螢火蟲熒光素酶D-熒光素鉀鹽公司

來源: 發(fā)布時間:2022-06-10

    包括熒光素酶和ATP水平分析;報告基因分析;高通量測序和各種污染檢測。目前有三種產品形式:D-熒光素(游離酸),D-熒光素鹽(鈉鹽和鉀鹽)。主要差別在于溶解特性:前者的水溶性以及緩沖體系的溶解性都較弱,除非溶于弱堿如低濃度NaOH和KOH溶液??扇苡诩状己虳MSO;后者能夠易溶于水或緩沖液中,使用方便,溶劑無毒性,特別適合體內實驗。配成溶液后的這三種產品,在絕大多數的應用上都沒有實質性的差別。產品性質運輸和保存運輸條件:4℃冰袋運輸;短期保存:4℃干燥避光長期保存:-20℃干燥避光母液保存:-20℃避光有效期長期保存:有效期一年工作液:先用現配使用方法1.體外生物發(fā)光檢測1)用無菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽,配制成30mg/mL的儲存液(100-200×),混勻。立即使用,或分裝于-20℃避光保存,避免反復凍融。2)用預熱好的組織培養(yǎng)基將儲存液稀釋至mg/mL的工作液濃度。3)去除細胞培養(yǎng)基。4)待圖像分析前,向細胞內添加熒光素工作液,37℃孵育5-10min,然后進行圖像分析。2.活題成像分析1)用無菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲存液,混勻。2)用μm濾膜過濾除菌。立即使用,或分裝于-20℃避光保存,避免反復凍融。3)腹腔注射(.)。D-熒光素鉀鹽測試方法是體外生物發(fā)光檢測。螢火蟲熒光素酶D-熒光素鉀鹽公司

    常見的熒光素酶有兩種,分別是螢火蟲熒光素酶(fireflyluciferase,編碼基因是luc)和海腎熒光素酶(Renillaluciferase,編碼基因是Rluc),前者的底物是D-Luciferin,后者的底物是Coelenterazine。它們共同的作用原理是在ATP和熒光素酶的催化作用下,底物被氧化發(fā)光(不同底物光的顏色和波長不同),當底物過量時,產生的光量子數與熒光素酶的濃度呈正相關性。***成像技術(opticalinvivoimaging)目前主要采用生物發(fā)光(bioluminescence)與熒光(fluorescence)兩種技術,生物發(fā)光法是基于熒光素酶能催化底物(D-Luciferin或Coelenterazine)化學發(fā)光的原理,將體外能穩(wěn)定表達熒光素酶的細胞株植入動物體內,與后期注射入體內的底物發(fā)生反應,利用光學系統(tǒng)檢測光強度,間接反映出細胞數量的變化或細胞的定位。這項技術已被廣泛應用于多個領域常用的有**或疾病動物模型的建立,并可用于病毒學研究、siRNA研究、干細胞研究、蛋白質相互作用研究等。以下主要介紹D-Luciferin(D熒光素)的分類:D-Luciferin:有三種,分別是D-Luciferin,SodiumSalt/D熒光素鈉鹽、D-Luciferin,PotassiumSalt/D-熒光素鉀鹽和D-LuciferinFirefly,freeacid/D-螢火蟲熒光素。熒光素鈉測試D-熒光素也常用于身體的外部研究。

    而是對于所有能夠產生螢光的底物和其對應的酶的統(tǒng)稱,雖然它們各不相同。不同的能夠控制發(fā)光的生物體用不同的螢光素酶來催化不同的發(fā)光反應。**為人所知的發(fā)光生物是螢火蟲,而其所采用不同的螢光素酶與其他發(fā)光生物如熒光菇(發(fā)光類臍菇,Omphalotusolearius)或許多海洋生物都不相同。在螢火蟲中,發(fā)光反應所需的氧氣是從被稱為腹部氣管(abdominaltrachea)的管道中輸入。一些生物,如叩頭蟲,含有多種不同的螢光素酶,能夠催化同一螢光素底物,而發(fā)出不同顏色的螢光。螢火蟲有2000多種,而叩甲總科(包括螢火蟲、叩頭蟲和相關昆蟲)則有更多,因此它們的螢光素酶對于分子系統(tǒng)學研究很有用。如今研究得**透徹的螢光素酶是來自Photinini族螢火蟲中的北美螢火蟲(Photinuspyralis)。[1]螢光素酶可以在實驗室中用基因工程的方法生成,并被用于多種不同的實驗。螢光素酶的基因可以被合成并插入到生物體中或轉染到細胞中。研究者利用基因工程已經使得小鼠、家蠶、馬鈴薯等一些生物可以合成螢光素酶。間接體外成像是一種強大的研究手段,可以對整個動物體中的細胞群落進行分析:將不同類型的細胞(骨髓干細胞、T細胞等)標記上(即表達)螢光素酶。

    酸化后消失,中和或堿化后又出現,微溶于乙醇;比較大吸收波長(水)。中文名稱:熒光素鈉中文別名:熒光黃鈉;熒光橙紅鈉;熒光素二鈉英文名FLUORESCEINSODIUM等級:BS物性數據編輯播報1.性狀:未確定2.密度(g/cm3,25/4℃):.相對蒸汽密度(g/cm3,空氣=1):未確定4.熔點(oC):3205.沸點(oC,常壓):未確定6.沸點(oC,8kPa):未確定7.折射率:未確定8.閃點(oC):未確定9.比旋光度(o):未確定10.自燃點或引燃溫度(oC):未確定11.蒸氣壓(kPa,25oC):未確定12.飽和蒸氣壓(kPa,60oC):未確定13.燃燒熱(KJ/mol):未確定14.臨界溫度(oC):未確定15.臨界壓力(KPa):未確定16.油水(辛醇/水)分配系數的對數值:未確定17.上限(%,V/V):未確定18.下限(%,V/V):未確定19.溶解性:溶于水及乙醇,帶有強的綠色熒光,水溶性好。南京D-熒光素鉀鹽測試公司有哪幾家。

    具體實驗流程:注:該操作流程通常用來檢測轉染了螢火蟲熒光素酶基因的真核細胞中熒光素酶表達的活性,不適用于對細菌熒光素酶進行檢測。1.實驗***天,消化并接種細胞(根據具體實驗選擇合適的細胞)于35mm細胞培養(yǎng)皿,置于5%CO2、飽和濕度的37℃培養(yǎng)箱內培養(yǎng)過夜。2.等細胞密度達到70%時用Luciferase報告基因質粒、LacZ的表達質粒及其它質粒(根據具體實驗確定)共轉染細胞(根據具體實驗選擇轉染方法,如磷酸鈣沉淀法、PEI、lipofectamine2000等均可)。3.轉染24-36h后,吸取培養(yǎng)液,用預冷的PBS(無鈣和鎂離子)洗滌細胞。注:熒光酶的酶促反應會被痕量的鈣所抑制,故用磷酸鈣轉染的細胞在收集細胞前應充分洗滌除去含鈣介質。4.在每個培養(yǎng)皿中加入350μl預冷的harvestbuffer,于4℃或冰上放置10min裂解細胞。5.在細胞裂解期間,準備足量的ml微量離心管,將ATPbuffer與luciferinbuffer以1:,每管100μl。6.依次取等體積的細胞裂解液(100μl)至步驟5中的離心管中,迅速混勻,在發(fā)光儀(Luminometer)上讀取吸光值。注:發(fā)光反應會迅速衰減,將細胞裂解液加入反應液后5s內必須讀取吸光值。7.確保以相同操作手法讀取全部樣品吸光值后。做D-熒光素鉀鹽測試找哪家公司?徐州熒光素鈉鹽D-熒光素鉀鹽供應商

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    luciferin)的分子結構如右圖所示:,在氧氣、ATP存在的條件下和熒光素酶發(fā)生反應,生成氧化熒光素(oxyluciferin),分子結構如右圖所示,并產生長發(fā)生光現象。但是該底物熒光素以前大多依賴進口,產品價格昂貴。而且由于該產品容易降解、受潮影響使用效果。所以,需要國產化的方式生產,一方面可以降低成本,一方面可以增強使用效果。作者:科遠迪鏈接:zhuanlan./p/來源:知乎著作權歸作者所有。商業(yè)轉載請聯系作者獲得授權,非商業(yè)轉載請注明出處。D-luciferin,potassiumsalt熒光素產品說明書發(fā)光原理哺乳動物生物發(fā)光,一般是將Fireflyluciferase基因(由554個氨基酸構成,約50KD)即熒光素酶基因整合到預期觀察的細胞染色體DNA上以表達熒光素酶,培養(yǎng)出能穩(wěn)定表達熒光素酶的細胞株,當細胞分裂、轉移、分化時,熒光素酶也會得到持續(xù)穩(wěn)定的表達。基因、細胞和活題動物都可被熒光素酶基因標記。將標記好的細胞接種到實驗動物體內后,當外源(腹腔或靜脈注射)給予其底物熒光素(D-luciferin,potassiumsalt,以下均簡稱熒光素),即可在幾分鐘內產生長發(fā)生光現象。所發(fā)的光波長在540-600nm。這種酶在ATP,氧存在的條件下,催化熒光素的氧化反應才可以發(fā)光。螢火蟲熒光素酶D-熒光素鉀鹽公司

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