凍存細(xì)胞類型:臍血及臍帶組織、外周血、間充質(zhì)干細(xì)胞、多能干細(xì)胞、組織樣本等
① 用于減輕冷凍和解凍復(fù)蘇期間由溫度引起的分子應(yīng)激反應(yīng)
② 分別以2%、5%或10%USP級的二甲基亞砜(DMSO)預(yù)先配制即用型細(xì)胞凍存液
凍存細(xì)胞類型:臍血及臍帶組織、外周血和骨髓
① BloodStor®55-5以55%(重量/體積)的DMSO(USP)級、5%(重量/體積)的葡萄糖-40(USP)級和注射液(WFI)級別的水預(yù)先配制
② BloodStor®100含有**(重量/體積)的DMSO(USP級)
細(xì)胞凍存液一般有兩種配置方法是什么?吉林無血清細(xì)胞凍存液如何保存
細(xì)胞凍存的操作步驟是什么
配制含10%DMSO或甘油、10~20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液;
取對數(shù)生長期的細(xì)胞,去除舊培養(yǎng)液,用PBS清洗。
去除PBS,加入適量胰蛋白酶(覆蓋培養(yǎng)皿表面)把單層生長的細(xì)胞消化下來;
離心1000rpm,5min;
去除胰蛋白酶,加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液,用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻,計(jì)數(shù),調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的**終密度為5×106/ml~1×107/ml;
將細(xì)胞分裝入凍存管中,每管1~1.5 ml;
在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱,凍存時(shí)間及操作者;
凍存:標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1~-2℃/ min;當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí),可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃時(shí),則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ,然后放入-70℃冰箱中過夜,取出凍存管,移入液氮容器內(nèi)。 江蘇通用型無血清細(xì)胞凍存液是什么顏色細(xì)胞凍存液取對數(shù)成長期的體細(xì)胞,除去舊細(xì)胞培養(yǎng)液,用PBS清理.
一些凍存液能夠通過降低某種溶液或者物質(zhì)的玻璃化溫度,使溶液在玻璃化的過程中仍保持一定的流動(dòng)性。很多的凍存液也能通過氫鍵的形成來發(fā)揮作用(由于將水分子替物材料能夠保持原始的生理結(jié)構(gòu)和功能,這種保存方法主要用于低濕休眠。
2. 多種混合的凍存液含有更少的細(xì)胞毒性,通常會(huì)比單一的凍存液使用更加有效。帶有二甲基亞砜(DMSO),丙二醇(Propylene glycol),膠質(zhì)(Colloid)的甲酰胺(Formamide)是這么多年以來**為有效的人工制造的凍存液,同時(shí)凍存液的混合物也經(jīng)常被用于玻璃化。
3、取待凍存的細(xì)胞用胰蛋白酶消化(方法見細(xì)胞的傳代部分)。用含血清的培養(yǎng)基將細(xì)胞沖洗下來,將細(xì)胞懸液吸到無菌離心管中,800r/min離心5min,棄上清,收集細(xì)胞沉淀。如果是懸浮生長的細(xì)胞,則可直接離心收集細(xì)胞。
4、在沉淀中加入適量凍存液制成細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度宜大,300萬/mL左右,一般一個(gè)中方瓶中的細(xì)胞濃縮至1mL,凍存液中為宜。
5、細(xì)胞懸液裝入凍存管中。用封口膜封裹瓶口,做好標(biāo)記。
6、凍存管在4℃下存放30min,轉(zhuǎn)放-20℃中30min,再轉(zhuǎn)入-70℃過夜,之后即可放入液氮中長久保存,注意進(jìn)行登記。 采取逐級降溫保存:4℃放置20min,-20℃放置30min,-70℃?過夜,***置于液氮罐中長期存儲。
預(yù)期用途:成分確定、無需程序降溫,所有原料均為注射級,內(nèi)***水平低于0.06EU/mL。本產(chǎn)品為埃澤思(AppliedCell)推出一款即用型的無血清細(xì)胞凍存液,本款產(chǎn)品在常規(guī)凍存液基礎(chǔ)上做了大量優(yōu)化,主要具有幾大特點(diǎn):凍存液無血清成分、無需配制直接使用、無需程序降溫盒、不需分步降溫、即用型細(xì)胞凍存液,且細(xì)胞復(fù)蘇率高,尤其對干細(xì)胞干性維持以及細(xì)胞表面蛋白保護(hù)有極好效果。該款凍存液適用于臍帶、脂肪、骨髓等間充質(zhì)干細(xì)胞,免疫細(xì)胞以及大多數(shù)細(xì)胞系凍存。同時(shí)該款所有成分均使用藥用級原料配制而成,內(nèi)***水平<0.06EU/mL,適用不同應(yīng)用場景。在細(xì)胞建株和建系中,及時(shí)凍存原始細(xì)胞是十分重要的。江蘇hek293t細(xì)胞凍存液配好放多少錢
細(xì)胞的凍存密度一般為?吉林無血清細(xì)胞凍存液如何保存
細(xì)胞復(fù)蘇佩戴眼鏡和手套,從液氮中取出凍存的細(xì)胞管。迅速放入38℃水浴中,并不時(shí)搖動(dòng),在1分鐘內(nèi)使其完全融化,然后在無菌條件下取出細(xì)胞。1200rpm/min離心5-10min,棄去上清,加入適量培養(yǎng)液混勻后接種于培養(yǎng)瓶中,次日更換一次培養(yǎng)液。
細(xì)胞凍存和復(fù)蘇操作步驟:
細(xì)胞凍存和復(fù)蘇采取“慢凍快融”的原則,慢速冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水份滲出細(xì)胞外,減少細(xì)胞內(nèi)形成冰晶的機(jī)會(huì),快融以保證細(xì)胞外結(jié)晶快速融化,避免慢速融化水份滲入細(xì)胞內(nèi),再次形成胞內(nèi)冰晶造成對細(xì)胞的損傷。 吉林無血清細(xì)胞凍存液如何保存
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