目前對(duì)于酶很強(qiáng)劑的篩選,主要有2大類方式:一種是采用液化酶,第二種是采用固化酶模式,即將酶固定在某一個(gè)載體上,并結(jié)合分析檢測(cè)技術(shù)篩選中藥活性成分?第一種方法的缺點(diǎn)是溶劑與有機(jī)試劑接觸,酶容易失活,因此液相中的流動(dòng)相中有機(jī)試劑的濃度不宜過(guò)高?而第二種方法也叫配體垂釣法,采用酶固定在一個(gè)載體上后,基于小分子化合物和酶分子間的親和作用辨識(shí)與酶作用的配體,并通過(guò)與現(xiàn)代分析手段相結(jié)合快速鑒定該配體結(jié)構(gòu)?固定化載體材料決定了酶所處的環(huán)境,是影響生物酶性能的重要因素,隨著固定化技術(shù)研究的不斷深入,目前固定化酶的材料包括酶柱?酶微反應(yīng)器?磁珠?磁納米粒子?納米管和中空纖維等?該方法通過(guò)將酶固定化減少酶的失活,已成為從中藥或天然產(chǎn)物中篩選藥理活性物質(zhì)的強(qiáng)有力手段?因此,本文基于當(dāng)前不同疾病酶體系,并結(jié)合現(xiàn)代檢測(cè)技術(shù)在當(dāng)前酶很強(qiáng)劑篩選的應(yīng)用,分別從液化酶和固定化酶2個(gè)方面進(jìn)行總結(jié)?inhibit：底物與inhibit之間無(wú)競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系。南京轉(zhuǎn)錄因子抑制劑生產(chǎn)廠家
酶很強(qiáng)劑：采用液化酶方法外,研究者還應(yīng)用固化ACE法篩選ACEI?Tang等首先將毛細(xì)管依次浸泡在NaOH溶液?聚陽(yáng)離子電解質(zhì)海美溴銨溶液(HDB)和去離子水中,從而使毛細(xì)管內(nèi)壁獲得正電荷?當(dāng)注入酶后,通過(guò)靜電作用結(jié)合在毛細(xì)管內(nèi)壁上,制成毛細(xì)管固定化酶微反應(yīng)器?天然產(chǎn)物粗提物與底物在酶微反應(yīng)器中充分反應(yīng)后,以毛細(xì)管電泳法(CE)測(cè)定產(chǎn)物和底物的峰面積,計(jì)算化合物對(duì)酶的Inhibition rate,判斷待篩選的粗提物中是否存在ACEI?該方法試劑消耗量小?測(cè)試和再生步驟簡(jiǎn)單?固定化酶微反應(yīng)器可重復(fù)利用,可實(shí)現(xiàn)酶很強(qiáng)劑的高通量篩選?Almeida等采用氨基化磁珠固定化ACE,并以此為載體進(jìn)行配體篩選,成功釣出ACE很強(qiáng)劑賴諾普利和多肽類ACE很強(qiáng)劑?南京轉(zhuǎn)錄因子抑制劑生產(chǎn)廠家inhibit：草酸是一種飽和的二元酸稱乙二酸，是一種有機(jī)inhibit。
常見的肝藥酶很強(qiáng)劑的藥物，包括抗傳染的磺胺類藥物，還有甲硝唑、環(huán)丙沙星、氯霉素等，另外抗結(jié)核藥異煙肼也屬于肝藥酶很強(qiáng)劑，氯丙嗪等藥物也有肝藥酶很強(qiáng)劑的作用。肝藥酶很強(qiáng)劑指能夠使肝藥酶活性減弱，肝藥酶是肝臟中起到重要代謝藥物作用的酶，進(jìn)入血循環(huán)需要經(jīng)肝臟代謝的藥物都要經(jīng)過(guò)肝藥酶來(lái)進(jìn)行代謝。如果肝藥酶的活性被降低，就會(huì)導(dǎo)致肝臟代謝藥物的功能減低，所以就可能會(huì)引起發(fā)生藥物損傷的概率會(huì)增加。在使用肝藥酶很強(qiáng)劑藥物期間，要警惕引起肝臟的損傷，考慮適當(dāng)?shù)臏p少藥物用量，避免引起藥物的不良反應(yīng)，除了肝藥酶很強(qiáng)劑之外，還有些藥物屬于肝藥酶誘導(dǎo)劑，會(huì)讓肝藥酶的活性增強(qiáng)。
酶的很強(qiáng)劑：在所有的小分子化合物中，很強(qiáng)劑是較為大家所熟知的。實(shí)際上，很強(qiáng)劑是針對(duì)于酶這類靶點(diǎn)而言的。作為酶的很強(qiáng)劑的小分子通過(guò)跟酶結(jié)合降低酶的催化活性。根據(jù)與酶結(jié)合形式的不同，很強(qiáng)劑可以分為不可逆很強(qiáng)劑和可逆很強(qiáng)劑。前者通過(guò)共價(jià)鍵的形式與酶結(jié)合，這種結(jié)合方式對(duì)酶活性的降低是不可逆的。而可逆很強(qiáng)劑通過(guò)非共價(jià)鍵（如氫鍵、疏水作用等）與酶結(jié)合，這種形式的結(jié)合沒(méi)有經(jīng)過(guò)化學(xué)反應(yīng)，可以通過(guò)稀釋或透析的方式去除，對(duì)于酶活性的降低是可逆的。inhibit：不可逆性inhibit主要與酶共價(jià)結(jié)合。
酶很強(qiáng)劑：Li采用HPLC-DAD-MS/MS-BCD系統(tǒng),應(yīng)用α-葡萄糖苷酶-PNPG酶inhibit篩選體系,在線篩選訶子?玫瑰花?丁香和石榴皮中具有很強(qiáng)α-葡萄糖苷酶活性的化學(xué)成分?為了排除植物中的鞣酸對(duì)α-葡萄糖苷酶的非特異性inhibit作用所帶來(lái)的假陽(yáng)性反應(yīng),該研究采用了明膠沉淀的方法對(duì)植物提取物進(jìn)行了前處理?研究結(jié)果表明訶子中的柯里拉京(Corilagin),以及訶子?玫瑰花?丁香和石榴皮中的共有成分鞣花酸(ellagicacid)對(duì)α-葡萄糖苷酶具有強(qiáng)的inhibit作用,并進(jìn)一步結(jié)合α-葡萄糖苷酶很強(qiáng)劑離線篩選試驗(yàn),驗(yàn)證了該在線方法的可靠性?inhibit：羧甲基纖維素，工業(yè)產(chǎn)品為淡黃色絮狀物質(zhì)，化學(xué)性質(zhì)比較穩(wěn)定，可溶于水。南京轉(zhuǎn)錄因子抑制劑生產(chǎn)廠家
inhibit：硫化鈉是有色金屬氧化礦的活化劑，當(dāng)添加量足夠大時(shí)又是硫化礦的inhibit。南京轉(zhuǎn)錄因子抑制劑生產(chǎn)廠家
酶很強(qiáng)劑：中空纖維通過(guò)物理吸附方式固定酶以用于篩選中藥中的活性成分?Tao等以聚丙烯中空纖維為載體,將甘油三脂酶吸附在聚丙烯中空纖維表面構(gòu)建穩(wěn)定的配體垂釣基質(zhì),以橘皮苷為陽(yáng)性參照,優(yōu)化了酶濃度?孵育時(shí)間?溫度?緩沖液pH值和離子強(qiáng)度等一系列影響因素,從荷葉中篩選出3個(gè)對(duì)甘油三酯具有inhibit作用的黃酮類化合物?該方法操作簡(jiǎn)單,更環(huán)保?另外,納米材料如納米管和納米粒子也成為固定化酶技術(shù)的研究熱點(diǎn)?Wang等利用靜電作用,采用埃洛石納米管(HNTs)固定化脂肪酶,在90min內(nèi)吸附了85%的脂肪酶,與游離脂肪酶相比催化活性更高?南京轉(zhuǎn)錄因子抑制劑生產(chǎn)廠家