免疫組化如何才能充分脫蠟?
(1)蠟不溶于水,如果脫蠟不干凈,少許蠟存留于切片上,將會(huì)引起染色不均勻、陽(yáng)性物時(shí)隱時(shí)現(xiàn)、真假難辨、背景染色增加等。為了解決上述的問題,切片在染色前必須徹底脫蠟,目前用于脫蠟的試劑主要是二甲苯,因它脫蠟力強(qiáng),脫蠟時(shí)間較短;
(2)脫蠟的時(shí)間要根據(jù)季節(jié),室溫和試劑的新鮮謀面是在不同。如果在夏天,室溫較高,脫蠟試劑也新鮮,則脫蠟時(shí)間不需很多,3-5分鐘就已足夠。如果在冬天,室溫較低,脫蠟試劑也較陳舊,則脫蠟時(shí)間需要延長(zhǎng),10-20分鐘或更長(zhǎng)。
(3)當(dāng)天切的切片,燒烤2小時(shí)后進(jìn)行染色,切片帶有溫度進(jìn)行脫蠟這將可加速脫蠟的過程,如果預(yù)先切好烤好的切片,在染色前,還必須對(duì)切片進(jìn)行加溫10-20分鐘,然后再行脫蠟,這樣脫蠟速度加快,效果魁偉更好??傊?,操作時(shí)應(yīng)根據(jù)不同的季節(jié),不同的室溫,不同的試劑來決定,脫蠟的時(shí)間,原則上是要徹底、干凈、完全地脫去切片上的蠟。
切片染色更多問題匯總,關(guān)注英瀚斯生物。 免疫組化如何得到好的效果?甘肅靠譜免疫組化可以做什么
免疫組化在臨床應(yīng)用中,還能及時(shí)準(zhǔn)確的發(fā)現(xiàn)微小轉(zhuǎn)移灶。英瀚斯生物專業(yè)做實(shí)驗(yàn)外包服務(wù),一站式醫(yī)學(xué)科研平臺(tái)。采用常規(guī)病理方法難以檢出的實(shí)體瘤轉(zhuǎn)移稱為微小轉(zhuǎn)移灶。在常規(guī)組織切片中,辨別單個(gè)或幾個(gè)轉(zhuǎn)移性cancer細(xì)胞很難,淋巴結(jié)內(nèi)竇性組織細(xì)胞增生與某些cancer的早期轉(zhuǎn)移有時(shí)也不易區(qū)別,而采用免疫組化方法,有助于及時(shí)準(zhǔn)確的發(fā)現(xiàn)微小(cancer)轉(zhuǎn)移灶。對(duì)乳腺cancer而言主要是腋窩淋巴結(jié)的檢測(cè),淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移患者預(yù)后差,這對(duì)進(jìn)一步醫(yī)療和預(yù)后判斷十分有意義。江蘇切片免疫組化怎么樣免疫組化樣本如何處理?
免疫組化染色呈陰性結(jié)果的原因有哪些?
1、抗體濃度和質(zhì)量問題以及抗體來源選擇錯(cuò)誤。不是抗體濃度越高就越易出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果,抗原抗體反應(yīng)有前帶和后帶效應(yīng),必須摸索比較好濃度。
2、抗原修復(fù)不全,對(duì)于甲醛固定的組織必須用充分抗原修復(fù)來打開抗原表位,以利于與抗體結(jié)合;建議微波修復(fù)用高火4次*6min試試。有人做過實(shí)驗(yàn),這是比較好的時(shí)間和次數(shù)。若不行,還可高壓修復(fù)。
3、組織切片本身這種抗原含量低。
4、血清封閉時(shí)間過長(zhǎng)。
5、DAB孵育時(shí)間過短。
6、細(xì)胞通透不全,抗體未能充分進(jìn)入胞內(nèi)參與反應(yīng)。
7、開始做免疫組化,建議一定要首先做個(gè)陽(yáng)性對(duì)照片,排除抗體等問題。
免疫組化結(jié)果中的假陰性是指所有抗體標(biāo)記的切片均呈陰性,無陽(yáng)性信號(hào),假陰性結(jié)果不是真實(shí)的反應(yīng)。導(dǎo)致假陰性結(jié)果的原因有:(1)抗原修復(fù)方法選擇不當(dāng),根據(jù)不同的抗原特點(diǎn)采用不同的修復(fù)方法,大多數(shù)抗體要求熱修復(fù),熱修復(fù)又包括高壓修復(fù)、微波修復(fù)及煮沸熱修復(fù);而對(duì)某些細(xì)胞內(nèi)抗原和細(xì)胞間質(zhì)抗原需要用酶消化,如表皮生長(zhǎng)因子(EGFR)要求胃蛋白酶(Pepsin)消化,而Vimentin則不用修復(fù);(2)一抗本身的問題:一抗效價(jià)降低或失效。在免疫組化中染色結(jié)果的假陰性會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)診或漏診,進(jìn)而影響臨床診斷及延誤醫(yī)療。解決這一問題的可通過設(shè)立陽(yáng)性對(duì)照,比較兩者染色結(jié)果。若陽(yáng)性對(duì)照有表達(dá),表明試劑和染色體系及實(shí)驗(yàn)步驟均無問題;若陽(yáng)性對(duì)照無表達(dá),則檢測(cè)過程中某一試劑或某個(gè)步驟存在問題,應(yīng)逐一查找原因。在南京英瀚斯做的免疫組化,效果不錯(cuò)!
免疫組化技術(shù)應(yīng)用于臨床cancer良惡性的判斷,英瀚斯生物為您介紹。對(duì)于反應(yīng)性增生還是cancer性增生,可用免疫球蛋白(Ig)的輕鏈抗體檢測(cè)B淋巴細(xì)胞增生的單克隆或多克隆性來區(qū)別。在濾泡反應(yīng)性增生時(shí),濾泡反應(yīng)中心的細(xì)胞不表達(dá)細(xì)胞凋亡蛋白(bcl-2),bcl-2陰性;而在濾泡性淋巴瘤中,由于90%以上cancer性濾泡細(xì)胞有bcl-2的高表達(dá),bcl-2陽(yáng)性。而增殖細(xì)胞核抗原(PCNA),周期素(Cycling),核抗原(Ki-67)通過對(duì)cancer細(xì)胞增生的程度作出評(píng)價(jià),從而提示增生細(xì)胞的良惡性。免疫組化怎么做?步驟方法?吉林小鼠免疫組化實(shí)驗(yàn)
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免疫組化的發(fā)展路程?在臨床病理診斷中,免疫組織化學(xué)(IHC)是一種很重要的技術(shù)和手段,從20世紀(jì)70年代開始,免疫組化技術(shù)就應(yīng)用于病理診斷,對(duì)于診斷cancer、cancer分類、判斷預(yù)后產(chǎn)生了巨大的影響,同時(shí)也擴(kuò)展了人們對(duì)于各種疾病及cancer形成過程的認(rèn)識(shí),提高了病理診斷與研究水平。但是,隨著免疫組化的廣泛應(yīng)用,發(fā)現(xiàn)免疫組化技術(shù)存在一些局限性。深入研究免疫組化原理和技術(shù),必須熟悉各種抗體真陽(yáng)性反應(yīng)部位,實(shí)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室間免疫組化標(biāo)準(zhǔn)化,使免疫組化在病理診斷中發(fā)揮比較大的輔助作用。如果您有免疫組化相關(guān)的實(shí)驗(yàn),可以與我們英瀚斯生物進(jìn)行聯(lián)系。甘肅靠譜免疫組化可以做什么