外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡,參與細胞間通訊,對外泌體的研究興趣日益增長,無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。外泌體富含膽固醇和鞘磷脂。2007年, Valadi等發(fā)現(xiàn)鼠的肥大細胞分泌 的 exosome可以被人的肥大細胞捕獲,并且其攜帶的mRNA成分可以進入細胞漿中可以被翻譯成蛋白質(zhì),不只是是mRNA,exosomes所轉(zhuǎn)移的microRNA同樣具有生物活性,在進入靶細胞后可以靶向調(diào)節(jié)細胞中mRNA的水平。這一發(fā)現(xiàn)使得研究人員對exosome的研究熱情激增,截止目前已經(jīng)通過286項研究發(fā)現(xiàn)了41860種蛋白質(zhì)、2838種microRNA、3408種mRNA。超速離心法,這是目前外泌體提取較常用的方法。腦脊液外泌體
外泌體作為藥物遞送載體較以往的合成系統(tǒng)具有多方面的優(yōu)勢,比如:人工遞送載體具有更低的免疫原性,其含有的磷脂雙分子層可與靶細胞細胞膜融合,從而避廉價核巨噬細胞系統(tǒng)的吞噬作用。Srivastava等開發(fā)了一種基于外泌體-金奈米粒子(Exo-GNP)的藥物遞送系統(tǒng)—“nanosomes”用于肺病的醫(yī)治,研究表明該系統(tǒng)與單用多柔比星醫(yī)治相比,前者的多柔比星釋放量增加、攝取率提高、化療毒性降低且化療效果增強。此外,還有研究發(fā)現(xiàn),使用外泌體運載紫杉醇(PTX)可顯著提高病細胞對PTX的吸收,將PTX加載至外泌體中顯著增加了藥物細胞毒性,Exo-PTX能顯著壓制肺病的發(fā)展。湖南植物外泌體small RNA測序癥狀細胞來源的外泌體含有與癥狀進展相關(guān)的分子。
為了解決外泌體實驗遇到的上述的各種問題, Wako 研發(fā)出MagCapture?外泌體提取試劑盒PS(MagCapture? Exosome Isolation Kit PS)提取高純度細胞外囊泡。外泌體膜含有分泌細胞源的蛋白和脂質(zhì),眾所周知磷脂酰絲氨酸(PS)在活細胞通過翻轉(zhuǎn)酶作用導向細胞膜內(nèi)側(cè),暴露在外泌體膜外側(cè)3)。另外,T-cell immunoglobulin domain and mucin domain-containing protein 4(Tim4 通過巨噬細胞進行細胞凋亡的吞噬受體)蛋白通過細胞外域IgV域與含有鈣離子的PS結(jié)合4)?;谏鲜鲋R,我們利用Tim4固化磁珠,在鈣離子存在下捕捉培養(yǎng)上清和血清等樣品中的外泌體,再添加螯合劑洗脫外泌體,這種外泌體純化方法是和金澤大學醫(yī)學系免疫學華山教授共同開發(fā),并取得了成功。5)這是迄今為止取代黃金標準超速離心法的新型外泌體純化方法。
目前外科手術(shù)仍是肺病醫(yī)治的有效方法,但術(shù)后復(fù)發(fā)率很高,而傳統(tǒng)放化療對肺病的醫(yī)治效果又極其有限。因此,肺病醫(yī)治的新模式受到廣大研究者的關(guān)注,已有大量研究證明外泌體在肺病醫(yī)治中有廣闊的應(yīng)用前景。外泌體作為細胞間通訊的一種形式,在肺病的進程中具有重要作用,因此,控制外泌體的分泌可能成為醫(yī)治肺病的潛在靶點。據(jù)相關(guān)報道稱,EPI64可以通過開啟特異的和Rab27A來控制A549肺病細胞的外泌體分泌,提示EPI64可以作為醫(yī)治的潛在靶點。此外,CD9、CD63、HSP90和HSP70在外泌體中富集,從而上調(diào)主要組織相容性復(fù)合物Ⅱ類分子表達水平,顯著促進CD4+T細胞的增殖,通過免疫途徑壓制種瘤??贵w親和法和密度梯度離心法,雖然可以提取到高純度的外泌體,但不能提取完整外泌體。
近年來,高通量質(zhì)譜分析被普遍地應(yīng)用于篩選NSCLC外泌體蛋白的研究,這為我們揭示了更多具有生物標志物價值的分子。Birgitte等采用微陣列芯片技術(shù)研究了431例肺病患者和150例對照者血漿外泌體中的蛋白表達情況,發(fā)現(xiàn)CD151、CD171和TSPAN8這三種蛋白表達不只能區(qū)分種瘤與正常組織,同時也能區(qū)分各種肺病的組織亞型。此外,聯(lián)合應(yīng)用這三種蛋白診斷NSCLC的AUC達到0.74。Clark等采用納升液聯(lián)用技術(shù)(nano-ESI-LC-MS/MS)分析了來自正常支氣管上皮細胞系和兩個攜帶NSCLC細胞系的外泌體的蛋白表達譜,從中篩選出如細胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導因子、溶酶體膜糖蛋白2等多種存在顯著性差異表達的蛋白,同時檢測分析這些蛋白有助于提高NSCLC診斷的敏感性和特異性。外泌體分離之后,需要經(jīng)過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體。遼寧腹膜透析液外泌體
有望在外泌體和微囊泡生理功能的分析研究上起重大貢獻。腦脊液外泌體
所有培養(yǎng)的細胞類型均可分泌外泌體,且外泌體天然存在于體液中,包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。 有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運載物”和相應(yīng)功能的精確分子機制剛剛開始研究。一類外泌體中常見的細胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白,是鳥苷酸三磷酸酶(GTPases,)家族的一種。它可以調(diào)節(jié)外泌體膜與受體細胞的融合,有文獻報道稱RAB4, RAB5和 RAB11主要出現(xiàn)在早期以及回收的核內(nèi)體中,RAB7 和 RAB9主要出現(xiàn)在晚期的核內(nèi)體?,F(xiàn)有大量的研究發(fā)現(xiàn)外泌體中含有40種RAB蛋白。腦脊液外泌體