室溫培育30min后加入細(xì)胞孔板中，置于培養(yǎng)箱常規(guī)培養(yǎng)。2)單克隆細(xì)胞篩選轉(zhuǎn)染24h后胰酶消化細(xì)胞并按1∶6比例接種到新6孔板中，同時(shí)加入實(shí)驗(yàn)確定的濃度G418，隨后每2d更換一次培養(yǎng)基并維持G418篩選直至單細(xì)胞抗性克隆的出現(xiàn)。分別挑選單一抗性克隆至96孔板，待其逐漸增殖后轉(zhuǎn)入24孔板中繼續(xù)傳代培養(yǎng)。3)熒光素酶活性鑒定陽(yáng)性克隆單一抗性克隆傳代至第五代時(shí)用LuciferaseAs-sayAystem檢測(cè)熒光素酶活性。檢測(cè)時(shí)，各克隆按1×105個(gè)/孔接種到24孔板，24h后細(xì)胞裂解液裂解12000rpm，4℃離心10min，收集裂解物，取上清10μl加入96孔白板中，向每孔加入50μl熒光素酶96microplateluminometer連續(xù)讀底物，停留2s后，取10s的熒光值（RLU），每個(gè)克隆設(shè)3個(gè)復(fù)孔，保留RLU值高的細(xì)胞克隆繼續(xù)傳代培養(yǎng)，再過(guò)5代后進(jìn)行熒光素酶活性檢測(cè)。保留RLU值維持較高的克隆直至第30代，熒光素酶活性更高的幾個(gè)克隆MCF-7-luc即為陽(yáng)性克隆.各不同數(shù)量細(xì)胞克隆的熒光值檢測(cè)7-luc陽(yáng)性克隆細(xì)胞按細(xì)胞數(shù)將篩出的MCF-4×104、2×104、1×104、5000、2500、1250、625、312和156分別接種到96孔黑板中，另外一組只有細(xì)胞，一組只有培養(yǎng)基作對(duì)照，設(shè)置2個(gè)復(fù)孔，常規(guī)培去上清并用PBS洗兩次。D-熒光素鉀鹽測(cè)試適用范圍包括哪些？熒光生物
4）待圖像分析前，向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液，37℃孵育5-10min，然后進(jìn)行圖像分析。2.活ti成像分析1）用無(wú)菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲(chǔ)存液，混勻。2）用μm濾膜過(guò)濾除菌。立即使用，或分裝于-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。3）腹腔注射（.），按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進(jìn)行注射，以小鼠為例，每只小鼠體重假定20g，每只小鼠用量3mg；4）注射入體內(nèi)10-15min（待光信號(hào)達(dá)到更強(qiáng)穩(wěn)定平臺(tái)期）后進(jìn)行成像分析。注：建議對(duì)每只動(dòng)物模型都需要建立熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線，從而確定更高信號(hào)檢測(cè)時(shí)間和信號(hào)平臺(tái)期。注意事項(xiàng)1）本品（fireflyluciferin）和甲蟲(chóng)熒光素（beetleluciferin）、螢光素鉀鹽只是不同別名，以CAS號(hào)115144-35-9為準(zhǔn)。2）注射方式、動(dòng)物類型以及體重等都會(huì)影響信號(hào)的發(fā)射，因此建議每次實(shí)驗(yàn)都要做熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線，確定更佳信號(hào)平臺(tái)期和更佳的檢測(cè)時(shí)間。3）如果要進(jìn)行ATP的檢測(cè)，盡量避免外源ATP的污染，如操作時(shí)戴手套并使用ATP-free的實(shí)驗(yàn)耗材，在進(jìn)行熒光素的溶解時(shí)應(yīng)使用ATP-free無(wú)菌水。4）為避免反復(fù)凍融，本產(chǎn)品配制成溶液后建議適當(dāng)分裝后-20℃或-80℃保存。為防止氧化，如有條件，可以對(duì)儲(chǔ)存液充氮?dú)饣驓鍤夂蟊４妗晒庠霭讋﹐b-1廠家做D-熒光素鉀鹽的哪家便宜。
LAR）Promega公司推出的第一種螢光素酶檢測(cè)試劑LuciferaseAssaySystem（LAR），為靈敏、非放射性的報(bào)告基因檢測(cè)拉開(kāi)了序幕。LAR與螢火蟲(chóng)螢光素酶（luc）報(bào)告基因一起，為研究人員開(kāi)始了解基因表達(dá)調(diào)控因子提供了首要的工具。[1]1995Dual-Luciferase?報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)（DLR）DLR是第一種允許在單個(gè)樣本中依次檢測(cè)兩個(gè)報(bào)告基因的試劑。通過(guò)允許螢光素酶活性的內(nèi)部歸一化，在提高報(bào)告基因檢測(cè)的可靠性方面取得了關(guān)鍵進(jìn)展。此外，pGL3報(bào)告基因載體系列具有改良后的螢火蟲(chóng)螢光素酶基因，luc+。這個(gè)改造一種報(bào)告基因以實(shí)現(xiàn)性能改進(jìn)的例子后來(lái)被進(jìn)一步應(yīng)用到pGL4和luc2報(bào)告基因上，通過(guò)生物信息學(xué)和合成方法，實(shí)現(xiàn)了更大的改進(jìn)。[1]1999ENLITEN?/UltraGlo?重組螢光素酶Promega公司在早期推出的一種重組螢火蟲(chóng)螢光素酶（Enliten）基礎(chǔ)上，改造出了一種稱為UltraGlo?的熱穩(wěn)定性螢光素酶。UltraGlo?的開(kāi)發(fā)是在各種檢測(cè)和儲(chǔ)藏條件下進(jìn)行一步法“加樣-讀數(shù)”檢測(cè)的關(guān)鍵。此后，通過(guò)開(kāi)發(fā)新的方法來(lái)改變螢火蟲(chóng)螢光素酶檢測(cè)的信號(hào)動(dòng)力學(xué)，例如Bright-Glo?、Steady-Glo?和Dual-Glo?允許使用微孔板進(jìn)行檢測(cè)。而“加樣-讀數(shù)”的形式簡(jiǎn)化了樣品處理。
luciferyladenylate）+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧熒光素+AMP+光這一反應(yīng)非常節(jié)省能量，幾乎所有輸入反應(yīng)的能量都被轉(zhuǎn)化為光。與之形成鮮明對(duì)比的是人類使用的白熾燈，只有越10%的能量被轉(zhuǎn)化為光，剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M(fèi)。分析熒光素或熒光素酶不是特定的分子，而是對(duì)于所有能夠產(chǎn)生熒光的底物和其對(duì)應(yīng)的酶的統(tǒng)稱，雖然它們各不相同。不同的能夠控制發(fā)光的生物體用不同的熒光素酶來(lái)催化不同的發(fā)光反應(yīng)。更為人所知的發(fā)光生物是螢火蟲(chóng)，而其所采用不同的熒光素酶與其他發(fā)光生物如熒光菇（發(fā)光類臍菇，Omphalotusoleariu'）或許多海洋生物都不相同。在螢火蟲(chóng)中，發(fā)光反應(yīng)所需的氧氣是從被稱為腹部氣管（abdominaltrachea）的管道中輸入。一些生物，如叩頭蟲(chóng)，含有多種不同的熒光素酶，能夠催化同一熒光素底物，而發(fā)出不同顏色的熒光。螢火蟲(chóng)有2000多種，而叩甲總科（包括螢火蟲(chóng)、叩頭蟲(chóng)和相關(guān)昆蟲(chóng)）則有更多，因此它們的熒光素酶對(duì)于分子系統(tǒng)學(xué)研究很有用。目前研究得更透徹的熒光素酶是來(lái)自Photinini族螢火蟲(chóng)中的北美螢火蟲(chóng)（Photinuspyrali'）。應(yīng)用熒光素酶可以在實(shí)驗(yàn)室中用基因工程的方法生成，并被用于多種不同的實(shí)驗(yàn)。做D-熒光素鉀鹽測(cè)試找哪家公司？
是新型底物開(kāi)發(fā)的一個(gè)早期實(shí)例。[1]2012NanoLuc?螢光素酶基于定向進(jìn)化和新型底物開(kāi)發(fā)方面的經(jīng)驗(yàn)，研究人員從蝦的螢光素酶改造設(shè)計(jì)出一種新型螢光素酶報(bào)告基因，即NanoLuc?螢光素酶。這是一種小分子（19kDa）單體酶，具有獨(dú)特的底物，其靈敏度比已具備高靈敏度的螢火蟲(chóng)或海腎螢光素酶系統(tǒng)高約100倍。這種新型的報(bào)告基因有著范圍廣的應(yīng)用前景，為進(jìn)一步的技術(shù)開(kāi)發(fā)奠定了基礎(chǔ)。[1]2015NanoBRET?技術(shù)NanoLuc?的小體積和非常明亮的光輸出是作為蛋白質(zhì)標(biāo)簽的理想特征。這些特征還很適合作為生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移（BRET）的供體。一項(xiàng)針對(duì)各種能量受體熒光基團(tuán)的深入研究發(fā)現(xiàn)，紅色光譜中的可選擇性有助于消除與BRET測(cè)定相關(guān)的一些挑戰(zhàn)。可將這些熒光基團(tuán)添加到蛋白質(zhì)配基等分子中以測(cè)量靶蛋白的結(jié)合，或與HaloTag?配基耦聯(lián)以進(jìn)行活細(xì)胞中蛋白質(zhì)：蛋白質(zhì)相互作用的檢測(cè)。[1]2016NanoBiT?技術(shù)隨著NanoLuc?的誕生，Promega的科學(xué)家努力將該報(bào)告基因改造為多亞基系統(tǒng)，即“NanoLuc?BinaryTechnology”或NanoBiT?。該系統(tǒng)由兩部分組成：11個(gè)氨基酸的小標(biāo)簽和一個(gè)更大，更精細(xì)的NanoLuc?亞基，LgBiT。這兩部分結(jié)構(gòu)互補(bǔ)結(jié)合。D-熒光素鉀鹽長(zhǎng)期保存是有效期一年。揚(yáng)州熒光素鈉鹽D-熒光素鉀鹽公司
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2）按10μL/g體重的濃度向每支小鼠注射相應(yīng)量的15mg/mL熒光素溶液；3）腹腔注射10-15min后進(jìn)行成像分析。（對(duì)每只動(dòng)物模型做熒光素動(dòng)力學(xué)研究以確定峰值信號(hào)獲取時(shí)間）Firefly,freeacid/D-螢火蟲(chóng)熒光素分子式：C11H8N2O3S2分子量：g/mol外觀：白色至淺黃色粉末溶解：，形成近乎無(wú)色至淺黃色的清夜保存：-15°C避光應(yīng)用：1）活細(xì)胞、組織或生物體內(nèi)luc標(biāo)記基因和熒光素酶-融合基因體內(nèi)/體外表達(dá)的成像分析；2）***用于報(bào)告基因分析，免疫分析和ATP熒光衛(wèi)生監(jiān)測(cè)分析D-熒光素也常用于體外研究，包括熒光素酶和ATP水平分析；報(bào)告基因分析；高通量測(cè)序和各種污染檢測(cè)。目前有三種產(chǎn)品形式：D-熒光素（游離酸），D-熒光素鹽（鈉鹽和鉀鹽）。主要差別在于溶解特性：前者的水溶性以及緩沖體系的溶解性都較弱，除非溶于弱堿如低濃度NaOH和KOH溶液，可溶于甲醇和DMSO；后者易溶于水或緩沖液中，使用方便，溶劑d0926aa8-0148-40da-80fa-f65性，特別適合體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。配成溶液后的這三種產(chǎn)品，在絕大多數(shù)的應(yīng)用上都沒(méi)有實(shí)質(zhì)性的差別。相關(guān)列表魯米諾/3-氨基苯二甲酰肼/發(fā)光氨異魯米諾/4-氨基鄰苯二甲酰肼吖啶酯DMAE-NHS吖啶酰肼NSP-SA-ADH吖啶酯ME-DMAE-NHS哌嗪-N,N'-二。熒光生物
南京翌科生物科技有限公司致力于商務(wù)服務(wù)，是一家其他型公司。翌科生物致力于為客戶提供良好的外泌體提取，非編碼RNA試劑，檢測(cè)試劑，轉(zhuǎn)染試劑，一切以用戶需求為中心，深受廣大客戶的歡迎。公司注重以質(zhì)量為中心，以服務(wù)為理念，秉持誠(chéng)信為本的理念，打造商務(wù)服務(wù)良好品牌。翌科生物立足于全國(guó)市場(chǎng)，依托強(qiáng)大的研發(fā)實(shí)力，融合前沿的技術(shù)理念，飛快響應(yīng)客戶的變化需求。