D-熒光素鉀鹽是一種化學(xué)品。中文別名:(S)-4,5-二氫-2-(6-羥基苯并噻唑-2-基)噻唑-4-甲酸鉀鹽英文別名:(S)-4,5-Dihydro-2-(6-hydroxybenzothiazol-2-yl)thiazole-4-carboxylicacidpotassiumsalt產(chǎn)品描述D-熒光素(D-Luciferin)是熒光素酶(Luciferase)的常用底物,普遍應(yīng)用于整個生物技術(shù)領(lǐng)域,特別是體內(nèi)活題成像技術(shù)。其作用機(jī)制是在ATP和熒光素酶的作用下,熒光素底物能夠被氧化發(fā)光。當(dāng)熒光素過量時,產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性(見下圖)。將攜帶熒光素酶編碼基因(Luc)的慢病毒轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株,構(gòu)建原位腫大的瘤模型,之后注入熒光素底物,通過IVIS系統(tǒng)來檢測光強(qiáng)度變化,從而實(shí)時監(jiān)測疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或進(jìn)行藥物藥效評價(jià)等。也可以利用ATP對此反應(yīng)體系的影響,根據(jù)生物發(fā)光強(qiáng)度的變化來指示能量或生命體征。注:在抗腫大的瘤藥物藥效評價(jià)試驗(yàn)中,由于生物自發(fā)光檢測需要根據(jù)熒光素表達(dá)標(biāo)定腫大的瘤大小,受腫大的瘤生長所發(fā)生的腫大的瘤內(nèi)部壞死影響,生物自發(fā)光并不能很覆蓋面廣的評價(jià)腫大的瘤生長,在抗腫大的瘤藥效評價(jià)有較高要求的實(shí)驗(yàn)中,建議使用小動物核磁成像系統(tǒng)檢測腫大的瘤生長。D-熒光素也常用于體外研究。D-熒光素鉀鹽的發(fā)射波長是多少?氨基熒光素
Q:熒光素酶作為報(bào)告基因相比于熒光蛋白有哪些優(yōu)勢?Luciferase的靈敏度相比于GFP提高10-100倍以上,同時具有更寬的動態(tài)范圍,便于數(shù)值分析比較,不需要熒光顯微鏡,而且在***實(shí)驗(yàn)中其熒光穿透性高于EGFP等熒光蛋白,同時由于沒有內(nèi)源活性、其本底信號很低。而GFP等熒光蛋白相比于熒光素酶的優(yōu)勢在于可以進(jìn)行失蹤定位,并且其觀測不需裂解細(xì)胞,方便進(jìn)行適時觀察。Q:海腎熒光素酶和螢火蟲熒光素酶相比,相對活性如何?在氧、鎂和ATP的存在下,螢火蟲熒光素酶作用于甲蟲熒光素,而來源于海洋腔腸(Renillareniformis)的熒光素酶在氧的存在下作用于海腎熒光素。雙報(bào)告基因技術(shù)(Dual-reporterassays),結(jié)合了螢火蟲熒光素酶測試和海腎熒光素酶測試。Q:雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)轉(zhuǎn)染效率很低而且復(fù)孔重復(fù)不出來是什么原因?轉(zhuǎn)染效率低的話可以從三個方面改善,首先要確保細(xì)胞狀態(tài)是好的,通常我們選出處于分裂期的細(xì)胞,另外陽性對照您可以選擇過表達(dá)的熒光蛋白質(zhì)粒,還有就是DNA的質(zhì)量尤為重要,更好是先酶切驗(yàn)證。這個實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果很靈敏,有一定差異是正常的,通常只要確保它在一個數(shù)量級之內(nèi)即可。如果差異超出這個范圍可以從兩方面改善,一是記住保持樣本的均一性。南通D-熒光素鉀鹽活題成像原理D-熒光素鉀鹽的激發(fā)波長是多長?
SodiumSalt/D熒光素鈉鹽分子式:NaC11H7N2O3S2·H2O分子量:g/mol純度:高級純()應(yīng)用:1)體外化學(xué)發(fā)光分析(invitro);2)***成像實(shí)驗(yàn)(invivo);3)高靈敏度ATP分析;步驟:Protocol1:InVitroBioluminescentAssays/體外生物發(fā)光檢測1)用mL蒸餾水溶解gD-熒光素鈉鹽,配制成100mM的儲存液(200×,濃度30mg/ml)?;靹蚝罅⒓词褂没蚍盅b后-20℃凍存。2)用組織培養(yǎng)基1∶200稀釋儲存液,配置工作液(終濃度150μg/mL)。3)去除培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基。4)待圖像分析前,向細(xì)胞內(nèi)添加1×熒光素工作液,然后進(jìn)行圖像分析。Protocol2:Invivoanalysis/***成像分析1)用無菌的PBS(w/oMg2+、Ca2+)配制D-熒光素鈉鹽工作液(15mg/mL),。一旦使用,保持冰冷且避光。D-熒光素(D-Luciferin)是熒光素酶(Luciferase)的常用底物,普遍應(yīng)用于整個生物技術(shù)領(lǐng)域,尤其是體內(nèi)***成像技術(shù)。其作用機(jī)制是在ATP和熒光素酶的作用下,熒光素(底物)能夠被氧化發(fā)光(見下圖)。當(dāng)熒光素過量時,產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性。將攜帶熒光素酶編碼基因(Luc)的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后,導(dǎo)入研究動物如大、小鼠體內(nèi),之后注入熒光素,通過生物發(fā)光成像技術(shù)(BLI)來檢測光強(qiáng)度變化。
4)待圖像分析前,向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液,37℃孵育5-10min,然后進(jìn)行圖像分析。2.活ti成像分析1)用無菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲存液,混勻。2)用μm濾膜過濾除菌。立即使用,或分裝于-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。3)腹腔注射(.),按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進(jìn)行注射,以小鼠為例,每只小鼠體重假定20g,每只小鼠用量3mg;4)注射入體內(nèi)10-15min(待光信號達(dá)到更強(qiáng)穩(wěn)定平臺期)后進(jìn)行成像分析。注:建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學(xué)曲線,從而確定更高信號檢測時間和信號平臺期。注意事項(xiàng)1)本品(fireflyluciferin)和甲蟲熒光素(beetleluciferin)、螢光素鉀鹽只是不同別名,以CAS號115144-35-9為準(zhǔn)。2)注射方式、動物類型以及體重等都會影響信號的發(fā)射,因此建議每次實(shí)驗(yàn)都要做熒光素酶動力學(xué)曲線,確定更佳信號平臺期和更佳的檢測時間。3)如果要進(jìn)行ATP的檢測,盡量避免外源ATP的污染,如操作時戴手套并使用ATP-free的實(shí)驗(yàn)耗材,在進(jìn)行熒光素的溶解時應(yīng)使用ATP-free無菌水。4)為避免反復(fù)凍融,本產(chǎn)品配制成溶液后建議適當(dāng)分裝后-20℃或-80℃保存。為防止氧化,如有條件,可以對儲存液充氮?dú)饣驓鍤夂蟊4?。D-熒光素鉀鹽的使用說明。
故根據(jù)熒光反應(yīng)的情況可以檢測樣品中的微生物含量。APT熒光檢測儀***用于食品、飲用水、餐飲器具等的微生物快速檢測。1970年,科學(xué)家***次測定了螢火蟲熒光素酶的結(jié)構(gòu);1985年,科學(xué)家***克隆了一種螢火蟲熒光素酶基因,并在大腸桿菌中表達(dá),從而得到了具有活性的熒光素酶;1986年,科學(xué)家們測定了該種螢火蟲熒光素酶的基因序列。隨后,各種螢火蟲熒光素酶基因相繼克隆成功,熒光素酶的研究和應(yīng)用不斷發(fā)展。目前,熒光素酶發(fā)光系統(tǒng)的分析技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用到醫(yī)學(xué)、生命科學(xué)、環(huán)境科學(xué)、微生物學(xué)等許多領(lǐng)域。以醫(yī)學(xué)領(lǐng)域?yàn)槔?*們將熒光素酶基因嵌入到*細(xì)胞中,再注入熒光素,使*細(xì)胞發(fā)光,通過探測熒光,就能監(jiān)測*細(xì)胞的擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移。同理,用這種方法能對致病基因、***免疫機(jī)制等進(jìn)行研究,對某些疾病進(jìn)行診斷,監(jiān)測疫苗、藥物和治療方法的效力。D-熒光素鹽也算是鈉鹽和鉀鹽。宿遷熒光素酶D-熒光素鉀鹽活題成像原理
D-熒光素鉀鹽的活題成像技術(shù)。氨基熒光素
在食品衛(wèi)生領(lǐng)域由于ATP生物發(fā)光技術(shù)無需培養(yǎng)過程,操作簡便、靈敏度高,數(shù)分鐘內(nèi)可得到結(jié)果,具有其它微生物檢測方法無法比擬的優(yōu)勢,是目前檢測微生物更快的方法。熒光素是更受歡迎的多功能生物熒光底物之一。在螢火蟲和幾種其它甲蟲中發(fā)現(xiàn)了螢火蟲熒光酶/熒光素。通過中間體dioxetanone介導(dǎo)作用,熒光素酶氧化ATPji活的熒光素。螢火蟲熒光素酶在ATP的輔助下氧化熒光素產(chǎn)生熒光。這個反應(yīng)發(fā)生的幾秒內(nèi)在560nm處的化學(xué)熒光達(dá)到更高峰,當(dāng)熒光素和ATP都超量存在的條件下,發(fā)射光與熒光素酶的活性成比例關(guān)系。螢火蟲熒光素酶很早以前就用于與抗體結(jié)合形成偶聯(lián)物,作為免疫分析中用熒光素作為底物進(jìn)行檢測的標(biāo)簽。與HRP和堿性磷酸酶相比,熒光素酶不耐化學(xué)修飾。這個酶的一個特殊的優(yōu)點(diǎn)是,除了高靈敏度外,在哺乳動物組織中內(nèi)源性熒光素酶的活性很低。熒光素酶另一個重要的作用是用于衛(wèi)生監(jiān)測。熒光素酶/熒光素系統(tǒng)可用于檢測污染,因?yàn)楫a(chǎn)生熒光所需的ATP存在于所以活ti生物中。這種類型的ATP生物熒光特性足以保證對食品表面的檢測,無論是在加工制作工程中設(shè)備的污染還是產(chǎn)品的污染都能檢出。D-熒光素(D-Luciferin)是熒光素酶(Luciferase)的常用底物。氨基熒光素