外泌體是細(xì)胞間進(jìn)行物質(zhì)運(yùn)輸和信息交流的重要工具,可以通過調(diào)節(jié)免疫功能促進(jìn)**的增殖,血管新生和**轉(zhuǎn)移。與病毒***,幫助病毒逃避免疫關(guān)系很大,并與心血管疾病,老年癡呆等疾病具有密切關(guān)系。由于外泌體直徑小,樣本含量低,提取十分困難。已有的外泌體分離方式有密度梯度離心、超濾離心法、免疫磁珠抗體捕獲、商用試劑盒等。但到目前為止,仍沒有一種提取方法能同時(shí)保證外泌體的含量、純度以及生物活性。英瀚斯生物專業(yè)做外泌體相關(guān)實(shí)驗(yàn)。翌科生物專業(yè)做外泌體提取的嗎?高校比較好的外泌體檢測
外泌體參與了機(jī)體不同的生理和病理過程,并對細(xì)胞活動(dòng)發(fā)揮重要的調(diào)控作用,如免疫應(yīng)答、抗原提呈、細(xì)胞遷移、**侵襲等。且外泌體具有細(xì)胞類型特異性,即不同細(xì)胞分泌的外泌體的組成成分和功能不同,這使得外泌體具有成為多種疾病早期診斷標(biāo)志物的潛力。此外,外泌體在作為基因和藥物運(yùn)載、**和**生物學(xué)等方面也已經(jīng)成為研究熱點(diǎn)。外泌體存在于人類或動(dòng)物的各種體液中,如細(xì)胞培養(yǎng)上清、血液、尿液等,我們可以選擇不同的樣本來源進(jìn)行相關(guān)的外泌體研究。不同的實(shí)驗(yàn)樣本采集時(shí)需要注意的地方不一樣,如細(xì)胞培養(yǎng)上清在收集樣本前需換成無外泌體血清或者無血清培養(yǎng)基培養(yǎng),以降低背景值的干擾。江蘇高效液相色譜外泌體研發(fā)南京做外泌體提取找哪個(gè)公司做?
外泌體是指包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-150nm),現(xiàn)今,其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。1983年,外泌體***于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn),1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體,且外泌體天然存在于體液中,包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運(yùn)載物”和相應(yīng)功能的精確分子機(jī)制剛剛開始研究。外泌體被視為特異性分泌的膜泡,參與細(xì)胞間通訊,對外泌體的研究興趣日益增長,無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。
外泌體膜染料:PKH67、PKH26
組成:方法一:外泌體直接染色1.適量(10ug,BCA法測量)外泌體溶于500ulDiluentC中(可以用DPBS代替);2.適量的PKH26(10ug外泌體推薦用量不超過1ul)染料溶于等體積的DiluentC中(可以用DPBS代替),溫和吹打混勻;3.將步驟2中的溶液加入1中并迅速吹打混勻。4.避光,室溫靜置孵育5-10min;5.加入等體積(2ml)的血清(exosomefree),或者1%BSA終止染色反應(yīng);6.使用超濾/超離方式洗凈未與外泌體結(jié)合的PKH26染料。方法二:通過細(xì)胞染色間接對外泌體染色1.2×107細(xì)胞500g,5min離心,盡量棄去上清。2.加入1mlDiluentC,溫和吹打混勻。3.將4ulPKH26儲存液加入1mlDiluentC中(可以用DPBS代替),溫和吹打混勻;4.將步驟2中制備的細(xì)胞懸液加入步驟3中的制備的PKH26工作液,快速吹打混勻后室溫靜置孵育5min;5.加入等體積(2ml)的血清(exosomefree),或者1%BSA終止染色反應(yīng);6.使用超濾/超離方式洗凈未與外泌體結(jié)合的PKH26染料。注意:染色后的外泌體請立即使用或儲存于-80℃ 翌科生物是做外泌體提取嗎?
外泌體是細(xì)胞的外膜囊泡,是細(xì)胞外納米級膜囊泡的一個(gè)子集,直徑為30-150nm。根據(jù)其釋放機(jī)制和大小,EVs分為以下三種類型:外泌體(直徑小于150nm)、MVs/脫落顆粒(100~1000nm)和凋亡小體(500~4000nm)。人體中幾乎所有類型的細(xì)胞均能產(chǎn)生外泌體,包括免疫細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞和干細(xì)胞等。外泌體成分取決于來源、宿主健康和細(xì)胞外刺激。外泌體成分可以從原細(xì)胞轉(zhuǎn)移到靶細(xì)胞。外泌體中包含多種細(xì)胞成分,包括mRNA、miRNAs、HSP90和HSP70等等。趕緊告訴你如何選擇一家好的做外泌體的公司 !?。?!南京專業(yè)做外泌體分析試劑
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外泌體提取試劑盒 (細(xì)胞培液)本說明書適用于翌科生物公司外泌體提取試劑盒系列產(chǎn)品(針對細(xì)胞培液)。
樣品準(zhǔn)備1.新鮮的細(xì)胞培液樣品,置于冰上待用;若為凍存的樣品,可于室溫解凍后置于冰上待用。2.將細(xì)胞培液樣品渦旋混勻,根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求取適量體積轉(zhuǎn)移至離心管中,4℃,1000×g離心10min,棄沉淀,并將上清轉(zhuǎn)移至新的離心管中。
外泌體分離1.轉(zhuǎn)移樣本至新管,加入與細(xì)胞培夜等體積的ExosomeIsolationReagent;2.渦旋混勻,此步后溶液將變混濁。3.放入4℃冰箱靜置過夜;4.4℃,3220g離心60min,棄上清,外泌體沉淀存留在離心管底部;5.用適量PBS重懸外泌體沉淀,存放于4℃(不超過1周)或-20℃/-80℃(長時(shí)間保存)。
注意事項(xiàng)1、使用前需將ExosomeIsolationKit充分混勻。2、細(xì)胞培液樣品建議用0.22μm濾器過濾后再進(jìn)行外泌體提取操作。3、操作過程需佩戴一次性手套操作,盡量在超凈臺內(nèi)或潔凈的環(huán)境進(jìn)行。 高校比較好的外泌體檢測
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