94℃,20 秒,59℃,3分鐘,30個(gè)循環(huán);60℃,10分鐘;4℃保存;電泳在ABI 3500XL儀器中進(jìn)行;電泳上樣體系為,1 μl PCR產(chǎn)物,9 μl甲酰胺,其中已加Liz。 實(shí)施例5 以二氧化硅包裹的磁性納米顆粒提取土壤尿液DNA 1)DNA提取 刮取含有尿液的表層土壤,烘干,取100-200 mg土壤樣品,加入樣品管中,然后加入400 ul土壤裂解液和20 ul 蛋白酶k,震蕩混勻后,75℃加熱裂解15分鐘;最大轉(zhuǎn)速離心5分鐘,將上清液轉(zhuǎn)移至新的樣品管中,加入800 ul結(jié)合液,混勻;混合液轉(zhuǎn)移至裝有15 ul二氧化硅包裹的磁性納米顆粒的離心管中,混勻后靜止15分鐘;上磁力架吸附2分鐘,吸棄上清液;加入500 ul漂洗液,混勻,上磁力架吸附1分鐘,吸棄上清;土壤DNA提取的直銷公司。松江區(qū)FastDNA Spin Kit For Soil土壤DNA提取訂購(gòu)
通常被稱為內(nèi)生菌(endophyte)。植物內(nèi)生菌對(duì)植物病蟲害防治、農(nóng)作物增產(chǎn)、提高藥用植物品質(zhì)和藥效、維護(hù)生態(tài)系統(tǒng)平衡等諸多方面具有重要意義,同時(shí)可以作為潛在的生防載體菌而加以利用。從藻類、蕨類,到木本、藤本的維管束植物,幾乎所有類群的植物體內(nèi)都含有內(nèi)生菌。主要包括內(nèi)生細(xì)菌、內(nèi)生***、內(nèi)生放線菌。其中***占絕大多數(shù)、而細(xì)菌中有三分之二是革蘭氏陰性菌。如何獲得植物內(nèi)生菌DNA?植物內(nèi)生菌DNA的提取有著2大難點(diǎn):1。上海土壤DNA提取土壤DNA提取銷售土壤DNA提取保證質(zhì)量——益啟生物公司。
12000rpm離心1分鐘;倒棄收集管中廢液,加入500 ul漂洗液,12000rpm離心1分鐘;倒棄收集管中廢液,加入500 ul漂洗液,12000rpm離心1分鐘;倒棄收集管中廢液,12000rpm離心3分鐘,將離心柱轉(zhuǎn)移至新的離心管中,70℃加熱3分鐘;加入20 ul洗脫液,70℃加熱3分鐘;12000rpm離心1分鐘,丟棄離心柱,離心管中液體即為DNA溶液。 2)PCR擴(kuò)增及電泳 PCR擴(kuò)增使用Identifiler Plus試劑盒,10 μl擴(kuò)增體系中含4 μl master mix、2 μl primer set、4 μl模板,擴(kuò)增程序?yàn)椋?5℃,11分鐘;94℃,20 秒,59℃,3分鐘,30個(gè)循環(huán);60℃,10分鐘;4℃保存;電泳在ABI 3500XL儀器中進(jìn)行;電泳上樣體系為,1 μl PCR產(chǎn)物,9 μl甲酰胺,其中已加Liz。 實(shí)施例4 以石英膜提取土壤尿液DNA 1)DNA提取 刮取含有尿液的表層土壤,烘干,
取100-200 mg土壤樣品,加入樣品管中,然后加入400 ul土壤裂解液和20 ul 蛋白酶k,震蕩混勻后,75℃加熱裂解15分鐘;最大轉(zhuǎn)速離心5分鐘,將上清液轉(zhuǎn)移至新的樣品管中,加入800 ul結(jié)合液,混勻;混合液轉(zhuǎn)移至裝有石英膜的離心柱中,12000rpm離心1分鐘;倒棄收集管中廢液,加入500 ul漂洗液,12000rpm離心1分鐘;倒棄收集管中廢液,加入500 ul漂洗液,12000rpm離心1分鐘;倒棄收集管中廢液,12000rpm離心3分鐘,將離心柱轉(zhuǎn)移至新的離心管中,70℃加熱3分鐘;加入20 ul洗脫液,70℃加熱3分鐘;12000rpm離心1分鐘,丟棄離心柱,離心管中液體即為DNA溶液。 2)PCR擴(kuò)增及電泳 PCR擴(kuò)增使用Identifiler Plus試劑盒,10 μl擴(kuò)增體系中含4 μl master mix、2 μl primer set、4 μl模板,擴(kuò)增程序?yàn)椋?5℃,11分鐘;上海益啟生物公司的土壤DNA提取附帶使用說明書嗎?
游實(shí)驗(yàn)。產(chǎn)品特點(diǎn):1、適用于不同類型土壤及其他環(huán)境樣品。2、不受腐殖質(zhì)干擾。3、30min-60min內(nèi)即可獲得高產(chǎn)量的DNA。4、DNA純度高,并直接用于下游實(shí)驗(yàn)。5、不含有毒有害的試劑成分。案例研究:材料準(zhǔn)備:1.西紅柿栽盆2.淤泥3.沙土4.松樹下5.棕櫚樹下6.花園7.尼羅河百合花栽盆8.草坪9.檸檬樹下10.鱷梨樹。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:500mg樣本經(jīng)過試劑盒提取的總DNA在1.2%瓊脂糖凝膠電泳(0.5×TAE)。通過瓊脂糖凝膠圖中我們可以看出,不論是哪種土壤DNA提取是良好的科學(xué)儀器。青浦區(qū)土壤DNA提取土壤DNA提取
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:沙漠土;Lane 5:陰性對(duì)照。圖:提取不同土壤基因組DNA PCR擴(kuò)增結(jié)果。M: 1kb plus DNA ladder;Lane 1/3/5/7: 酶切前;Lane 2/4/6/8: 酶切后;Lane 1&2:有機(jī)營(yíng)養(yǎng)士;Lane 3&4:花壇土;Lane 5&6:鹽堿土;Lane 78&8:沙漠土。圖:提取不同土壤基因組DNA用Apa I酶切結(jié)果。PART.03。選擇MP試劑盒的理由。MagBeads FastDNATM Kit for Soil:A260/A280更接近1.8, A260/A230更高, 提取純度高于平均水平,提取效果穩(wěn)定。DNA收率效果對(duì)比—濃度更高松江區(qū)FastDNA Spin Kit For Soil土壤DNA提取訂購(gòu)