.在多種不同類型細胞中基因敲除效率超過90%。高靈活應用,同一試劑可用于siRNA和質粒共轉染的基因沉默實驗。細胞毒性低,結果相關性好,確保所觀察到的細胞效應是由轉染的siRNA而非轉染過程本身介導。兼容含血清或不含血清的培養(yǎng)基,轉染前后均無需換液(如無血清培養(yǎng)基)。X-tremeGENEsiRNATransfectionReagent用于4種細胞系的HPRT基因沉默實驗。根據(jù)各試劑說明書建議的操作流程,或標準實驗方法,將100nMHPRT特異性siRNA轉染至4種細胞,通過LightCycler®h-HPRTHousekeepingGeneSet的熒光定量法評估基因沉默效率。結果顯示用羅氏這款試劑在四種細胞中轉染后基因沉默表現(xiàn)均表現(xiàn)優(yōu)異。包括常見細胞類型、干細胞、原代細胞以及歷來難轉染的細胞類型)提供如此簡便、高效的siRNA輸送效果。polviet轉染試劑對照
胞因素用低代數(shù)的細胞293T細胞非常重要??!當然也要保證細胞狀態(tài)特別好,沒有細微污染,鋪板均勻。飽滿狀態(tài)好的細胞才可以產生較高滴度的***哦!載體系統(tǒng)在實驗中**常見的慢***載體系統(tǒng)有三質粒系統(tǒng)、四質粒系統(tǒng),當然使用三質粒系統(tǒng)的小伙伴居多,一定要選擇成熟商業(yè)化的載體系統(tǒng)!載體構建和質粒抽提純化我們要注意是否構建時導致質粒載體重組或某個部件缺失,或污染別的質粒、雜物?中抽純化是否污染?要養(yǎng)成同時做陰性對照的習慣:建議目的基因載體和陰性對照GFP載體是同一批,且建議每次包裝都如此操作,要保證目的基因的表達載體構建純化良好,質粒間比例得當,并且對質粒進行酶切驗證.上海蛋白轉染試劑公司轉染復合物制備完成; 混勻后室溫下孵育15-20分鐘,直接取10μL加入已鋪好細胞的孔中.
基于陽離子聚合物的轉染試劑,帶正電的聚合物與核酸帶負電的磷酸基團形成帶正電的復合物后與細胞表面帶負電的蛋白多糖相互作用,并通過內吞作用進入細胞。其又分為樹枝狀陽離子聚合物和線性陽離子聚合物兩類,前者細胞毒性相對較大,后者細胞毒性較小,但其轉染效率都高于脂質體轉染,適用也較為廣范。以上單一成分的轉染試劑或聚焦于提高效率或著重于降低細胞毒性,可謂魚和熊掌不可兼得也。新一代轉染試劑,不局限于單一成分,混合了不同配方的脂類(非脂質體)、加上蛋白質組分、以及各種的成分,兼具了轉染效率高和細胞毒性小的優(yōu)勢,且操作更加簡單,易于高通量。
對CHO細胞轉染效率的比較右圖:使用以上轉染試劑將編碼熒光素酶蛋白的cDNA(phRL-CMV)和綠色熒光蛋白GFP的cDNA按照生產商的提供的轉染步驟分別轉染到CHO細胞。在轉染24小時后,熒光素酶的活性使用Beckman公司的化學發(fā)光監(jiān)測器測定;GFP陽性細胞率使用BD公司的FACS檢測。左圖:LipoD293試劑(升級版)和Lipofecatmine2000(L2K),TransIT以及Fugene6的價格比較(美元/1000微升)。所有的價格是從生產制造商的網站上收集對CHO細胞轉染效率的比較右圖:使用以上轉染試劑將編碼熒正確的了解您希望輸送的運載物是選擇可靠轉染產品的第一步。
細胞轉染實驗是生物醫(yī)學實驗室中**常規(guī)的研究手段,目的是把外源基因、蛋白或者小分子導入到靶細胞內。目前主要有三種主流方法:生物轉染,物理轉染和化學轉染。其中生物轉染主要是利用***等微生物作為基因導入載體,以慢***、腺***和腺相關***等**常見,其侵染效率可以達到90%以上,但常因安全性等問題,很多實驗室對其敬而遠之。物理轉染主要包括顯微注射、電穿孔和基因***,無論哪一種都需要特定的設備,且一分錢一分貨,性能好的價格也都很性感電轉化化學轉染方法是生物醫(yī)學研究中**常用的轉染方法,主要包括兩類:陽離子脂質體和陽離子聚合物。其基本原理是利用陽離子的化學分子與帶有負電荷的核酸通過正負電荷作用形成穩(wěn)定的復合物。試劑可在單次靜脈注射后即可在肝臟中實現(xiàn)靶向敲低。慢病毒轉染試劑原理
質粒細胞轉染步驟是什么?polviet轉染試劑對照
細胞轉染過程:X-tremeGENE9DNA轉染試劑簡介:X-tremeGENE9DNA轉染試劑是脂質和其它成分混合而得的一類多組份試劑,溶于80%乙醇中,經0.2μm濾膜過濾,然后封裝于玻璃小瓶中,適用于細胞分析的多種實驗。優(yōu)勢:1.具有細胞毒性極低、轉染后細胞存活率高,生成可信任的生理學相關數(shù)據(jù)。2.操作簡便、節(jié)省時間,只需對X-tremeGENE9DNA轉染試劑進行簡單稀釋,再與質粒DNA共同孵育,即可直接向細胞添加反應混合物(有無血清均可)。3.對于常用細胞無需進行費時費力的優(yōu)化工作。polviet轉染試劑對照
上海儒安生物科技有限公司擁有從事生物技術、物聯(lián)網技術、網絡技術領域內的技術開發(fā)、技術咨詢、技術轉讓、技術服務,軟件開發(fā),電子商務(不得從事增值電信、金融業(yè)務),化工產品及原料(除危險化學品、監(jiān)控化學品、民用物品、易制毒化學品)、實驗窒設備的銷售。等多項業(yè)務,主營業(yè)務涵蓋細胞轉染試劑,ecl發(fā)光液,cck8細胞增殖,內參抗體。一批專業(yè)的技術團隊,是實現(xiàn)企業(yè)戰(zhàn)略目標的基礎,是企業(yè)持續(xù)發(fā)展的動力。公司業(yè)務范圍主要包括:細胞轉染試劑,ecl發(fā)光液,cck8細胞增殖,內參抗體等。公司奉行顧客至上、質量為本的經營宗旨,深受客戶好評。公司力求給客戶提供全數(shù)良好服務,我們相信誠實正直、開拓進取地為公司發(fā)展做正確的事情,將為公司和個人帶來共同的利益和進步。經過幾年的發(fā)展,已成為細胞轉染試劑,ecl發(fā)光液,cck8細胞增殖,內參抗體行業(yè)出名企業(yè)。