luciferin)的分子結(jié)構(gòu)如右圖所示：，在氧氣、ATP存在的條件下和熒光素酶發(fā)生反應(yīng)，生成氧化熒光素(oxyluciferin)，分子結(jié)構(gòu)如右圖所示，并產(chǎn)生長發(fā)生光現(xiàn)象。但是該底物熒光素以前大多依賴進口，產(chǎn)品價格昂貴。而且由于該產(chǎn)品容易降解、受潮影響使用效果。所以，需要國產(chǎn)化的方式生產(chǎn)，一方面可以降低成本，一方面可以增強使用效果。作者：科遠迪鏈接：zhuanlan./p/來源：知乎著作權(quán)歸作者所有。商業(yè)轉(zhuǎn)載請聯(lián)系作者獲得授權(quán)，非商業(yè)轉(zhuǎn)載請注明出處。D-luciferin，potassiumsalt熒光素產(chǎn)品說明書發(fā)光原理哺乳動物生物發(fā)光，一般是將Fireflyluciferase基因（由554個氨基酸構(gòu)成，約50KD）即熒光素酶基因整合到預(yù)期觀察的細胞染色體DNA上以表達熒光素酶，培養(yǎng)出能穩(wěn)定表達熒光素酶的細胞株，當(dāng)細胞分裂、轉(zhuǎn)移、分化時,熒光素酶也會得到持續(xù)穩(wěn)定的表達?；颉⒓毎突铑}動物都可被熒光素酶基因標(biāo)記。將標(biāo)記好的細胞接種到實驗動物體內(nèi)后，當(dāng)外源（腹腔或靜脈注射）給予其底物熒光素(D-luciferin，potassiumsalt，以下均簡稱熒光素)，即可在幾分鐘內(nèi)產(chǎn)生長發(fā)生光現(xiàn)象。所發(fā)的光波長在540-600nm。這種酶在ATP，氧存在的條件下，催化熒光素的氧化反應(yīng)才可以發(fā)光。D-熒光素鉀鹽的使用說明。泰州熒光素鈉鹽D-熒光素鉀鹽應(yīng)用
具體實驗流程：注：該操作流程通常用來檢測轉(zhuǎn)染了螢火蟲熒光素酶基因的真核細胞中熒光素酶表達的活性，不適用于對細菌熒光素酶進行檢測。1．實驗***天，消化并接種細胞（根據(jù)具體實驗選擇合適的細胞）于35mm細胞培養(yǎng)皿，置于5％CO2、飽和濕度的37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)過夜。2．等細胞密度達到70％時用Luciferase報告基因質(zhì)粒、LacZ的表達質(zhì)粒及其它質(zhì)粒（根據(jù)具體實驗確定）共轉(zhuǎn)染細胞（根據(jù)具體實驗選擇轉(zhuǎn)染方法，如磷酸鈣沉淀法、PEI、lipofectamine2000等均可）。3．轉(zhuǎn)染24－36h后，吸取培養(yǎng)液，用預(yù)冷的PBS（無鈣和鎂離子）洗滌細胞。注：熒光酶的酶促反應(yīng)會被痕量的鈣所抑制，故用磷酸鈣轉(zhuǎn)染的細胞在收集細胞前應(yīng)充分洗滌除去含鈣介質(zhì)。4．在每個培養(yǎng)皿中加入350μl預(yù)冷的harvestbuffer,于4℃或冰上放置10min裂解細胞。5．在細胞裂解期間，準(zhǔn)備足量的ml微量離心管，將ATPbuffer與luciferinbuffer以1：，每管100μl。6．依次取等體積的細胞裂解液（100μl）至步驟5中的離心管中，迅速混勻，在發(fā)光儀（Luminometer）上讀取吸光值。注：發(fā)光反應(yīng)會迅速衰減，將細胞裂解液加入反應(yīng)液后5s內(nèi)必須讀取吸光值。7．確保以相同操作手法讀取全部樣品吸光值后?；窗矡晒馑谼-熒光素鉀鹽試劑D-熒光素鉀鹽測試方法是體外生物發(fā)光檢測。
而發(fā)出不同顏色的熒光。螢火蟲有2000多種，而叩甲總科（包括螢火蟲、叩頭蟲和相關(guān)昆蟲）則有更多，因此它們的熒光素酶對于分子系統(tǒng)學(xué)研究很有用。目前研究得更透徹的熒光素酶是來自Photinini族螢火蟲中的北美螢火蟲（Photinuspyralis）。熒光素酶報告基因（Luc）是指以熒光素(luciferin)為底物來檢測螢火蟲熒光素酶(fireflyluciferase)活性的一種報告系統(tǒng)。熒光素酶可以催化luciferin氧化oxyluciferin，在luciferin氧化的過程中，會發(fā)出生物熒光(bioluminescence)。熒光素酶是能夠催化不同底物氧化發(fā)光的一類酶，哺乳細胞無內(nèi)源性熒光素酶。更常用的熒光素酶有細菌熒光素酶、螢火蟲熒光素酶和Renilla熒光素酶。細菌熒光素酶對熱敏感，因此在哺乳細胞的應(yīng)用中受到限制。螢火蟲熒光素酶靈敏度高，檢測線性范圍寬達7～8個數(shù)量級，是更常用于哺乳細胞的報道基因，用熒光比色計即可檢測酶活性，因而適用于高通量篩選。隨著具有膜通透性和光裂解作用的螢火蟲熒光素酶的應(yīng)用，無需裂解細胞即可檢測酶活性。Renilla熒光素酶催化腸腔（coelenterazine）氧化，產(chǎn)物可透過生物膜，可能是更適用于活細胞的報告分子。將熒光素酶報告基因載體轉(zhuǎn)染到細胞中。
螢光素酶（英文名稱：Luciferase）是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱，其中**有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyrali'的螢火蟲體內(nèi)的螢光素酶，螢火蟲發(fā)光的腹部或海洋的藍色發(fā)光波浪將大自然中生物發(fā)光奇跡呈現(xiàn)于世。在生物化學(xué)和分子生物學(xué)的早期，這一現(xiàn)象被認(rèn)為是發(fā)展生物分析的有力平臺。1991年，Promega發(fā)布了***代螢光素酶分析產(chǎn)品，并啟動了基于螢光素酶的進一步創(chuàng)新計劃，通過持續(xù)致力于研究和創(chuàng)新生物發(fā)光系統(tǒng)建立了各種不同的分析技術(shù)。Promega螢光素酶技術(shù)發(fā)光史里程碑AGlo-ingHistoryofInnovationandDiscovery1990年12月，Promega***提出螢火蟲螢光素酶(Luc)作為一種新興報告基因技術(shù)的應(yīng)用可能性。當(dāng)時的人們認(rèn)為，螢火蟲螢光素酶具備的生物發(fā)光特性、極高的靈敏度和快速簡單的檢測流程等特點，可能會對分子生物學(xué)家的研究產(chǎn)生重要的影響。幾個月后，***代螢火蟲螢光素酶報告基因載體和檢測試劑在Promega誕生，使這項新技術(shù)正式并更***地為全球研究人員服務(wù)。隨后30年里，Promega不斷在螢光素酶實驗工具領(lǐng)域推陳出新，保持技術(shù)***的地位。這里提到的螢光素酶即熒光素酶。[1]1991螢光素酶檢測系統(tǒng)。做D-熒光素鉀鹽測試哪個公司好？
酸化后消失，中和或堿化后又出現(xiàn)，微溶于乙醇；比較大吸收波長（水）。中文名稱：熒光素鈉中文別名：熒光黃鈉；熒光橙紅鈉；熒光素二鈉英文名FLUORESCEINSODIUM等級：BS物性數(shù)據(jù)編輯播報1.性狀：未確定2.密度（g/cm3,25/4℃）：.相對蒸汽密度（g/cm3,空氣=1）：未確定4.熔點（oC）：3205.沸點（oC,常壓）：未確定6.沸點（oC,8kPa）：未確定7.折射率：未確定8.閃點（oC）：未確定9.比旋光度（o）：未確定10.自燃點或引燃溫度（oC）：未確定11.蒸氣壓（kPa,25oC）：未確定12.飽和蒸氣壓（kPa,60oC）：未確定13.燃燒熱（KJ/mol）：未確定14.臨界溫度（oC）：未確定15.臨界壓力（KPa）：未確定16.油水（辛醇/水）分配系數(shù)的對數(shù)值：未確定17.上限（%,V/V）：未確定18.下限（%,V/V）：未確定19.溶解性：溶于水及乙醇，帶有強的綠色熒光，水溶性好。D-熒光素鉀鹽的測試方法有哪幾種？徐州熒光素酶D-熒光素鉀鹽公司
D-熒光素鉀鹽測試需要滿足哪些條件？泰州熒光素鈉鹽D-熒光素鉀鹽應(yīng)用
附錄ⅧB），與標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液制成的對照液比較，不得更濃（）。干燥失重取本品，在105℃干燥至恒重，減失重量不得過%（附錄ⅧL）。鋅鹽取本品，加氯化鈉的飽和水溶液10ml溶解后，加稀鹽酸2ml，搖勻，濾過，濾液中加亞鐵**鉀試液1ml，不得發(fā)生渾濁。5鑒別方法編輯(1)取本品的水溶液(1→2000)1滴，點于濾紙上，即生成黃色斑點，趁濕置溴蒸氣中，1分鐘后再使與氨蒸氣接觸，斑點即變?yōu)樯罘奂t色。(2)本品的水溶液顯強烈的熒光，用大量的水稀釋后仍極明顯；但加酸使成酸性后，熒光即消失；再加堿使成堿性，熒光又顯出。(3)本品熾灼灰化后顯鈉鹽的鑒別反應(yīng)（附錄Ⅲ）。6含量測定編輯取本品約，精密稱定，加水20ml溶解后，加稀鹽酸5ml使熒光素析出，用丁醇－氯仿(1:1)提取4次，每次20ml，合并提取液，用水10ml洗滌，洗液再用異丁醇－氯仿(1:1)5ml振搖提取，合并提取液，置105℃恒重的容器中，在水浴上通風(fēng)蒸發(fā)至干，殘渣用乙醇10ml溶解后，再置水浴上蒸干，并在105℃干燥至恒重，精密稱定，殘渣重量與相乘，即得供試量中含有C20H10Na2O5的重量。熒光素鈉是一種有機化合物，分子式為C20H10Na2O5，橙紅色粉末，無氣味，有吸濕性；易溶于水，溶液呈黃紅色，并帶極強的黃綠色熒光。泰州熒光素鈉鹽D-熒光素鉀鹽應(yīng)用
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