并上下振蕩數(shù)次混勻。備注:為了盡量減少污染,未使用完的細胞凍存液**好凍回-20℃,反復(fù)凍融不影響使用效果。2.用細胞消化液將生長良好的細胞消化成單細胞,并用細胞計數(shù)器或血球計數(shù)板計數(shù)細胞濃度。備注:懸浮細胞不需要消化但仍需要細胞計數(shù),不易消化成單細胞的各種293細胞等**好使用含有EDTA的胰酶進行消化。3.用低速離心沉淀細胞,棄去上清。備注:通常2000~3000rpm離心5~10min即可。4.用適量細胞凍存液重懸細胞。備注:細胞濃度可根據(jù)情況調(diào)整為1~5×106/ml,通常為3×106/ml左右。5.按每管1ml分裝到細胞凍存管中。6.直接放入-70℃冰箱中凍存。備注:無需程序降溫盒或從4℃到-20℃到-70℃冰箱的繁瑣程序降溫。。備注:對于不同細胞,使用本細胞凍存液也可在-70℃冰箱中保存數(shù)周甚至數(shù)月,但建議**好盡快轉(zhuǎn)入液氮中保存。8.復(fù)蘇方法同常規(guī)細胞凍存液。備注:對于大多數(shù)對DMSO不敏感的細胞,復(fù)蘇時甚至傳代前無需去除細胞凍存液,實際上本細胞凍存液中某些成分具有一定的促細胞生長特性??梢?,Quick-Freezing-M無血清細胞凍存液相對于含血清細胞凍存液的優(yōu)勢有:1.即用型,無需現(xiàn)配,直接將細胞懸浮于凍存液中即可2.通用型。無血清細胞凍存液的配置是什么?南京原代細胞凍存液配方
作者:普拉特澤生物鏈接:zhuanlan./p/來源:知乎著作權(quán)歸作者所有。商業(yè)轉(zhuǎn)載請聯(lián)系作者獲得授權(quán),非商業(yè)轉(zhuǎn)載請注明出處。首先我們在凍存的過程中要減少冰晶的形成,尤其是大冰晶的形成:緩慢凍存細胞,可使細胞內(nèi)避免產(chǎn)生大的冰晶。那么我們該怎樣凍存細胞呢?一、慢凍細胞1、常規(guī)程序:使用程序降溫盒當溫度在-25℃以上時,1-2℃/min。當溫度在-25℃以下時,5-10℃/min。當溫度達到-100℃時,可迅速轉(zhuǎn)入液氮中。2、簡易程序:冷凍管管口朝上,放入紗布袋內(nèi),紗布袋系以線繩,通過線繩將紗布袋固定于液氮罐罐口,按每分鐘下降1-2℃的速度,在40min內(nèi)降至液氮表面過夜,次晨投入液氮中。3、傳統(tǒng)程序:冷凍管置于4℃10min,-20℃30min,-80℃16-18h(或隔夜),液氮長期儲存。二、低溫保護劑常用的低溫保護劑是DMSO,它是一種滲透保護劑,可迅速透入細胞,提高細胞膜對水的通透性,降低冰點,延緩凍結(jié)過程,能使細胞內(nèi)水分在凍結(jié)前透出細胞外,在胞外形成冰晶,減少胞內(nèi)冰晶,從而減少冰晶對細胞的損傷。三、細胞凍存方法1、預(yù)先配制凍存液:凍存液比例多種,根據(jù)細胞的特性進行調(diào)整凍存液的比例:5%—10%DMSO+20%—90%血清+0%—70%基礎(chǔ)培養(yǎng)液;2、取對數(shù)生長期的細胞。浙江快速細胞凍存液溶液怎么保存無血清細胞凍存液研究領(lǐng)域。
再放入-80℃冰箱冷凍過夜,次日保存到液氮罐中。目前更多使用程序降溫盒,將細胞凍存管放于盒內(nèi),直接置于超低溫冰箱,程序降溫盒可控制每分鐘下降1℃。目前也有商業(yè)化的快速凍存液,可不經(jīng)過程序降溫過程,直接置于超低溫冰箱。注:細胞凍存后可以長期保存,但為妥善起見,凍存半年后,**好取出一支凍存管的細胞復(fù)蘇培養(yǎng),觀察生長情況,然后再繼續(xù)凍存。懸浮細胞的凍存1.直接將細胞收集到離心管,棄上清3.以生長培養(yǎng)基(含20%胎牛血清)或100%胎牛血清重懸細胞至終濃度約107/ml,加入10%的DMSO。4.以每管1ml分裝至凍存管中。5.置于4oC30min,再轉(zhuǎn)入-20℃2h后,再放入-80℃冰箱冷凍過夜,次日保存到液氮罐中;或置于程序降溫盒中,按相關(guān)的操作指南進行操作。液氮罐使用注意事項1.初次使用前檢查容器內(nèi)膽是否清潔干燥,外部有無凹陷及嚴重碰傷,如有輕微凹陷及碰傷,經(jīng)試驗其蒸發(fā)性能不變,仍可繼續(xù)使用,如性能下降,應(yīng)停止使用,避免經(jīng)濟損失。2.液氮容器應(yīng)放在陰涼干燥處,應(yīng)有良好的通風,不應(yīng)放置在靠近熱源,陽光直照,以及風口處,嚴禁放置液氮容器的房間緊閉門窗,以免室內(nèi)因液氮蒸發(fā)使氧氣含量下降,造成呼吸困難。3.只能用于充裝液氮,凍存細胞和病毒用。
產(chǎn)品簡介:在細胞體外培養(yǎng)工作中,為了達到長期保存細胞的生物活性的目的,須將細胞進行冷凍保存,并在實驗需要的時候?qū)⑵渲匦聫?fù)蘇和培養(yǎng)。目前,細胞凍存更常用的技術(shù)是液氮冷凍保存法,主要采用添加適量保護劑使細胞緩慢降溫至指定溫度范圍,從而到達保護細胞的目的。EKBIOTech無血清細胞凍存液是EKBIO技術(shù)團隊在長期的細胞研究過程中針對細胞的凍存和復(fù)蘇不斷優(yōu)化實驗條件,面向數(shù)百種細胞研發(fā)出的特點使用凍存液產(chǎn)品。該產(chǎn)品添加了細胞沉降穩(wěn)定劑,可延緩細胞在凍存過程中的沉降速率,防止細胞互相擠壓,影響細胞凍存效果。另外,添加了細胞膜保護劑、滲透性細胞膜內(nèi)保護劑、非滲透性細胞保護劑等多種冷凍保護劑,這些成分在溶液中同水分子結(jié)合,發(fā)生水合作用,弱化水的結(jié)晶過程使溶液的粘性增加從而少冰晶的形成,能極大降低細胞在凍存過程中冰晶對于細胞的損傷,有效提高細胞復(fù)蘇存活率。該產(chǎn)品配方成分明確,不含血清、不含動物源性蛋白,可減少各類細菌、病毒和支原體等污染,保證凍存細胞的安全;574d075a-6771-4443-9ef3-0ba適用于常規(guī)細胞系、原代細胞,同時亦適合于無血清培養(yǎng)細胞和蛋白表達細胞。與傳統(tǒng)凍存液相比。做無血清細胞凍存液真的靠譜嗎?
正確凍存細胞并從液氮中復(fù)蘇是細胞培養(yǎng)中**重要的的技術(shù)方法之一。防止細胞內(nèi)形成冰晶并**大程度降低細胞壓力,是凍存過程保持細胞活力的關(guān)鍵。我們可提供各種各樣的無菌過濾、經(jīng)應(yīng)用測試的冷凍保護劑,如DMSO和含/不含DMSO的即用型細胞凍存培養(yǎng)基,可**大程度確保凍存和解凍過程中的細胞活力。即用型細胞凍存培養(yǎng)基便捷的細胞凍存培養(yǎng)基試劑無需滴定DMSO濃度,且可提供不含DMSO的制劑版本。CryoStor?細胞凍存培養(yǎng)基提供2%、5%和10%濃度選擇,以及不含DMSO的制劑版本CryoSOFree?。pZerve?是一種同時適合含血清培養(yǎng),或不含二甲基亞砜(DMSO)、胎牛血清或其他動物來源成分的無血清培養(yǎng)的凍存溶液。EmbryoMax?2X凍存培養(yǎng)基用于ES(胚胎干)細胞,采用**MSO和胎牛血清配制而成HypoThermosol?FRS保存液可增強并延長2–8°C下細胞、組織和***的保存細胞凍存與細胞復(fù)蘇,是細胞培養(yǎng)過程中的常見工作。細胞凍存,是指將細胞貯存在**溫環(huán)境中,使細胞暫時“冬眠”的技術(shù),在需要的時候再進行復(fù)蘇。細胞復(fù)蘇,是把凍存在-80℃冰箱或液氮中的細胞快速解凍,并使細胞重新恢復(fù)生長的技術(shù)。本文普諾賽將為大家介紹細胞凍存與復(fù)蘇的技術(shù)要點和操作步驟。南京翌科生物科技有限公司無血清細胞凍存液價格。蘇州EKBIO Tech細胞凍存液溶液怎么保存
無血清細胞凍存液的產(chǎn)品有哪幾種?南京原代細胞凍存液配方
DMSO)、甘油、乙二醇、丙二醇、甲醇、乙醇、丙醇、和甲酰胺等。這類保護劑能夠在細胞冷凍懸液完全凝固之前,穿過細胞膜滲透到細胞內(nèi),在細胞內(nèi)外產(chǎn)生一定的摩爾濃度,降低細胞內(nèi)外未結(jié)冰溶液中電解質(zhì)的濃度,從而保護細胞免受高濃度電解質(zhì)的損傷。同時,細胞內(nèi)水分也不會過分外滲,避免了細胞過分脫水皺縮。非滲透性冷凍保護劑一般是些大分子物質(zhì),不能滲透到細胞內(nèi)。該類保護劑主要包括聚yi烯吡ge烷酮、蔗糖、聚乙二醇、葡聚糖、白蛋白及***等。其保護機制的假設(shè)很多,其中一種可能是,聚yi烯吡ge烷酮等大分子物質(zhì)可以優(yōu)先同溶液中的水分子相結(jié)合,降低溶液中自由水的含量。使冰點降低。減少冰晶的形成;同時,由于其分子量大,使溶液中電解質(zhì)濃度降低,從而減輕溶質(zhì)損傷。01細胞凍存的原理細胞凍存是細胞保存的主要方法之一,也是保持細胞活性和增殖能力的重要手段。細胞可以通過被暫時休眠(凍存),仿佛童話里的睡美人,留住年輕芳華,等到需要時再被輕輕喚醒(復(fù)蘇)。低溫下,活細胞中的生物和化學(xué)反應(yīng)都會極大降低,為細胞長期凍存提供了可能。冷凍對大多數(shù)活生物體都是致命的,細胞凍存是利用冷凍保護劑來降低冰點,緩慢凍結(jié)細胞的過程中,細胞內(nèi)水分透出細胞。南京原代細胞凍存液配方
南京翌科生物科技有限公司是一家翌科生物基于團隊十余年的研發(fā)基礎(chǔ),建立了行業(yè)前端的外泌體與非編碼 RNA 研究和轉(zhuǎn)化平臺。公司目前擁有豐富的產(chǎn)品線,包括外泌體提取與檢測試劑、非編碼 RNA 提取與檢測試劑、轉(zhuǎn)染試劑、microRNA 表達文庫、臨床大數(shù)據(jù)庫及涵蓋分子、細胞、動物的綜合科技服務(wù)等 100 多種試劑和科研外包服務(wù)。公司堅持國產(chǎn)試劑自主研發(fā),服務(wù)全國各級高校、研究所、醫(yī)院、第三方檢測機構(gòu)、生物醫(yī)藥公司等數(shù)千家客戶。的公司,是一家集研發(fā)、設(shè)計、生產(chǎn)和銷售為一體的專業(yè)化公司。翌科生物深耕行業(yè)多年,始終以客戶的需求為向?qū)В瑸榭蛻籼峁?**的外泌體提取,非編碼RNA試劑,檢測試劑,轉(zhuǎn)染試劑。翌科生物繼續(xù)堅定不移地走高質(zhì)量發(fā)展道路,既要實現(xiàn)基本面穩(wěn)定增長,又要聚焦關(guān)鍵領(lǐng)域,實現(xiàn)轉(zhuǎn)型再突破。翌科生物創(chuàng)始人金芳芳,始終關(guān)注客戶,創(chuàng)新科技,竭誠為客戶提供良好的服務(wù)。