昆蟲(chóng)細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑配方

簡(jiǎn)介：X-tremeGENEHPDNA轉(zhuǎn)染試劑是一種高效的無(wú)動(dòng)物源成分的低毒轉(zhuǎn)染試劑，兼容含血清或不含血清的培養(yǎng)基，可用于轉(zhuǎn)染各類真核細(xì)胞(包括昆蟲(chóng)細(xì)胞)以及多種難轉(zhuǎn)染細(xì)胞系。優(yōu)勢(shì)：1.簡(jiǎn)單易用的多組分混合試劑，無(wú)動(dòng)物源性成分，室溫穩(wěn)定。2.高轉(zhuǎn)染效率，對(duì)于原代細(xì)胞和使用其它試劑難轉(zhuǎn)染的**細(xì)胞系有高轉(zhuǎn)染效率。3.使用細(xì)胞毒性低的試劑，結(jié)果相關(guān)性好。圖2.X-tremeGENEHP高效低毒的轉(zhuǎn)染性能。通過(guò)X-tremeGENEHP和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法將GFP表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至CHO-K1。A和C圖的熒光視野顯示了實(shí)驗(yàn)后兩種方法均獲得了成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。但B和D圖的明亮視野表明脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法的細(xì)胞毒性遠(yuǎn)高于X-tremeGENEHP，導(dǎo)致存活細(xì)胞量減少(圖片來(lái)源于網(wǎng)絡(luò))。轉(zhuǎn)染的細(xì)胞類型可簡(jiǎn)單分為兩大類，連續(xù)細(xì)胞系和原代細(xì)胞.昆蟲(chóng)細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑配方

用LipoD293?體外DNA轉(zhuǎn)染試劑（Ver.II）（上圖）和受歡迎的品牌產(chǎn)品Invitrogen公司的293fectin?（下圖）轉(zhuǎn)染pEGFP-C1質(zhì)粒到HEK293細(xì)胞中。轉(zhuǎn)染24小時(shí)后，細(xì)胞的尼康Eclipse熒光顯微鏡DIC成像圖（左側(cè)）和熒光成像圖（右側(cè)）。對(duì)懸浮HEK293F產(chǎn)生蛋白質(zhì)效率的比較/30毫升的293F細(xì)胞分別使用LipoD293?試劑、293fectin、Xfect和Fugene6等轉(zhuǎn)染試劑按照生產(chǎn)商的標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)染步驟將pEGFP-6xHis質(zhì)粒導(dǎo)入細(xì)胞表達(dá)，用量為L(zhǎng)ipoD293?試劑，20微克，所有其他三種轉(zhuǎn)染試劑均使用30微克質(zhì)粒DNA。上海非脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑配制siRNA脫靶效應(yīng)會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡，并引起分析問(wèn)題。

.在多種不同類型細(xì)胞中基因敲除效率超過(guò)90%。高靈活應(yīng)用，同一試劑可用于siRNA和質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染的基因沉默實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞毒性低，結(jié)果相關(guān)性好，確保所觀察到的細(xì)胞效應(yīng)是由轉(zhuǎn)染的siRNA而非轉(zhuǎn)染過(guò)程本身介導(dǎo)。兼容含血清或不含血清的培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)染前后均無(wú)需換液(如無(wú)血清培養(yǎng)基)。X-tremeGENEsiRNATransfectionReagent用于4種細(xì)胞系的HPRT基因沉默實(shí)驗(yàn)。根據(jù)各試劑說(shuō)明書(shū)建議的操作流程，或標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)方法，將100nMHPRT特異性siRNA轉(zhuǎn)染至4種細(xì)胞,通過(guò)LightCycler®h-HPRTHousekeepingGeneSet的熒光定量法評(píng)估基因沉默效率。結(jié)果顯示用羅氏這款試劑在四種細(xì)胞中轉(zhuǎn)染后基因沉默表現(xiàn)均表現(xiàn)優(yōu)異。

原代細(xì)胞直接分離自組織并在適當(dāng)條件下增殖,因此，它們的形態(tài)學(xué)和生理特征和體內(nèi)狀態(tài)更為相似。但相對(duì)于連續(xù)細(xì)胞系，它們通常更難培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染。在經(jīng)過(guò)***次傳代培養(yǎng)之后，原代培養(yǎng)物變成了一種細(xì)胞系。源自于原代培養(yǎng)物的細(xì)胞系具有有限的壽命（即它們是有限細(xì)胞系），且隨著傳代的進(jìn)行，具有比較高的生長(zhǎng)能力的細(xì)胞逐漸占據(jù)支配地位，從而造成了細(xì)胞群內(nèi)的基因型和表型接近一致的情形。相對(duì)來(lái)說(shuō)，這一類細(xì)胞要比原代細(xì)胞使用起來(lái)更為方便，尤其是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的克隆傳代。給你選擇CycloFect轉(zhuǎn)染試劑的五大理由!

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質(zhì)粒細(xì)胞轉(zhuǎn)染步驟是什么?昆蟲(chóng)細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑配方

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