上海模式動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)室

    SD大鼠腦缺血致腦梗死模型【材料】水合氯醛、線栓直徑（體重250-300g）【方法】1、10％水合氯醛（35mg/kg）腹腔注射麻醉。2、仰臥位固定，頸正中線切口，分離肌肉和筋膜，分離左側(cè)頸總動(dòng)脈（CCA）、頸外動(dòng)脈（ECA）和頸內(nèi)動(dòng)脈（ICA）。3、微動(dòng)脈夾暫時(shí)夾閉頸內(nèi)動(dòng)脈（ICA），活扣結(jié)扎近心端頸總動(dòng)脈（CCA）、頸外動(dòng)脈（ECA）打雙結(jié)，在雙結(jié)中間剪開(kāi)小口插入線栓。4、將拴線插入到頸內(nèi)動(dòng)脈（ICA），用眼科鑷輕推拴線，以頸外動(dòng)脈（ECA）和頸內(nèi)動(dòng)脈（ICA）分叉處為參考位置。5、栓線插入預(yù)刻深度，感到有阻力，說(shuō)明栓線已到達(dá)腦中動(dòng)脈（MCA）,打結(jié)固定栓線。6、血管外的栓線不要留得過(guò)長(zhǎng)，1h后拔出栓線，縫合傷口，單籠飼養(yǎng)觀察。注：前兩三天老鼠會(huì)萎靡，不進(jìn)食，注意不要，老鼠無(wú)死亡即可。在肝臟中，肝外膽道系統(tǒng)的阻塞會(huì)引發(fā)膽汁淤積和炎癥，導(dǎo)致門靜脈周圍區(qū)域的強(qiáng)烈纖維化反應(yīng)。上海模式動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)室

    3）基因/蛋白質(zhì)表達(dá)定性或定量檢測(cè)在進(jìn)行分子檢測(cè)的過(guò)程中，保持核酸和蛋白質(zhì)的完整性至關(guān)重要，因此在取樣過(guò)程中，應(yīng)盡量避免核酸及蛋白質(zhì)的降解。如不注意采樣過(guò)程，將會(huì)導(dǎo)致樣本中的核酸及蛋白質(zhì)的無(wú)差別降解，嚴(yán)重影響后續(xù)分子檢測(cè)結(jié)果。在條件允許的情況下，組織樣本在離體后應(yīng)立刻裝入凍存管內(nèi)，并立即放入液氮中進(jìn)行冷凍。在RNA提取樣本的保存過(guò)程中，可以選擇非冷凍型RNA保存液或Trizol試劑進(jìn)行RNA酶的抑制。針對(duì)蛋白質(zhì)提取樣本的保存，我們同樣可以使用商品化的蛋白酶抑制劑進(jìn)行短期處理。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PolymeraseChainReaction，PCR）及免疫印跡（Westernblotting，WB），這兩種實(shí)驗(yàn)手段是分子生物學(xué)檢測(cè)中不可或缺的一部分，也是發(fā)表論文至關(guān)重要的分子檢測(cè)數(shù)據(jù)。PCR主要用來(lái)對(duì)基因在基因組層面或轉(zhuǎn)錄層面的變化進(jìn)行定性或定量檢測(cè)，而WB則主要用來(lái)對(duì)某一蛋白質(zhì)的表達(dá)進(jìn)行定量檢測(cè)。（4）轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)及代謝組學(xué)檢測(cè)隨著檢測(cè)水平及相關(guān)產(chǎn)業(yè)的不斷發(fā)展，各類組學(xué)檢測(cè)的價(jià)格降低，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中也常常運(yùn)用組學(xué)檢測(cè)來(lái)提升實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的檔次。在我們進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組學(xué)及蛋白質(zhì)組學(xué)的檢測(cè)過(guò)程中，同樣是要首先確保目標(biāo)RNA或蛋白質(zhì)的片段完整性。上海C57動(dòng)物模型飼養(yǎng)合理建立周圍性面癱動(dòng)物模型對(duì)進(jìn)一步深入研究具有重要意義。

    其也是可以作為視網(wǎng)膜色素變性疾病模型的。以上所述為本發(fā)明的實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。sequencelisting四川省人民醫(yī)院利用gm20541基因構(gòu)建視網(wǎng)膜色素變性疾病模型的方法和應(yīng)用111406dna人工序列1gaatgcagtgacctatgatgatgtgtgtgtgaacttcactctggaagaatggactttact60ggatccttcacagaagagtctctacagagatgtgatgcaggaaacctacaggaatctcac120tgctataggctacaattgggaagatgacaatattgaagactattttcaaagttctagaag180acatggaaggcatgaaagaaatcatagtggagagaaaccttatgcttgtaaccaatgtga240taaagccttttcatgtcatcatagtctccaaatacataaaagaagacatactggagagaa300actctatgaatgtaaccgttgtaataaaggctttccatatcccagtgctctacaaataca360taaaaggatacacagtggagagaaaccctatgaatgtaaacaatgtggtaaagcctttgc420atgtcacagttctcttcaaaggcatgaaagaatacatactggtgagaaaccttatgaatg480tagccaatgtggtaaagcctttacacatcaaaagagtctccaaatacataaaagaactca540cagtggagaaaaaccatatgggtgtagtcagtgtggaaaagactttgtaagtcagagtcg600tcttctagaacataaaaggacacatactgga。

    經(jīng)多級(jí)乙醇至水洗：二甲苯(i)5min→二甲苯(ⅱ)5min→100％乙醇2min→95％的乙醇1min→80％乙醇1min→75％乙醇1min→蒸餾水洗2min；4)蘇木素染色5分鐘，自來(lái)水沖洗；5)鹽酸乙醇分化30秒；6)自來(lái)水浸泡15分鐘；7)置伊紅液2分鐘。8)常規(guī)脫水，透明，封片：95％乙醇(i)1min→95％乙醇(ⅱ)1min→100％乙醇(i)1min→100％乙醇(ⅱ)1min→二甲苯石碳酸(3：1)1min→二甲苯(i)1min→二甲苯(ⅱ)1min→中性樹(shù)脂封固。9)顯微鏡下拍照。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在4個(gè)月時(shí)，與ctrl(對(duì)照)小鼠比較，sixko小鼠的視網(wǎng)膜外核層已經(jīng)開(kāi)始變薄，表明感光細(xì)胞死亡(圖7)。實(shí)施例5視網(wǎng)膜冰凍切片免疫染色：取4月齡的由實(shí)施例2得到的gm20541基因敲除純合子小鼠斷頸處死后，快速取眼球，并放入4％的pfa中，冰上固定15min后，在角膜上剪口，然后繼續(xù)冰上固定。2h后，pbs緩沖液沖洗3遍，然后將眼球置于30％蔗糖溶液中脫水2h，然后解剖鏡下剪去角膜及晶體，oct包埋并迅速置于-80℃冰箱冷凍。大約10min后，取出oct包埋的眼球，置于冰凍切片機(jī)-25℃平衡約30min后即可切片。切片厚度為12μm。切片完成后，選取質(zhì)量較高的片子于37℃烘箱放置30min，然后免疫組化筆在有視網(wǎng)膜組織的地方畫(huà)圈，pbs洗三遍以去除oct。通過(guò)建立腦缺血-再灌注動(dòng)物模型，模擬人類ICVD的病理過(guò)程。

    應(yīng)根據(jù)所檢測(cè)指標(biāo)的要求，需采取不同策略處理。在如今分子生物學(xué)當(dāng)?shù)赖默F(xiàn)實(shí)背景下，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)除了對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體征及生理指標(biāo)進(jìn)行的監(jiān)控外，各種分子檢測(cè)甚至是組學(xué)檢測(cè)也開(kāi)始大行其道，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)束之后的機(jī)制研究成為了實(shí)驗(yàn)的重頭戲。一般來(lái)說(shuō)，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)檢測(cè)對(duì)象主要包括：（1）體液中各類因子定性及定量檢測(cè)由于此類檢測(cè)對(duì)象多為蛋白及各類小分子物質(zhì)，因此在取樣過(guò)程中應(yīng)注意防止此類物質(zhì)降解，在獲取后，應(yīng)及時(shí)置于溫（≤-80℃）進(jìn)行保存，在后續(xù)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，也應(yīng)當(dāng)注意保存條件的穩(wěn)定性，避免反復(fù)凍融。常用的方法便是酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA），除此之外，可利用生化分析儀及不同檢測(cè)方法的試劑盒（比色法、比濁法等）方法對(duì)各類生化指標(biāo)及因子進(jìn)行定性及定量檢測(cè)。（2）組織病理、生理變化及免疫組化檢測(cè)常用的病理檢測(cè)多使用H&E染色對(duì)細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核進(jìn)行染色標(biāo)記，以觀察細(xì)胞變化。除此之外，許多特殊染色也在病理生理變化中得到了應(yīng)用，如利用Masson染色檢測(cè)組織纖維化病變，Nissl染色檢測(cè)神經(jīng)元損傷，β-半乳糖甘酶染色檢測(cè)細(xì)胞衰老等。此外，還可以通過(guò)免疫組化技術(shù)對(duì)某些特異性標(biāo)記物進(jìn)行免疫顯色檢測(cè)，達(dá)到原位定性或定量檢測(cè)的目的。。它主要影響身體內(nèi)的大中動(dòng)脈，如冠狀動(dòng)脈、頸動(dòng)脈、腦動(dòng)脈和腎動(dòng)脈等，其發(fā)病機(jī)制的主要過(guò)程。北京實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型造模

通過(guò)阿霉素（Adriamycin，ADR）腹腔注射給藥（Adriamycin，ADR）試圖造成小鼠心衰。上海模式動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)室

    省心省時(shí)一些基因編輯鼠模型表型不易發(fā)現(xiàn)，需要結(jié)合外科手術(shù)造模、物理刺激或藥物誘導(dǎo)才能發(fā)現(xiàn)表型。專業(yè)的手術(shù)模型團(tuán)隊(duì)結(jié)合成熟穩(wěn)定的基因修飾鼠平臺(tái)和飼養(yǎng)繁育平臺(tái)，賽業(yè)生物可為您提供一站式“基因編輯鼠模型制備——種群擴(kuò)繁——手術(shù)造?！硇万?yàn)證”服務(wù)，讓您省心省時(shí)。3.專業(yè)的技術(shù)支持賽業(yè)生物專業(yè)的小動(dòng)物外科手術(shù)團(tuán)隊(duì)熟練掌握多種模型的制備，具備建立復(fù)雜及復(fù)合手術(shù)疾病模型的能力，可能夠根據(jù)您的需求，制定合理的實(shí)驗(yàn)計(jì)劃，同時(shí)提供及時(shí)的項(xiàng)目匯報(bào)與售后服務(wù)，讓您省事省心。，確保動(dòng)物福利與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與國(guó)際接軌賽業(yè)模式動(dòng)物中心通過(guò)ISO9001:2015和AAALAC雙認(rèn)證，ISO9001:2015認(rèn)證確保向廣大學(xué)者提供的所有產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)符合國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)，AAALAC認(rèn)證表明了賽業(yè)生物尊重動(dòng)物福利和倫理，重視生物安全的負(fù)責(zé)態(tài)度。適用動(dòng)物品種：大鼠、小鼠。手術(shù)疾病模型團(tuán)隊(duì)首席科學(xué)家簡(jiǎn)介張榮利博士張榮利博士有二十多年小鼠手術(shù)疾病模型制備經(jīng)驗(yàn)，畢業(yè)后先后在中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院、清華大學(xué)、北京大學(xué)及國(guó)際學(xué)術(shù)機(jī)構(gòu)任職，2011年起在美國(guó)CaseWesternReserveUniversity工作，任ResearchScientist并擔(dān)任心血管生理學(xué)實(shí)驗(yàn)室主任，負(fù)責(zé)基因工程動(dòng)物的疾病表型發(fā)現(xiàn)與新藥臨床前研究。上海模式動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)室