
統(tǒng)一鋪好后，待細(xì)胞完全沉淀下來后，在顯微鏡下觀察各實驗組的細(xì)胞密度，如果密度不均勻，則固定一組，微調(diào)其他組細(xì)胞的量再次鋪板（如：發(fā)現(xiàn)NC組細(xì)胞較多，降低細(xì)胞量再次鋪板），放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。4.從鋪板后第二天開始，每孔加入10-20μlCCK-8溶液，如果每孔的培養(yǎng)基為100μl，則加入10μlCCK-8溶液，如果每孔的培養(yǎng)基為200μl，則加入20μlCCK-8溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）。用加了相應(yīng)量細(xì)胞培養(yǎng)液和CCK-8溶液但沒有加入細(xì)胞的孔作為空白對照。CCK8原理、優(yōu)勢和步驟.湖北貼壁細(xì)胞 cck8操作細(xì)節(jié)
加入CCK8那會空白對照組的細(xì)胞剛好長滿嗎？湖北cck8 ic50
。一般情況下，**外一圈的孔只加培養(yǎng)基，不作為測定孔用。在培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時間，測定450 nm的吸光度即為空白對照。在做加藥實驗時，還應(yīng)考慮***的吸收，可在加入***的培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時間，測定450 nm的吸光度作為空白對照。金屬對CCK-8顯色有影響：當(dāng)終濃度為1mM的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會***5%、15%、90%的顯色反應(yīng)，使靈敏度降級。如果終濃度是10 mM的話，將會*****。懸浮細(xì)胞由于染色比較困難，一般需要增加細(xì)胞數(shù)量和延長培養(yǎng)時間。湖北cck8 ic50
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