5）對(duì)于檢測(cè)靈敏度要求特別高的實(shí)驗(yàn)，建議使用新鮮配制的本產(chǎn)品。6）在進(jìn)行D-熒光素鉀鹽的溶解時(shí)，應(yīng)使用無(wú)鈣鎂離子的DPBS，因鈣鎂離子可能會(huì)抑制熒光素酶的活性，此外鎂離子可能會(huì)對(duì)熒光素的氧化造成影響，從而影響檢測(cè)。7）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。8）本產(chǎn)品只作科研用途！熒光素酶(Luciferase)是自然界中能夠催化熒光素產(chǎn)生生物發(fā)光的酶的統(tǒng)稱(chēng)，其中更有代表性的是來(lái)自螢火蟲(chóng)體內(nèi)(Fire?y)和海腎(Renilla)體內(nèi)的兩類(lèi)螢光素酶，分別命名為F-Luciferase和R-Luciferase，同時(shí)近年來(lái)研究得較多的來(lái)源于高斯氏菌的高斯熒光素酶（Gaussluciferase）。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的過(guò)程中，會(huì)發(fā)出生物熒光(bioluminescence)，可通過(guò)熒光測(cè)定儀設(shè)備測(cè)定luciferin氧化過(guò)程中釋放的生物熒光，常應(yīng)用于啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性調(diào)控及miRNA靶基因驗(yàn)證等方向研究。螢火蟲(chóng)螢光素酶更通用和更常見(jiàn)的報(bào)告基因是北美螢火蟲(chóng)photinuspyralis的熒光素酶，該蛋白質(zhì)不需要翻譯后修飾即可獲得酶活性。高濃度（體內(nèi)）甚至沒(méi)有毒性，可用于原核和真核細(xì)胞。運(yùn)輸和保存運(yùn)輸條件：4℃冰袋運(yùn)輸。D-熒光素鉀鹽使用濃度怎么樣？連云港熒光素酶D-熒光素鉀鹽活題成像
短期保存：4℃干燥避光長(zhǎng)期保存：-20℃干燥避光母液保存：-20℃避光有效期長(zhǎng)期保存：有效期一年工作液：先用現(xiàn)配使用方法1.體外生物發(fā)光檢測(cè)1）用無(wú)菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽，配制成30mg/mL的儲(chǔ)存液(100-200×)，混勻。立即使用，或分裝于-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。2）用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基將儲(chǔ)存液稀釋至mg/mL的工作液濃度。3）去除細(xì)胞培養(yǎng)基。作者：思存鏈接：zhuanlan./p/來(lái)源：知乎著作權(quán)歸作者所有。商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)聯(lián)系作者獲得授權(quán)，非商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)注明出處。高斯熒光素酶近年來(lái)，其他熒光素酶（例如高斯熒光素酶）的使用有所增加，因?yàn)檫@些報(bào)告基因較小，并且不需要ATP的存在。高斯熒光素酶是一種20kD的蛋白質(zhì)，可通過(guò)氧氣催化腔腸素氧化，產(chǎn)生光。來(lái)自于海洋足類(lèi)高斯氏菌的生物發(fā)光酶在表達(dá)后可有效地從哺乳動(dòng)物細(xì)胞中分泌出來(lái)。Amplite?高斯熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒（#AAT-12530）使用專(zhuān)有的發(fā)光配方來(lái)定量細(xì)胞培養(yǎng)基中的熒光素酶活性。當(dāng)該試劑與高斯熒光素酶相互作用時(shí)，產(chǎn)sheng發(fā)光產(chǎn)物，該發(fā)光產(chǎn)物提供強(qiáng)發(fā)光。Amplite高斯熒光素酶報(bào)告基因測(cè)定試劑盒特點(diǎn)：提供了與HTS液體處理儀器兼容的所有基本組件它們具有高靈敏度。宿遷熒光素酶編碼基因D-熒光素鉀鹽使用說(shuō)明D-熒光素鉀鹽的使用說(shuō)明。
或分裝于-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。2）用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基將儲(chǔ)存液稀釋至mg/mL的工作液濃度。3）去除細(xì)胞培養(yǎng)基。4）待圖像分析前，向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液，37℃孵育5-10min，然后進(jìn)行圖像分析。2.***成像分析1）用無(wú)菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲(chǔ)存液，混勻。2）用μm濾膜過(guò)濾除菌。立即使用，或分裝于-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。3）腹腔注射（.），按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進(jìn)行注射。4）注射入體內(nèi)10-15min（待光信號(hào)達(dá)到更強(qiáng)穩(wěn)定平臺(tái)期）后進(jìn)行成像分析。注：建議對(duì)每只動(dòng)物模型都需要建立熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線(xiàn)，從而確定更高信號(hào)檢測(cè)時(shí)間和信號(hào)平臺(tái)期。注意事項(xiàng)1）本品（fireflyluciferin）和甲蟲(chóng)熒光素（beetleluciferin）只只是不同公司在命名上的差異,都是指化合物(S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazolyl)-2-thiazoline-4-carboxylicacid。2）注射方式、動(dòng)物類(lèi)型以及體重等都會(huì)影響信號(hào)的發(fā)射，因此建議每次實(shí)驗(yàn)都要做熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線(xiàn)，確定更佳信號(hào)平臺(tái)期和更佳的檢測(cè)時(shí)間。3）如果要進(jìn)行ATP的檢測(cè)，盡量避免外源ATP的污染，如操作時(shí)戴手套并使用ATP-free的實(shí)驗(yàn)耗材，在進(jìn)行熒光素的溶解時(shí)應(yīng)使用ATP-free無(wú)菌水。
常見(jiàn)的熒光素酶有兩種，分別是螢火蟲(chóng)熒光素酶（fireflyluciferase，編碼基因是luc）和海腎熒光素酶（Renillaluciferase，編碼基因是Rluc），前者的底物是D-Luciferin，后者的底物是Coelenterazine。它們共同的作用原理是在ATP和熒光素酶的催化作用下，底物被氧化發(fā)光（不同底物光的顏色和波長(zhǎng)不同），當(dāng)?shù)孜镞^(guò)量時(shí)，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性。***成像技術(shù)（opticalinvivoimaging）目前主要采用生物發(fā)光（bioluminescence）與熒光（fluorescence）兩種技術(shù)，生物發(fā)光法是基于熒光素酶能催化底物（D-Luciferin或Coelenterazine）化學(xué)發(fā)光的原理，將體外能穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞株植入動(dòng)物體內(nèi)，與后期注射入體內(nèi)的底物發(fā)生反應(yīng)，利用光學(xué)系統(tǒng)檢測(cè)光強(qiáng)度，間接反映出細(xì)胞數(shù)量的變化或細(xì)胞的定位。這項(xiàng)技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于多個(gè)領(lǐng)域常用的有**或疾病動(dòng)物模型的建立，并可用于病毒學(xué)研究、siRNA研究、干細(xì)胞研究、蛋白質(zhì)相互作用研究等。以下主要介紹D-Luciferin（D熒光素）的分類(lèi)：D-Luciferin：有三種，分別是D-Luciferin,SodiumSalt/D熒光素鈉鹽、D-Luciferin,PotassiumSalt/D-熒光素鉀鹽和D-LuciferinFirefly,freeacid/D-螢火蟲(chóng)熒光素。做D-熒光素鉀鹽測(cè)試工作液是先用現(xiàn)配。
酸化后消失，中和或堿化后又出現(xiàn)，微溶于乙醇；比較大吸收波長(zhǎng)（水）。中文名稱(chēng)：熒光素鈉中文別名：熒光黃鈉；熒光橙紅鈉；熒光素二鈉英文名FLUORESCEINSODIUM等級(jí)：BS物性數(shù)據(jù)編輯播報(bào)1.性狀：未確定2.密度（g/cm3,25/4℃）：.相對(duì)蒸汽密度（g/cm3,空氣=1）：未確定4.熔點(diǎn)（oC）：3205.沸點(diǎn)（oC,常壓）：未確定6.沸點(diǎn)（oC,8kPa）：未確定7.折射率：未確定8.閃點(diǎn)（oC）：未確定9.比旋光度（o）：未確定10.自燃點(diǎn)或引燃溫度（oC）：未確定11.蒸氣壓（kPa,25oC）：未確定12.飽和蒸氣壓（kPa,60oC）：未確定13.燃燒熱（KJ/mol）：未確定14.臨界溫度（oC）：未確定15.臨界壓力（KPa）：未確定16.油水（辛醇/水）分配系數(shù)的對(duì)數(shù)值：未確定17.上限（%,V/V）：未確定18.下限（%,V/V）：未確定19.溶解性：溶于水及乙醇，帶有強(qiáng)的綠色熒光，水溶性好。熒光素酶作用下的D-熒光素鉀鹽。宿遷熒光素酶編碼基因D-熒光素鉀鹽使用說(shuō)明
D-熒光素鉀鹽短期保存條件是4℃干燥避光。連云港熒光素酶D-熒光素鉀鹽活題成像
從而實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或藥物的***功效等。也可以利用ATP對(duì)此反應(yīng)體系的影響，根據(jù)生物發(fā)光強(qiáng)度的變化來(lái)指示能量或生命體征。,PotassiumSalt/D-熒光素鉀鹽分子式：NaC11H7N2O3S2·H2O分子量：g/mol純度：高級(jí)純（）應(yīng)用：1）活細(xì)胞、組織或生物體內(nèi)luc標(biāo)記基因和熒光素酶-融合基因體內(nèi)/體外表達(dá)的成像分析；2）***用于報(bào)告基因分析，免疫分析和ATP熒光衛(wèi)生監(jiān)測(cè)分析；Protocol1：InVitroBioluminescentAssays/體外生物發(fā)光檢測(cè)1）配制成100mM的儲(chǔ)存液（200×，濃度30mg/ml）。混勻后立即使用或分裝后-20℃凍存。2）用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基1∶200稀釋儲(chǔ)存液，配制工作液(終濃度150μg/mL)。3）去除培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基直至無(wú)殘留。4）圖像分析前立即向細(xì)胞內(nèi)添加1×熒光素工作液，然后進(jìn)行圖像分析（或者細(xì)胞放在37℃短時(shí)間孵育后檢測(cè)可增強(qiáng)信號(hào)）。D-熒光素鉀鹽注：螢光素、螢光素酶、螢火蟲(chóng)螢光素酶、螢光素鉀鹽、螢光素鉀鹽鹽也經(jīng)常被稱(chēng)作熒光素、熒光素酶、螢火蟲(chóng)熒光素酶、熒光素鉀鹽、熒光素鈉鹽。Protocol2：Invivoanalysisinmice/小鼠***成像分析1）用無(wú)菌的DPBS（w/oMg2+、Ca2+）配制D-熒光素鉀鹽溶液(15mg/mL)，。一旦使用，保持冰冷且避光。連云港熒光素酶D-熒光素鉀鹽活題成像