外泌體是由各種細(xì)胞分泌的小型膜囊泡（直徑30~100nm），存在于大多數(shù)體液（如血液、尿液、髓液等）和細(xì)胞培養(yǎng)液中。外泌體是由脂質(zhì)雙層膜包被的膜囊泡，產(chǎn)生于稱為多囊泡體的細(xì)胞外囊泡中，多囊泡體通過與細(xì)胞膜融合將外泌體釋放到細(xì)胞外。外泌體含核內(nèi)體來源的蛋白質(zhì)（如ESCRTs）、細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸相關(guān)蛋白（如RabGTPase等）及細(xì)胞膜來源蛋白（如CD63, CD81等）等各種內(nèi)分泌細(xì)胞來源的蛋白和RNA，同時還含有分泌細(xì)胞膜來源和內(nèi)體膜來源的脂質(zhì)（如膽固醇和鞘磷脂等）。外泌體是其中一類小囊泡，直徑為30~150nm，密度1.10~1.18g/ml。杭州外泌體WB
在20世紀(jì)80年代，外泌體被描述為從網(wǎng)織紅細(xì)胞分泌的內(nèi)體來源的囊泡。人們對這些細(xì)胞外囊泡的興趣逐漸增加，因為它們似乎參與了很多細(xì)胞過程。外泌體攜帶蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和RNAs，介導(dǎo)體內(nèi)不同細(xì)胞類型之間的細(xì)胞間通訊，從而影響正常和病理狀態(tài)。只有近，科學(xué)家才認(rèn)識到將外泌體與其他類型的細(xì)胞外囊泡分開的困難，這排除了特定功能對不同類型分泌的囊泡的明確歸因。為了闡明這個復(fù)雜但正在發(fā)展的科學(xué)領(lǐng)域，該綜述著重于外泌體和其他分泌的細(xì)胞外囊泡的定義。討論了它們的生物發(fā)生，分泌及其后續(xù)的命運(yùn)，因為它們的功能依賴于這些重要過程。唾液外泌體PKH261983年，外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)。
腦組織分離方法簡述：將腦組織剪成薄片，放入離心管中加上消化液進(jìn)行消化，經(jīng)水浴、反復(fù)輕輕上下顛倒，再用移液間斷緩慢吹吸至消化結(jié)束。隨后加入培養(yǎng)基于消化液中，混勻，置于冰上。再進(jìn)行一系列的差速超速離心過程，包括除雜、濾膜過濾、超離等。后用PBS重懸外泌體，用重懸后的外泌體進(jìn)行下面的透射電鏡（TEM）、納米粒徑追隨分子（NTA）和marker WB鑒定。所有的細(xì)胞都能分泌外泌體，但是不同細(xì)胞分泌的外泌體不管在數(shù)量上還是在內(nèi)含物中都具有很大的差異性，這也決定了每種外泌體所行使的功能不一樣。
樣本預(yù)處理與外泌體分離、保存：外泌體存在于人類或動物的各種體液中，我們可以選擇不同的樣本來源進(jìn)行相關(guān)的外泌體研究。由于外泌體是來源于細(xì)胞質(zhì)膜內(nèi)陷的含有脂質(zhì)雙分子層膜結(jié)構(gòu)的多泡小體，分布于胞外基質(zhì)。為了獲得高純度的外泌體，必須確保有效去除所有的細(xì)胞碎片及其他不需要的雜質(zhì)。不同的實驗樣本采集時需要注意的地方不一樣，如細(xì)胞培養(yǎng)上清在收集樣本前需換成無外泌體血清培養(yǎng)、血漿樣本采集時用一定不能用肝素抗凝管、尿液收集時需要加抑菌劑等。外泌體是內(nèi)源性和質(zhì)膜起源的不同類型的膜囊泡。
當(dāng)外泌體在1980年初次被發(fā)現(xiàn)后，其被認(rèn)為是細(xì)胞排泄廢物的一種方式，如今隨著大量對其生物來源、其物質(zhì)構(gòu)成及運(yùn)輸、細(xì)胞間信號的傳導(dǎo)以及在體液中的分布的研究發(fā)現(xiàn)外泌體具有多種多樣的功能。外泌體的功能取決于其所來源的細(xì)胞類型，其可參與到機(jī)體免疫應(yīng)答、抗原提呈、細(xì)胞遷移、細(xì)胞分化、種瘤侵襲等方方面面。有研究表明種瘤來源的外泌體參與到種瘤細(xì)胞與基底細(xì)胞的遺傳信息的交換，從而導(dǎo)致大量新生血管的生成，促進(jìn)了種瘤的生長與侵襲。外泌體功能在研究初期階段發(fā)現(xiàn)是參與細(xì)胞成熟過程中去除不必要的蛋白質(zhì)。江蘇海洋生物外泌體
度梯度離心法，用此種方法分離到的外泌體純度高。杭州外泌體WB
膜封閉的囊泡釋放到周圍環(huán)境中已經(jīng)成為近幾年來越來越受關(guān)注的問題。令人信服的證據(jù)表明囊泡可交換復(fù)雜的信息有助于這種興趣的興起。但是，也已經(jīng)清楚，不同類型的分泌囊泡共存，具有不同的細(xì)胞內(nèi)起源和形成模式，因此可能具有不同的組成和功能。外泌體是分泌囊泡的一種亞型。它們在真核細(xì)胞內(nèi)的多泡小體中形成，并且當(dāng)這些多泡小體與質(zhì)膜融合時分泌到細(xì)胞外。有趣的是，不同的分子家族已被證明參與細(xì)胞內(nèi)形成外泌體及其隨后的分泌，這表明即使在外泌體中也存在不同的亞型。杭州外泌體WB