外泌體作為藥物載體由于特殊的結構和循環(huán)方式,外泌體作為藥物運輸的載體具有獨特的優(yōu)勢。例如外泌體的尺寸分布能夠增強滲透滯留效應,從而有選擇性地深入組織;其外層磷脂雙分子層可以保護內容物不受各種生物酶的影響,維持各種生物分子的活性;外泌體普遍存在于各種體液和組織中,其體積小,結構、組成與細胞膜類似,導致外泌體可以在避開免疫系統(tǒng)監(jiān)督的同時深入組織內部,有較好的生物相容性;當采用內源外泌體時,能明顯降低其他藥物載體可能引起的有害免疫反應;除此之外,某些細胞來源或經特殊修飾過的外泌體具有良好的特異性,可以與特定的或組織結合。因此,載藥成為外泌體研究的一個重要分支,具有良好的應用前景。在外泌體中引入藥物的方式包括體內裝載和體外裝載兩種。體內藥物裝載可以通過傳統(tǒng)方法(如病毒轉染、脂質體轉染或電穿孔等)轉染來源細胞,編碼感興趣的RNA或蛋白質,也可以使藥物與來源細胞共混,使細胞分泌產生含有目標生物分子的外泌體。體外藥物裝載則首先需要得到純化的外泌體,然后將感興趣的藥物通過電穿孔或脂質體轉染等方法裝入純化的外泌體。外泌體內可裝載的藥物包括小分子化學藥物、蛋白質和多肽、核酸藥物、天然產物等。干貨分享 | 避坑,微生物培養(yǎng)的污染因素及預防方法,少走彎路。湖南組織科研技術服務構建
RNA各種可逆的化學修飾被認為是一種新的表觀遺傳調控方式。m6A是真核生物mRNA常見的化學修飾,在調控mRNA穩(wěn)定性,剪切和翻譯方面具有重要的作用。作者使用轉錄組測序發(fā)現(xiàn)了METTL3(甲基轉移酶3),一種主要的RNAN6-腺苷-甲基轉移酶,在人肝細胞(HCC)和多種實體中高表達。在臨床上,METTL3的過度表達與肝細胞患者不良預有關。體外實驗證明敲除METTL3會抑制HCC細胞增殖,遷移及克隆形成。體內實驗證明敲除METTL3會明顯抑制HCC體內成瘤和肺轉移。另外,使用CRISPR/dCas9-VP64系統(tǒng),內源性高表達METTL3會促進HCC細胞在體外和體內生長。通過轉錄組測序、m6A-Seq、MeRIP-PCR,作者確定了SOCS2(細胞因子信號2的抑制因子)作為METTL3介導的m6A修飾的下游靶基因。敲除METTL3表達會消除SOCS2mRNAm6A修飾并增強SOCS2mRNA表達。m6A介導的SOCS2mRNA降解是依賴于m6A“讀取器”蛋白YTHDF2??傊?,METTL3在HCC大部分高表達中,并通過m6A-YTHDF2依賴機制抑制SOCS2表達從而促進HCC進展。因此,作者發(fā)現(xiàn)了在肝發(fā)生過程中表觀遺傳改變的一種新機制。圖4RNA甲基化轉移酶METLLT3在肝組織中高表達。湖南大鼠科研技術服務技術隨著跨學科研究的深入開展,動物疾病模型將在未來發(fā)揮更為普遍的作用,成為生命科學、醫(yī)學等領域研究工具。
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外泌體的抑制作用外泌體水平升高通常與不同類型的惡化相關,一些研究人員希望能通過降低外泌體到正常水平來防止不良預后。從這個角度出發(fā),許多正在進行的研究旨在通過調節(jié)外泌體生成分泌的過程或通過特異性靶向其成分抑制其與靶細胞的相互作用來調節(jié)外泌體的產生。如今我們對外泌體機制和不同生理和病理條件下的功能的理解呈指數級增長,雖然目前其生物學功能還未完全解析清楚,但研究者們在許多領域均已對其進行了深入探索。外泌體不是廢物顆粒,而是細胞間通訊的關鍵介質,作為宿主細胞的衛(wèi)星,外泌體包含大量的生物信息,其功能超出了初的預期,宿主細胞控制著外泌體的內容物,從而改變了自己或其他細胞的命運。其次,外泌體對的進展和轉移有著強烈的影響,可以通過外泌體預測轉移的部位并建立轉移前的生態(tài)位。參考文獻:[1]高方園,焦豐龍,張養(yǎng)軍,秦偉捷,錢小紅.外泌體分離技術及其臨床應用研究進展[J].色譜,2019,37。動物疾病模型可以分為兩種類型:自然模型和人工模型。
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實驗樣本分類實驗一般采取樣本有:血液樣本、樣本和細胞樣本。通常,樣本采集后,應立即用等滲溶液(PBS或生理鹽水)盡量把血液漂洗干凈(除非血液也是分析對象),用濾紙或紗布吸干,把樣本分切成幾分,每份的體積約2個黃豆大小,每份用一個管子裝。血液樣本的采集應根據不同實驗的要求,將會采取不同策略。血清樣本:全血中不加抗凝劑,血液凝固后取出的不含凝血因子的淡黃色透明液體。(全血標本室溫放置2小時3000rpm/min離心15min)血漿樣本:全血中加抗凝劑,血液凝固后取出的含凝血因子的淡黃色透明液體。(可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2-8℃,3000rpm/min離心15min)如果是做生化\ELISA等檢測可以考慮血漿和血清,根據獲得的樣本量可考慮分裝成100-500μl/管,可避免反復凍融造成的檢測誤差。生化:建議優(yōu)先選擇血清,其次選擇肝素抗凝血漿;ELISA:建議優(yōu)先選擇血清,其次選擇肝素或EDTA抗凝血漿;凝血實驗:只能選擇枸櫞酸鈉抗凝血漿;血常規(guī):只能選擇EDTA抗凝全血;如果要收集其中的白細胞、血小板等建議用抗凝全血。如果要做流式建議用專門的流式用血液收集管,防止表面抗原的丟失,或者盡快安排就近檢測。樣本處理取樣完后。湖南組織科研技術服務構建