SD大鼠腦缺血致腦梗死模型【材料】水合氯醛、線栓直徑(體重250-300g)【方法】1、10%水合氯醛(35mg/kg)腹腔注射麻醉。2、仰臥位固定,頸正中線切口,分離肌肉和筋膜,分離左側頸總動脈(CCA)、頸外動脈(ECA)和頸內動脈(ICA)。3、微動脈夾暫時夾閉頸內動脈(ICA),活扣結扎近心端頸總動脈(CCA)、頸外動脈(ECA)打雙結,在雙結中間剪開小口插入線栓。4、將拴線插入到頸內動脈(ICA),用眼科鑷輕推拴線,以頸外動脈(ECA)和頸內動脈(ICA)分叉處為參考位置。5、栓線插入預刻深度,感到有阻力,說明栓線已到達腦中動脈(MCA),打結固定栓線。6、血管外的栓線不要留得過長,1h后拔出栓線,縫合傷口,單籠飼養(yǎng)觀察。注:前兩三天老鼠會萎靡,不進食,注意不要,老鼠無死亡即可。致使腎小球系膜這以 IgA 為主的免疫復合物沉積,同時使系膜細胞增生,基質增多。西藏C57動物模型技術
特發(fā)性肺纖維化(IPF)小鼠模型建立【方法】1、BALB/c小鼠麻醉,6-8周齡,體重20~25g,仰臥固定于實驗臺上,頸部去毛后酒精消毒,切開皮膚,逐層暴露氣管;2、將1mL注射器經兩氣管軟骨環(huán)間隙朝向心端刺入氣管,回抽無阻力;3、注入博萊霉素(約4~5mg/kg)再向氣管內注入~3次,使藥物在肺部分布均勻;4、以大鼠身體長軸為中心,正反快速旋轉鼠板1~2分鐘??p合皮膚,局部聚維酮碘消毒(或用青霉素消毒)防止,室溫保持在24~25℃,待動物自然清醒后置籠內常規(guī)飼養(yǎng)。肺纖維化模型發(fā)展時間:2周可見肺系數(肺重/體重×100%)、羥脯氨酸含量明顯升高。顯微鏡下可見炎癥細胞浸潤,以淋巴細胞、單核吞噬細胞為主,并有肺泡壁增厚、成纖維細胞增生等Ⅱ級肺泡炎表現。4周可見肺間質內有大量散在綠染的膠原纖維,肺泡結構破壞,見有許多纖維細胞等Ⅲ級肺間質纖維化病變。大鼠模型病理組織學與病理生理學改變與人類肺間質纖維化相似。其病變早期表現為滲出性肺泡炎,炎癥細胞在病變處聚集增多。晚期為肺間質纖維化,間質細胞增生,基質膠原聚集取代正常的肺組織結構。【檢測】組織病理切片HE染色。江蘇大鼠動物模型飼養(yǎng)小鼠腎纖維化(UUO)模型建立。
結果發(fā)現在這些組織中,gm20541均有表達,說明該基因可能在體內發(fā)揮重要功能。2采用免疫印跡(westernblot)的方法檢測gm20541基因在不同組織中的表達。方法:(1)分別獲取小鼠腦、肝臟、視網膜、心臟、腎臟以及脾,充分研磨后加入200μl蛋白裂解液ripa。(2)超聲破碎細胞后,在冰上裂解20min。(3)4℃,16000g離心10min后,取上清轉移至另一干凈離心管,加入50μl的蛋白上樣液,混勻后95℃加熱5min。(4)待樣本冷卻后,分別取20μl,160v電壓進行聚丙烯酰胺凝膠電泳(sds-page)以分離蛋白。(5)sds-page結束后,根據需要,裁剪適當大小的硝酸纖維素膜,按順序鋪上濾紙、膠、硝酸纖維素膜及濾紙,并趕去氣泡,轉膜槽放入冰水浴中,采用恒流,轉膜2h。(6)轉膜完畢后,純水沖洗硝酸纖維素膜一遍,晾干并標記。然后用8%的脫脂牛奶封閉2h。(7)封閉完成后,加入一定量的按一定比例(按照抗體使用說明書)稀釋于封閉液的一抗,4℃孵育過夜。(8)回收一抗,1×tbst緩沖液洗膜4次,每次10min,根據一抗來源,選擇合適二抗,用1×tbst稀釋辣根過氧化氫酶(hrp)標記的二抗,室溫于搖床上孵育2h。(9)二抗孵育結束后,用1×tbst洗膜3次,每次10min,用thermo的elc發(fā)光試劑盒檢測蛋白。
輕微的接觸角膜的中心頂端。一通道正極接右眼,二通道正極接左眼。通過針管對雙眼滴生理鹽水,改善金環(huán)電極及角膜的接觸效果。保證兩個金環(huán)電極以相同的角度、方式接觸兩眼角膜中心正端的相同位置。5記錄示波信號確認無誤后,關閉暗紅光??梢韵葒L試記錄一下暗適應光強為·s/m2的erg檢測,確認一下信號的質量:如果雙眼的振幅出現了與預期不同的較大差異,建議再次檢查金環(huán)電極的安裝位置。然后依次記錄暗適應光強為·s/m2的信號。需要注意的是,完成暗適應·s/m2光強檢測后,系統(tǒng)將自動打開背景光。同樣的,需要打開定時器,光適應10-15分鐘,再記錄。6經過光適應后,依次記錄光適應·s/m2以及·s/m2光強下波形,記錄·s/m2光強下閃爍視網膜誘發(fā)電位。結果發(fā)現在4個月時,與ctrl(對照)小鼠比較,cko(gm20541基因敲除純合子小鼠)小鼠的a波和b波在暗適應和光適應條件下均明顯降低,表明gm20541敲除后導致視力受損(見圖5和圖6)。實施例4視網膜石蠟切片h&e染色:對4月齡小鼠的視網膜進行石蠟切片、蘇木精-伊紅染色法(h&e染色方法)染色,具體操作如下:1)快速取小鼠眼球組織,并置于固定液中固定24h;2)石蠟包埋,切片,厚度為4μm;3)切片常規(guī)用二甲苯脫蠟。裸鼠皮下成瘤:前肢近腋后皮下注射細胞懸液; 裸鼠原位瘤:胰腺成瘤;尾靜脈注射成瘤。
相較于施用所述候選藥物前,所述視網膜色素變性疾病模型的視力提高;(2)施用所述候選藥物后,相較于施用所述候選藥物前,所述視網膜色素變性疾病模型的視網膜外核層變厚;(3)施用所述候選藥物后,相較于施用所述候選藥物前,所述視網膜色素變性疾病模型的視網膜外節(jié)增長。第四方面,本發(fā)明實施例提供了一種視網膜色素變性疾病模型的繁育方法,其包括:將由如上所述的方法得到的視網膜色素變性疾病模型進行自交。在由方面所述的構建方法得到了視網膜色素變性疾病模型的基礎上,為了獲得更多的視網膜色素變性疾病模型,本領域技術人員容易想到直接將上述的構建方法得到的視網膜色素變性疾病模型進行自交以繁育或培育出更多數量的視網膜色素變性疾病模型,這也是屬于本發(fā)明的保護范圍。附圖說明為了更楚地說明本發(fā)明實施例的技術方案,下面將對實施例中所需要使用的附圖作簡單地介紹,應當理解,以下附圖示出了本發(fā)明的某些實施例,因此不應被看作是對范圍的限定,對于本領域普通技術人員來講,在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下,還可以根據這些附圖獲得其他相關的附圖。圖1:檢測gm20541基因在不同組織中的表達;圖中:a:rt-pcr檢測gm20541基因在不同組織的表達結果。合理建立周圍性面癱動物模型對進一步深入研究具有重要意義。北京基因敲除動物模型技術
C57BL/6成年鼠肺部通過呼吸機過量通氣損傷模型的建立;西藏C57動物模型技術
e:不同光強下gm20541基因敲除小鼠的暗適應視網膜電圖b波統(tǒng)計;scotopicamplitude:暗光測定峰值;flashintensity:閃光強度;a-wave:a波;b-wave:b波。圖6:光適應視網膜電圖(erg)檢測結果;圖中:a-b:不同光強下gm20541基因敲除小鼠的光適應視網膜電圖軌跡圖;c:20cd·s/m2光強下gm20541基因敲除小鼠的光適應閃爍(flicker)視網膜電圖軌跡圖;d:不同光強下gm20541基因敲除小鼠的光適應視網膜電圖a波統(tǒng)計;e:不同光強下gm20541基因敲除小鼠的光適應視網膜電圖b波統(tǒng)計;f:20cd·s/m2光強下gm20541基因敲除小鼠的光適應閃爍(flicker)視網膜電圖統(tǒng)計。sixko或cko表示gm20541基因敲除純合子小鼠;ctr是指野生型;het是指雜合子。圖7:視網膜前體細胞特異敲除gm20541基因小鼠視網膜切片免疫組化染色結果;小鼠年齡:4個月;os:outer-segment(外節(jié));is:inner-segment(內節(jié));onl:outernuclearlayer(外核層);inl:innernuclearlayer(內核層);圖中:a:視網膜前體細胞特異敲除gm20541基因小鼠視網膜石蠟切片的h&e染色結果,外核層及內核層均變??;b:對不同部位的gm20541敲除鼠視網膜外核層厚度統(tǒng)計。圖8:視網膜前體細胞特異敲除gm20541基因小鼠ihc染色結果。西藏C57動物模型技術
上海研錄生物醫(yī)藥有限公司是一家有著先進的發(fā)展理念,先進的管理經驗,在發(fā)展過程中不斷完善自己,要求自己,不斷創(chuàng)新,時刻準備著迎接更多挑戰(zhàn)的活力公司,在上海市等地區(qū)的商務服務中匯聚了大量的人脈以及**,在業(yè)界也收獲了很多良好的評價,這些都源自于自身的努力和大家共同進步的結果,這些評價對我們而言是比較好的前進動力,也促使我們在以后的道路上保持奮發(fā)圖強、一往無前的進取創(chuàng)新精神,努力把公司發(fā)展戰(zhàn)略推向一個新高度,在全體員工共同努力之下,全力拼搏將共同上海研錄生物醫(yī)藥供應和您一起攜手走向更好的未來,創(chuàng)造更有價值的產品,我們將以更好的狀態(tài),更認真的態(tài)度,更飽滿的精力去創(chuàng)造,去拼搏,去努力,讓我們一起更好更快的成長!