外泌體(Exosome)是由細(xì)胞分泌而來(lái)的微小囊泡,直徑約為30-200 nm,形態(tài)也呈現(xiàn)出多樣性。長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long non-coding RNA)是一類轉(zhuǎn)錄本長(zhǎng)度超過(guò)200nt、不編碼蛋白的RNA。 近年來(lái)的研究表明lncRNA能在標(biāo)貫遺傳、轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后水平上調(diào)控基因表達(dá),參與了X染色體沉默、基因組印記以及染色質(zhì)修飾、轉(zhuǎn)錄jihuo、轉(zhuǎn)錄干擾、核內(nèi)運(yùn)輸?shù)榷喾N重要的調(diào)控過(guò)程,與人類疾病的發(fā)生、發(fā)展和防治都有著密切聯(lián)系。 lncRNA芯片對(duì)lncRNA進(jìn)行功能研究也被更多的關(guān)注,通過(guò)設(shè)計(jì)不同的lncRNA探針,可以更加快速、高通量地篩選出疾病或特定生物學(xué)過(guò)程中差異表達(dá)的lncRNA和mRNA信息,找到lncRNA的靶基因位點(diǎn)深入分析調(diào)控機(jī)制。模仿外泌體組成及結(jié)構(gòu)(尤其是其表面組成的模仿)是進(jìn)行新型脂質(zhì)體和聚合物基藥物載體構(gòu)建的一個(gè)方向。福建細(xì)胞外泌體染色PKH67/PKH26
外泌體作為細(xì)胞外囊泡的一個(gè)亞群, 直徑集中于30~150 nm。目前, 基于粒徑大小分離外泌體的方法有超濾法、尺寸排除色譜法、靜水過(guò)濾透析法和非對(duì)稱場(chǎng)流分離法等。超濾法利用不同孔徑的濾膜, 對(duì)樣品進(jìn)行選擇性分離以獲得外泌體, 一般分為壓力超濾和離心超濾。其中離心超濾效果更好, 不jin能減輕力對(duì)外泌體的破壞, 而且可通過(guò)增大離心力和延長(zhǎng)離心時(shí)間提高外泌體產(chǎn)物濃度。但離心力過(guò)大或離心時(shí)間過(guò)長(zhǎng)均有可能導(dǎo)致超濾膜或外泌體破裂。此外, 超濾法可以和切向流過(guò)濾法、微控流法、超速離心法或凝膠過(guò)濾色譜法等方法結(jié)合進(jìn)一步提高分離效率。遼寧體液外泌體外泌體的異質(zhì)性決定了外泌體藥物遞送系統(tǒng)要根據(jù)所傳遞治理物質(zhì)的類型、目標(biāo)組織的特點(diǎn)等進(jìn)行針對(duì)性的調(diào)整。
獲得囊泡粒徑分布的兩種方法動(dòng)態(tài)光散射(DLS)和納米顆粒跟蹤分析(NTA)都被廣fan應(yīng)用于外泌體顆粒數(shù)目和粒徑分布的測(cè)量,但兩種方法也各有不足。動(dòng)態(tài)光散射法中散射光強(qiáng)度依賴于顆粒質(zhì)量(體積),混合體系中大囊泡的存在(即使只有很少的量)將嚴(yán)重影響測(cè)量結(jié)果,因此動(dòng)態(tài)光散射法更適用于單分散體系。而且動(dòng)態(tài)光散射法所得的結(jié)果強(qiáng)烈依賴于所應(yīng)用的數(shù)學(xué)算法。而采用納米顆粒跟蹤分析儀對(duì)不同粒徑范圍的囊泡進(jìn)行檢測(cè)時(shí),為了得到準(zhǔn)確的濃度和粒徑信息,需要根據(jù)所要測(cè)量的顆粒粒徑范圍對(duì)儀器分別校準(zhǔn),操作繁瑣。受檢測(cè)靈敏度所限,納米顆粒跟蹤分析儀適用于粒徑范圍50nm~1μm的顆粒,粒徑小于50nm的外泌體無(wú)法檢測(cè)。除此之外,兩種方法都依賴光散射和粒子的布朗運(yùn)動(dòng)進(jìn)行分析,難以區(qū)分合成的納米材料、大蛋白質(zhì)聚合體和生物囊泡。
目前為止已鑒別了2500余種miRNAs分子。例如,血液外泌體miR-21的升高已被證實(shí)與胰腺ai、結(jié)直腸ai、肝ai、乳腺ai、卵巢ai及食管ai等多種中流相關(guān),可能與其參與中流xue管生成有關(guān),研究表明肺ai細(xì)胞釋放的外泌體miR-21會(huì)通過(guò)STAT3依賴機(jī)制誘導(dǎo)周?chē)夤芗?xì)胞血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)的產(chǎn)生,從而促進(jìn)血管生成。在食管ai中,miR-21還可以反映中流的惡性程度,食管ai患者的miR-21水平與良性中流患者相比急劇上升,上升的miR-21水平也與中流的淋巴侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)。在膀胱ai患者中,尿液中的miR-21和miR-4454會(huì)明顯上調(diào)。多種細(xì)胞分泌外泌體,如MSCs、上皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、肥大細(xì)胞、神經(jīng)元細(xì)胞、中流細(xì)胞等。
外泌體中包含的mRNAs和miRNAs在進(jìn)入受體細(xì)胞后仍具有翻譯蛋白質(zhì)、促進(jìn)病毒感ran等功能。據(jù)估計(jì),單個(gè)外泌體含有約≤100拷貝數(shù)的蛋白質(zhì)和≤10000拷貝數(shù)的核苷酸。不同細(xì)胞來(lái)源的外泌體中既包含與細(xì)胞形成、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)的共有成分,也包含與來(lái)源細(xì)胞的生物功能相關(guān)的特異分子。如B淋巴細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、肥大細(xì)胞和腸上皮細(xì)胞來(lái)源的外泌體含有大量的主要組織相容性復(fù)合體蛋白質(zhì)MHCclassⅡ和MHCclassⅠ,血小板和T細(xì)胞來(lái)源的外泌體則包含諸如血管性血友病因子、穿孔素和顆粒酶等特殊蛋白質(zhì),而ai細(xì)胞來(lái)源的外泌體表面可能含有中流特異的蛋白質(zhì)分子。這類特異分子在外泌體介導(dǎo)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、參與生理病理過(guò)程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。外泌體在組織修復(fù)領(lǐng)域均起著重要的作用,并且可以作為很好靶向給藥系統(tǒng)。遼寧細(xì)胞上清外泌體染色
支氣管肺泡灌洗液中外泌體冷凍保存與新鮮樣本相比, 體積變大且有一半以上種類蛋白質(zhì)的豐度發(fā)生變化。福建細(xì)胞外泌體染色PKH67/PKH26
外泌體可以由體內(nèi)或體外培養(yǎng)的幾乎所有類型的細(xì)胞分泌, 并廣fan存在于血漿、膽汁、尿液、母乳、唾液、胸腔積液、淋巴、胃酸、支氣管肺泡灌洗液、腦脊液、眼淚、滑膜液、羊水、腹水、鼻分泌物和子宮抽吸物液體等體液中。目前, 基于不同的分離原理, 研究者建立了五種主要的提取純化技術(shù), 分別為基于質(zhì)量密度的超速離心技術(shù)、基于粒徑大小的分離技術(shù)、基于溶解性質(zhì)的聚合物沉淀技術(shù)、基于免疫親和原理的分離技術(shù)和基于流體性質(zhì)的微流控技術(shù)。福建細(xì)胞外泌體染色PKH67/PKH26
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