湖北cck8細(xì)胞活性實驗

7、若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內(nèi)測定，吸光度不會發(fā)生變化。注意：如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉***影響。當(dāng)然***影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入***后的空白吸收即可?；盍τ嬎悖罕４鏃l件：4℃避光保存一年有效，-20℃避光保存兩年有效。生成的甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比.湖北cck8細(xì)胞活性實驗

酚紅和血清對CCK8法的檢測不會造成干擾，可以通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去。

· CCK8可以檢測大腸桿菌，但不能檢測酵母細(xì)胞。在細(xì)胞增殖實驗每次測定的過程中需要避免細(xì)菌污染，以免影響結(jié)果。

· CCK-8在0-5℃下能夠保存至少6個月，在-20℃下避光可以保存1年。

· 當(dāng)在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)時，培養(yǎng)板**外一圈的孔**容易干燥揮發(fā)，由于體積不準(zhǔn)確而增加誤差。一般情況下，**外一圈的孔加培養(yǎng)基或者PBS，不作為測定孔用。

· 在培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時間，測定450 nm的吸光度即為空白對照。在做加藥實驗時，還應(yīng)考慮***的吸收，可在加入***的培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時間，測定450 nm的吸光度作為空白對照。 江蘇mts cck8用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度。

CellCountingKit-8（簡稱CCK-8）試劑可用于簡便而準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖和毒性分析。其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】。它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazandye）。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。

細(xì)胞增殖實驗就是對細(xì)胞生長的測定，常用的方法有MTT、CCK8以及流式檢測。閱讀大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，如果想證明一個***或者說是一個作用條件對細(xì)胞生長的影響，基本上大家都采用MTT或CCK8結(jié)合流式的雙標(biāo)準(zhǔn)來證明作用效果。所以，***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實驗操作和注意事項。MTT實驗操作1、在96孔板中培養(yǎng)細(xì)胞，設(shè)置對照組（細(xì)胞+無血清培養(yǎng)基）、實驗組和空白組（無血清培養(yǎng)基），可以采用如下圖的排版方式：2、在對照組和實驗組中，每孔加入細(xì)胞懸液100ul,培養(yǎng)24小時將她培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。

二、優(yōu)點：·使用方便，省去了洗滌細(xì)胞，不需要放射性同位素和有機(jī)溶劑；·CCK-8法能快速檢測；·CCK-8法的檢測靈敏度很高，甚至可以測定較低細(xì)胞密度；·CCK-8法的重復(fù)性優(yōu)于MTT法，MTT實驗生成的formazan不是水溶性的，需要使用DMSO等有機(jī)溶劑溶解；而本方法產(chǎn)生的formazan是水溶性的，不但省去了溶解步驟，更因此而減少了該操作步驟帶來的誤差；·CCK-8法對細(xì)胞毒性小，可以多次測定選取比較好測定時間，與MTT方法相比線性范圍更寬，靈敏度更高；·CCK-8細(xì)胞活性檢測試劑中為1瓶溶液，毋需預(yù)制，即開即用。CCK8檢測細(xì)胞增殖和毒性實驗.北京cck8結(jié)果圖怎么做

加入CCK8那會空白對照組的細(xì)胞剛好長滿嗎？湖北cck8細(xì)胞活性實驗

讀數(shù)前可在搖床上溫柔混勻，酶標(biāo)儀在 450nm 波長處檢測每孔的吸光度。

***率（％）= [（對照孔吸光度-實驗孔吸光度）/（對照孔吸光度-空白孔吸光度）]×100=IC50

注意事項

CCK8法檢測細(xì)胞生長情況基于的原理是脫氫酶催化的反應(yīng)，如果實驗處理條件中存在還原劑的影響，應(yīng)事先去除。如果實驗條件中存在還原物質(zhì)，需單獨測定還原物質(zhì)的空白吸光度。如果還原物質(zhì)的吸光度很小，可以忽略不計；但如果吸光度很大，則需要去除培養(yǎng)基，再用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞3次，然后再加入新的 100ul培養(yǎng)基和10ul CCK-8 溶液進(jìn)行檢測。 湖北cck8細(xì)胞活性實驗

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