請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。8）本產(chǎn)品只作科研用途！D-熒光素鉀鹽是熒光素酶的水溶性底物，存在于多種發(fā)光生物體中。在ATP和熒光素酶的催化作用下，D-熒光素鉀被氧化，產(chǎn)生藍(lán)綠色的光(560nm)，當(dāng)?shù)孜镞^量時，產(chǎn)生的Chemicalbook光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)。編碼熒光素酶的Luc基因是植物、哺乳動物細(xì)胞的常用報告基因。由于沒有背景干擾，因此可以很容易地檢測出低至。用途D-熒光素鉀鹽是一類在生物體中發(fā)現(xiàn)的能引起生物發(fā)光的雜環(huán)化合物，如螢火蟲。在ATP存在下，螢光素酶將其氧化脫羧后會發(fā)光?；瘜W(xué)研究中可用于熒光素酶的基板。生物活性D-Luciferin是螢火蟲熒光素酶的底物。體外研究D-luciferinisthenaturalsubstrateoftheenzymeluciferase(Luc),μM.體內(nèi)研究Bioluminescenceimaging(BLI)usingthefireflyluciferase(Fluc)(5,10,15,and20min)μLofD-luciferin(intraperitoneallyorintravenously)stocksolutionpergramofbodyweight:normally~200μLfora20gmouseforastandard150mg/(eitherPotassiumorSodiumSalt)atroomtemperatureanddissolveindPBS。南京D-熒光素鉀鹽測試公司哪家便宜。熒光標(biāo)記的生物素
可用熒光素酶檢測系統(tǒng)靈敏方便地測定熒光素酶基因的表達(dá)。熒光素酶報告基因有許多優(yōu)點(diǎn)：①非放射性；②比CAT及其他報告基因速度快；③比CAT靈敏100倍；④熒光素酶在哺乳細(xì)胞中的半衰期為3小時，在植物中的半衰期為3．5小時。由于半衰期短，故啟動子的改變會即時導(dǎo)致熒光素酶活性的改變，而熒光素酶不會積累。相反，CAT在哺乳細(xì)胞中的半衰期為50小時。熒光素酶濃度在10—16mol/L（10pS/L）到10-8mol/L（1mg/L）范圍內(nèi)，熒光信號強(qiáng)度與酶濃度成正比。在理想條件下，可檢測到l0-20mol/L的熒光素酶。檢測步驟：1．用生物信息學(xué)方法分析并預(yù)測啟動子區(qū)可能的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)。2．設(shè)計引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動子片段，將此片段插入到熒光素酶報告基因質(zhì)粒（pGL3-basic）中。3．篩選陽性克隆，測序。擴(kuò)增克隆并提純質(zhì)粒備用。4．?dāng)U增轉(zhuǎn)錄因子質(zhì)粒，提純備用。同時準(zhǔn)備相應(yīng)的空載質(zhì)粒對照，提純備用。5．培養(yǎng)293（或其它目的細(xì)胞），并接種于24孔板中，生長10-24小時（80%匯合度）。6．將報告基因質(zhì)粒與轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染細(xì)胞。7．提取蛋白并用于熒光素酶檢測。8．加入底物，測定熒光素酶的活性。9．計算相對熒光強(qiáng)度，并與空載對照比較。常州熒光素鉀鹽D-熒光素鉀鹽哪家好做D-熒光素鉀鹽測試工作液是先用現(xiàn)配。
是新型底物開發(fā)的一個早期實(shí)例。[1]2012NanoLuc?螢光素酶基于定向進(jìn)化和新型底物開發(fā)方面的經(jīng)驗(yàn)，研究人員從蝦的螢光素酶改造設(shè)計出一種新型螢光素酶報告基因，即NanoLuc?螢光素酶。這是一種小分子（19kDa）單體酶，具有獨(dú)特的底物，其靈敏度比已具備高靈敏度的螢火蟲或海腎螢光素酶系統(tǒng)高約100倍。這種新型的報告基因有著范圍廣的應(yīng)用前景，為進(jìn)一步的技術(shù)開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。[1]2015NanoBRET?技術(shù)NanoLuc?的小體積和非常明亮的光輸出是作為蛋白質(zhì)標(biāo)簽的理想特征。這些特征還很適合作為生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移（BRET）的供體。一項(xiàng)針對各種能量受體熒光基團(tuán)的深入研究發(fā)現(xiàn)，紅色光譜中的可選擇性有助于消除與BRET測定相關(guān)的一些挑戰(zhàn)?？蓪⑦@些熒光基團(tuán)添加到蛋白質(zhì)配基等分子中以測量靶蛋白的結(jié)合，或與HaloTag?配基耦聯(lián)以進(jìn)行活細(xì)胞中蛋白質(zhì)：蛋白質(zhì)相互作用的檢測。[1]2016NanoBiT?技術(shù)隨著NanoLuc?的誕生，Promega的科學(xué)家努力將該報告基因改造為多亞基系統(tǒng)，即“NanoLuc?BinaryTechnology”或NanoBiT?。該系統(tǒng)由兩部分組成：11個氨基酸的小標(biāo)簽和一個更大，更精細(xì)的NanoLuc?亞基，LgBiT。這兩部分結(jié)構(gòu)互補(bǔ)結(jié)合。
其中更有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyralis的螢火蟲體內(nèi)的熒光素酶。在相應(yīng)化學(xué)反應(yīng)中，熒光的產(chǎn)生是來自于螢光素的氧化，有些情況下反應(yīng)體系中也包括三磷酸腺苷（ATP）。沒有熒光素酶的情況下，螢光素與氧氣反應(yīng)的速率非常慢，而鈣離子的存在常常可以進(jìn)一步加速反應(yīng)（與肌肉收縮的情況相似）。[1]熒光生成反應(yīng)通常分為以下兩步：螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸（luciferyladenylate）+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧熒光素+AMP+光這一反應(yīng)非常節(jié)省能量，幾乎所有輸入反應(yīng)的能量都被轉(zhuǎn)化為光。與之形成鮮明對比的是人類使用的白熾燈，只有越10%的能量被轉(zhuǎn)化為光，剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M(fèi)。熒光素或熒光素酶不是特定的分子，而是對于所有能夠產(chǎn)生熒光的底物和其對應(yīng)的酶的統(tǒng)稱，雖然它們各不相同。不同的能夠控制發(fā)光的生物體用不同的熒光素酶來催化不同的發(fā)光反應(yīng)。更為人所知的發(fā)光生物是螢火蟲，而其所采用不同的熒光素酶與其他發(fā)光生物如熒光菇（發(fā)光類臍菇，Omphalotusolearius）或許多海洋生物都不相同。在螢火蟲中，發(fā)光反應(yīng)所需的氧氣是從被稱為腹部氣管（abdominaltrachea）的管道中輸入。一些生物，如叩頭蟲，含有多種不同的熒光素酶，能夠催化同一熒光素底物。D-熒光素鉀鹽找南京翌科生物科技有限公司。
可運(yùn)用熒光素酶報告系統(tǒng)分析其相對活性。c.驗(yàn)證特定轉(zhuǎn)錄因子同其調(diào)控序列的作用，將該序列（通常為啟動子區(qū)域）插入報告基因載體，同時在實(shí)驗(yàn)細(xì)胞***轉(zhuǎn)過表達(dá)該轉(zhuǎn)錄因子，可分析轉(zhuǎn)錄因子過表達(dá)是否提高熒光素酶活性。d.可以分析信號通路是否***，將該信號通路的下游響應(yīng)原件序列構(gòu)建入報告基因載體，在不同上游信號條件下，熒光素酶活性**了通路的下游響應(yīng)。例如在GPCR研究中，將cAMPresponseelement（CRE）載入報告基因載體，構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株后，可以用于分析GPRC的***與6b7a976f-99ae-4c48-8159-4bd篩選。又如，將HIF1α的響應(yīng)原件hypoxia-responsiveelement(HRE)插入luciferase報告載體構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株，可以用于低氧相關(guān)通路的研究。e.驗(yàn)證microRNA的靶序列，將待測的3’UTR序列插入報告基因載體，再共轉(zhuǎn)入該microRNA，如果熒光素酶活性下降，則提示為其靶序列。Q：在[信諾金達(dá)]做熒光素酶報告基因檢測，需要提供什么？實(shí)驗(yàn)結(jié)果包括哪些？您需要提供：1.基因序列或模板，需提供詳細(xì)的轉(zhuǎn)錄因子、目的基因或microRNA信息；2.實(shí)驗(yàn)細(xì)胞，[信諾金達(dá)]默認(rèn)為使用293T細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，[信諾金達(dá)]會為您提供實(shí)驗(yàn)流程及完整報告一份，包括實(shí)驗(yàn)原始數(shù)據(jù)、圖片、分析結(jié)果等。D-熒光素鉀鹽檢測公司招代理嗎？鹽城游離酸D-熒光素鉀鹽濃度
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重組為一個明亮的螢光素酶。這些亞基的親和力可以和SmBiT肽一樣低，從而可以進(jìn)行蛋白質(zhì)相互作用的測定；也可以和HiBiT一樣高，從而允許自我組裝。[1]2017HiBiT?技術(shù)基于NanoBiT?系統(tǒng)的研究，我們將與LgBiT具有極強(qiáng)親和作用的。HiBiT作為一種易于檢測且具有高靈敏度的蛋白質(zhì)標(biāo)簽，具有多種功能，例如當(dāng)與基于CRIPSR的標(biāo)簽一起使用時，可以創(chuàng)建內(nèi)源性報告基因模型。[1]2020Lumit?技術(shù)隨著NanoBiT?技術(shù)的發(fā)展，人們認(rèn)識到可以利用該系統(tǒng)通過結(jié)合免疫測定的組分檢測多種分析物。由此產(chǎn)生的平臺（現(xiàn)稱為“Lumit”）提供了具有高靈敏度的簡化免疫檢測法。熒光素酶（英文名稱：Luciferase）是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱，其中更有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyrali'的螢火蟲體內(nèi)的熒光素酶。在相應(yīng)化學(xué)反應(yīng)中，熒光的產(chǎn)生是來自于螢光素的氧化，有些情況下反應(yīng)體系中也包括三磷酸腺苷（ATP）。沒有熒光素酶的情況下，螢光素與氧氣反應(yīng)的速率非常慢，而鈣離子的存在常?？梢赃M(jìn)一步加速反應(yīng)（與肌肉收縮的情況相似）。熒光生成反應(yīng)通常分為以下兩步：螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸。熒光標(biāo)記的生物素
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