徐州螢火蟲(chóng)熒光素酶D-熒光素鉀鹽濃度

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2022-05-30

    我們將與LgBiT具有極強(qiáng)親和作用的。HiBiT作為一種易于檢測(cè)且具有高靈敏度的蛋白質(zhì)標(biāo)簽,具有多種功能,例如當(dāng)與基于CRIPSR的標(biāo)簽一起使用時(shí),可以創(chuàng)建內(nèi)源性報(bào)告基因模型。[1]2020Lumit?技術(shù)隨著NanoBiT?技術(shù)的發(fā)展,人們認(rèn)識(shí)到可以利用該系統(tǒng)通過(guò)結(jié)合免疫測(cè)定的組分檢測(cè)多種分析物。由此產(chǎn)生的平臺(tái)(現(xiàn)稱為“Lumit”)提供了具有高靈敏度的簡(jiǎn)化免疫檢測(cè)法。螢光素酶(英語(yǔ):Luciferase)是自然界中能夠產(chǎn)生生物發(fā)光的酶的統(tǒng)稱,其中**有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyralis的螢火蟲(chóng)體內(nèi)的螢光素酶。在相應(yīng)化學(xué)反應(yīng)中,熒光的產(chǎn)生是來(lái)自于螢光素的氧化,有些情況下反應(yīng)體系中也包括三磷酸腺苷(ATP)。沒(méi)有螢光素酶的情況下,螢光素與氧氣反應(yīng)的速率非常慢,而鈣離子的存在常??梢赃M(jìn)一步加速反應(yīng)(與肌肉收縮的情況相似)。螢光生成反應(yīng)通常分為以下兩步:螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸(luciferyladenylate)+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧螢光素+AMP+光這一反應(yīng)非常節(jié)省能量,幾乎所有輸入反應(yīng)的能量都被轉(zhuǎn)化為光。與之形成鮮明對(duì)比的是人類使用的白熾燈,只有約10%的能量被轉(zhuǎn)化為光,剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M(fèi)。螢光素或螢光素酶不是特定的分子。D-熒光素鉀鹽熒光素酶和ATP水平分析。徐州螢火蟲(chóng)熒光素酶D-熒光素鉀鹽濃度

    就可以用高敏感度的CCD相機(jī)對(duì)動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行***觀察而不會(huì)傷害到動(dòng)物本身。在螢光素酶中加入正確的螢光素底物就可以放出熒光,而發(fā)出的光子可以被光敏感元件,如螢光探測(cè)器或改進(jìn)后的光學(xué)顯微鏡探測(cè)到。這就使得對(duì)包括***在內(nèi)的多種生命活動(dòng)進(jìn)程進(jìn)行觀察成為可能。例如,螢光素酶已經(jīng)被用于商業(yè)化的次世代焦磷酸定序技術(shù),借由dNTP接上DNA鏈時(shí)水解放出的焦磷酸,透過(guò)另外一個(gè)硫酸鹽腺甘酸轉(zhuǎn)移酶反應(yīng),螢光素酶能將產(chǎn)物ATP與螢光素轉(zhuǎn)化為冷光,機(jī)器借此探測(cè)光線并定序。螢光素酶也可以被用于檢測(cè)血庫(kù)中所存血液中的紅血球是否開(kāi)始破裂。法醫(yī)可以用含有螢光素酶的溶液來(lái)檢測(cè)犯罪現(xiàn)場(chǎng)中殘留的血跡。醫(yī)院用螢光素酶的發(fā)光來(lái)發(fā)現(xiàn)特定的疾病。螢光素酶還可以作為“報(bào)告蛋白”被用于分子生物學(xué)研究中,例如,用于在轉(zhuǎn)染過(guò)螢光素酶的細(xì)胞中檢測(cè)特定啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄情況或用于探測(cè)細(xì)胞內(nèi)的ATP的水平;這一技術(shù)被稱為報(bào)告基因檢測(cè)法或螢光素酶檢測(cè)法(LuciferaseAssay)。螢光素酶是一個(gè)熱敏感蛋白,因此經(jīng)常被用于研究蛋白熱變性過(guò)程中熱休克蛋白的保護(hù)能力。此外,螢光素酶水母素的發(fā)光強(qiáng)度與環(huán)境中鈣離子濃度相關(guān),因此可用于檢測(cè)生物體內(nèi)的鈣。專業(yè)做D-熒光素鉀鹽活題成像D-熒光素鹽也算是鈉鹽和鉀鹽。

    常見(jiàn)的熒光素酶有兩種,分別是螢火蟲(chóng)熒光素酶(fireflyluciferase,編碼基因是luc)和海腎熒光素酶(Renillaluciferase,編碼基因是Rluc),前者的底物是D-Luciferin,后者的底物是Coelenterazine。它們共同的作用原理是在ATP和熒光素酶的催化作用下,底物被氧化發(fā)光(不同底物光的顏色和波長(zhǎng)不同),當(dāng)?shù)孜镞^(guò)量時(shí),產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性。***成像技術(shù)(opticalinvivoimaging)目前主要采用生物發(fā)光(bioluminescence)與熒光(fluorescence)兩種技術(shù),生物發(fā)光法是基于熒光素酶能催化底物(D-Luciferin或Coelenterazine)化學(xué)發(fā)光的原理,將體外能穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞株植入動(dòng)物體內(nèi),與后期注射入體內(nèi)的底物發(fā)生反應(yīng),利用光學(xué)系統(tǒng)檢測(cè)光強(qiáng)度,間接反映出細(xì)胞數(shù)量的變化或細(xì)胞的定位。這項(xiàng)技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于多個(gè)領(lǐng)域常用的有**或疾病動(dòng)物模型的建立,并可用于病毒學(xué)研究、siRNA研究、干細(xì)胞研究、蛋白質(zhì)相互作用研究等。以下主要介紹D-Luciferin(D熒光素)的分類:D-Luciferin:有三種,分別是D-Luciferin,SodiumSalt/D熒光素鈉鹽、D-Luciferin,PotassiumSalt/D-熒光素鉀鹽和D-LuciferinFirefly,freeacid/D-螢火蟲(chóng)熒光素。

    經(jīng)HE染色后觀察細(xì)胞的病理形態(tài)學(xué)。活題動(dòng)物成像技術(shù)是近期發(fā)展起來(lái)的一種新型穩(wěn)定可靠,是檢測(cè)動(dòng)物體內(nèi)分子及細(xì)胞事件的影像檢測(cè)技術(shù),強(qiáng)有力手段。利用生物發(fā)光成像(BLI)可以對(duì)活題病灶的大小進(jìn)行無(wú)損傷直觀準(zhǔn)確檢測(cè)。我們有自己的獨(dú)自有機(jī)合成實(shí)驗(yàn)室,可以生產(chǎn)合成各種化學(xué)發(fā)光試劑,我們可以提供化學(xué)發(fā)光試劑、化學(xué)發(fā)光底物、發(fā)光標(biāo)記物、發(fā)光增強(qiáng)劑、染料探針類、微生物和酶的顯色底物以及體外診斷試劑。相關(guān)列表魯米諾/3-氨基苯二甲酰肼/發(fā)光氨異魯米諾/4-氨基鄰苯二甲酰肼吖啶酯DMAE-NHS吖啶酰肼NSP-SA-ADH吖啶酯ME-DMAE-NHS哌嗪-N,N'-二(2-乙磺酸)PIPES磷酸烯醇丙的酮酸三(環(huán)已胺)鹽PEP0c835bf4-aae2-43c1-be81-e57液肝素鋰乙二胺四乙酸二鉀/EDTA二鉀血清分離膠/血液分離膠肝素抗凝劑乙二胺四乙酸三鉀/EDTA三鉀血液促凝劑高效促凝粉高效硅化劑水溶性硅化劑草酸鉀鈣離子螫合抗凝劑弱效抗凝劑吖啶酯己二酰阱NSP-DMAE-ADH吖啶酯-T4結(jié)合物吖啶酯-T3結(jié)合物吖啶磺酰胺鹽-N-乙胺基馬來(lái)酰亞胺吖啶磺酰胺鹽-T4結(jié)合物吖啶磺酰胺鹽-T3結(jié)合物生物素-T4結(jié)合物化學(xué)發(fā)光分析試劑及標(biāo)記物生物素-T3結(jié)合物生物素-NHS活性酯吖啶磺酰胺NSP-SA-ADH吖啶酯NSP-DMOAE-NHS吖啶酯NSP-DMOAE-PE。D-熒光素鉀鹽測(cè)試需要哪些必備條件?

    而發(fā)出不同顏色的熒光。螢火蟲(chóng)有2000多種,而叩甲總科(包括螢火蟲(chóng)、叩頭蟲(chóng)和相關(guān)昆蟲(chóng))則有更多,因此它們的熒光素酶對(duì)于分子系統(tǒng)學(xué)研究很有用。目前研究得更透徹的熒光素酶是來(lái)自Photinini族螢火蟲(chóng)中的北美螢火蟲(chóng)(Photinuspyralis)。熒光素酶報(bào)告基因(Luc)是指以熒光素(luciferin)為底物來(lái)檢測(cè)螢火蟲(chóng)熒光素酶(fireflyluciferase)活性的一種報(bào)告系統(tǒng)。熒光素酶可以催化luciferin氧化oxyluciferin,在luciferin氧化的過(guò)程中,會(huì)發(fā)出生物熒光(bioluminescence)。熒光素酶是能夠催化不同底物氧化發(fā)光的一類酶,哺乳細(xì)胞無(wú)內(nèi)源性熒光素酶。更常用的熒光素酶有細(xì)菌熒光素酶、螢火蟲(chóng)熒光素酶和Renilla熒光素酶。細(xì)菌熒光素酶對(duì)熱敏感,因此在哺乳細(xì)胞的應(yīng)用中受到限制。螢火蟲(chóng)熒光素酶靈敏度高,檢測(cè)線性范圍寬達(dá)7~8個(gè)數(shù)量級(jí),是更常用于哺乳細(xì)胞的報(bào)道基因,用熒光比色計(jì)即可檢測(cè)酶活性,因而適用于高通量篩選。隨著具有膜通透性和光裂解作用的螢火蟲(chóng)熒光素酶的應(yīng)用,無(wú)需裂解細(xì)胞即可檢測(cè)酶活性。Renilla熒光素酶催化腸腔(coelenterazine)氧化,產(chǎn)物可透過(guò)生物膜,可能是更適用于活細(xì)胞的報(bào)告分子。將熒光素酶報(bào)告基因載體轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中。D-熒光素鉀鹽運(yùn)輸條件是4℃冰袋運(yùn)輸。宿遷熒光素D-熒光素鉀鹽

D-熒光素鉀鹽的配置是什么?徐州螢火蟲(chóng)熒光素酶D-熒光素鉀鹽濃度

    因此只有在活細(xì)胞內(nèi)才會(huì)產(chǎn)生長(zhǎng)發(fā)生光現(xiàn)象,并且發(fā)光光強(qiáng)度與標(biāo)記細(xì)胞的數(shù)目線性相關(guān)。結(jié)構(gòu)與性能熒光素在氧氣、ATP存在的條件下和熒光素酶發(fā)生反應(yīng),生成氧化熒光素(oxyluciferin),并產(chǎn)生長(zhǎng)發(fā)生光現(xiàn)象。熒光素是腹腔注射或尾部靜脈注射進(jìn)入小鼠體內(nèi)的,約一分鐘就可以擴(kuò)散到小鼠全身。熒光素的半衰期約三個(gè)小時(shí),只有活細(xì)胞才能夠持續(xù)表達(dá)熒光素酶。(1)熒光素不會(huì)影響動(dòng)物的正常生理功能。(2)熒光素是280道爾頓的小分子,水溶性和脂溶性都非常好,很容易穿透細(xì)胞膜和血腦屏障。(3)熒光素在體內(nèi)擴(kuò)散速度快,可通過(guò)腹腔注射或尾部靜脈注射進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)。腹腔注射擴(kuò)散較慢,持續(xù)發(fā)光長(zhǎng)。熒光素腹腔注射老鼠后約1min后表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞開(kāi)始發(fā)光,10min后強(qiáng)度達(dá)到穩(wěn)定的更高點(diǎn),在更高點(diǎn)持續(xù)約20~30min后開(kāi)始衰減,約3h后熒光素排除,發(fā)光全部消失,更佳檢測(cè)時(shí)間是在注射后15~35min之間;若進(jìn)行熒光素靜脈注射,擴(kuò)散快,但發(fā)光持續(xù)時(shí)間很短。科研人員根據(jù)大量的實(shí)驗(yàn)總結(jié)出熒光素的合適的用量是150mg/kg,即體重20克的小鼠需要3毫克的熒光素。(4)觀察時(shí)間的間隔沒(méi)有更短限制,只要觀察的條件控制一致就可以。雖然底物在動(dòng)物體內(nèi)有一定的代謝過(guò)程。徐州螢火蟲(chóng)熒光素酶D-熒光素鉀鹽濃度

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