CCK8檢測原理圖2操作步驟1、在96孔板中接種細胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預培養(yǎng)（37℃,5%CO2）。2、細胞處理（不同實驗處理方式不同）。3、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）。4、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內孵育1-4小時。5、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。6、若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內測定，吸光度不會發(fā)生變化。向每孔加入10 μL CCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）。浙江cck8的價格
細胞活性檢測1.在96孔板中接種細胞懸液(100ml/孔)。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱預培養(yǎng)(在37℃，5%CO2的條件下)。2.向每孔加入10ml的CCK-8溶液(注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響O.D值的讀數(shù))。3.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內孵育1-4小時。4.用酶標儀測定在450nm處的吸光度。5.如果暫時不測定O.D值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10ml0.1MHCl溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時內吸光度不會發(fā)生變化。細胞增殖-毒性檢測1.在96孔板中配制100ml的細胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預培養(yǎng)24小時(在37℃，5%CO2的條件下)。浙江cck8統(tǒng)計分析將她培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內孵育1-4小時。
CCK-8沒有具體規(guī)定反應時間的長短，以具體反映比較好顯色的時間為主。因為不同的細胞反應時間、顯色標準都不一樣，所以一定要設置預實驗。預實驗中，可以先做幾個孔摸索一下接種數(shù)量和培養(yǎng)時間。3、懸浮細胞比貼壁細胞難顯色。在加入CCK-8培養(yǎng)后，可每隔一小時觀測一下顏色的變化情況，或者之間用酶標儀檢測更為準確。4、CCK8作用時間越長，OD值就越大，所以對于作用時間也不是越長久越好，要把OD值控制在1左右。5、CCK8要求檢測孔內不能有氣泡。
CCK8檢測細胞增殖/毒性的方法：
1.將處于對數(shù)生長期的各實驗組細胞胰酶消化后，完全培養(yǎng)基重懸成細胞懸液，并計數(shù)。
2.根據(jù)細胞生長快慢決定鋪板細胞密度（多數(shù)為1000-2000 cell/well），每組3-5重復，每孔100-200μl培養(yǎng)基。根據(jù)實驗設計決定鋪板數(shù)量（如需要檢測5天，則鋪5張96孔板），我們以1000 cell/well，5復孔，200μl培養(yǎng)基，檢測5天為例，各實驗組需要細胞數(shù)量為1000×5×5個細胞，從計數(shù)好的細胞懸液中取出所需的細胞量和完全培養(yǎng)基混勻，**終體積為200×5×5μl。 CCK-8用途：***篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、**藥敏試驗.
當使用標準96孔板時，貼壁細胞的**小接種量至少為1000 個/孔(100μl培養(yǎng)基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2500 個/孔(100μl培養(yǎng)基)。酚紅和血清對CCK8法的檢測不會造成干擾，可以通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去。
注意事項CCK8可以檢測大腸桿菌，但不能檢測酵母細胞。在細胞增殖實驗每次測定的過程中需要避免細菌污染，以免影響結果。CCK-8在0-5℃下能夠保存至少6個月，在-20℃下避光可以保存1年。當在培養(yǎng)箱內培養(yǎng)時，培養(yǎng)板**外一圈的孔**容易干燥揮發(fā)，由于體積不準確而增加誤差。一般情況下，**外一圈的孔只加培養(yǎng)基，不作為測定孔用。在培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時間，測定450 nm的吸光度即為空白對照。 胞毒性非常低，因此加入WST-8顯色后，可以在不同時間反復用酶標儀讀數(shù)從而找到比較好測定時間。天津mtt cck8
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二、優(yōu)點：·使用方便，省去了洗滌細胞，不需要放射性同位素和有機溶劑；·CCK-8法能快速檢測；·CCK-8法的檢測靈敏度很高，甚至可以測定較低細胞密度；·CCK-8法的重復性優(yōu)于MTT法，MTT實驗生成的formazan不是水溶性的，需要使用DMSO等有機溶劑溶解；而本方法產(chǎn)生的formazan是水溶性的，不但省去了溶解步驟，更因此而減少了該操作步驟帶來的誤差；·CCK-8法對細胞毒性小，可以多次測定選取比較好測定時間，與MTT方法相比線性范圍更寬，靈敏度更高；·CCK-8細胞活性檢測試劑中為1瓶溶液，毋需預制，即開即用。浙江cck8的價格