CCK8檢測細胞增殖和毒性實驗佰歐晶生物專注于生命科學、醫(yī)學及藥學科研咨詢和技術服務，致力于疾病關鍵基因功能研究，中藥功能及機理研究，納米靶向***研究，**研究整體方案服務。CellCountingKit-8（簡稱CCK-8）試劑用于簡便而準確的細胞增殖和毒性分析。其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazandye）。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析。接種時注意細胞懸液一定要混勻，以避免細胞沉淀下來，導致每孔中的細胞數(shù)量不一致。浙江cck8視頻
CKK-8原理
CellCountingKit，CCK-8試劑含有WST-8（化學名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽），是近年新開發(fā)的一種更新的水溶性四唑鹽檢測，原理與WST-1類似：在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細胞線粒體中的脫氫酶還原成具有高度水溶性的橙黃色甲臜產(chǎn)物（Formazan）。生成的甲臜物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比，用酶聯(lián)免疫分析儀測定其光吸收值可間接反映活細胞數(shù)量，在一定細胞數(shù)量范圍內甲臜形成的量與細胞數(shù)成正比。
天津cck8標準曲線CCK8細胞增值檢測實驗簡介.
CCK8的優(yōu)點：方法方便，不用洗滌細胞，不需要放射性同位素和有機溶劑；CCK-8快速檢測；CCK-8檢測靈敏度高，細胞密度低也可以檢測；CCK-8的重復性優(yōu)于MTT法；CCK-8對細胞的毒性很?。籆CK-8細胞活性檢測試劑中是1瓶溶液，不需要現(xiàn)用現(xiàn)配，即開即用。CCK8的缺點：相比于與MTT法，CCK8的價格比較昂貴生成的甲瓚物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析。用途：***篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、**藥敏試驗。
五、實驗注意事項：·若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內測定，吸光度不會發(fā)生變化。·如果待測物質有氧化性或還原性的話，可在加CCK8之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉***影響。當然***影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入***后的空白吸收即可。·當使用標準96孔板時，貼壁細胞的**小接種量至少為1,000個/孔(100μl培養(yǎng)基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2,500個/孔(100μl培養(yǎng)基)。**藥敏試驗：這個是用的比較廣的，我見過做**的團隊，買CCK-8都是一整箱，一整箱的買。
CCK8實驗操作CCK8的優(yōu)勢在于對細胞沒有毒性，可以直接加入細胞中長時間孵育，而不用考慮試劑本身對細胞帶來的影響。1、向96孔板中每孔加入細胞100ul，置于培養(yǎng)箱中孵育24小時，96孔板的排版情況和上述MTT相同，在這里不重復介紹了。2、向各孔中加入10ul的CCK-8檢測溶液。如若檢測的細胞增殖或毒性試驗，需在此之前加入作用***培養(yǎng)適當時間，例如6h/12h/24h等，然后再加入CCK8檢測液。3、培養(yǎng)箱中孵育1～4小時，比較好反應時間以細胞具體顯色程度為準。CCK8試驗的總體實驗心得.北京cck8接種細胞密度
CCK8的實驗步驟、實驗分組及檢測方法.浙江cck8視頻
酚紅和血清對CCK法的檢測不會造成干擾；◆細胞毒性非常低，因此加入WST-8顯色后，可以在不同時間反復用酶標儀讀數(shù)從而找到比較好測定時間。實驗二：細胞增殖-毒性檢測1、在96孔板中配置100μL的細胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預培養(yǎng)24小時（37℃，5%CO2）。2、向培養(yǎng)板加入10μL不同濃度的待測物質。3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當?shù)臅r間（例如：6、12、24或48小時）。4、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要再孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）。5、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內孵育1-4小時。6、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。浙江cck8視頻