外泌體(exosomes)是一類由細胞分泌到胞外的囊泡。與其他兩種胞外囊泡(微囊泡和凋亡小體)相比，外泌體在產(chǎn)生方式、尺寸、密度和內(nèi)容物等方面存在明顯差異。不同于微囊泡“出芽”的形成方式，外泌體主要通過胞吐過程釋放至細胞外:首先細胞膜向內(nèi)凹陷形成早期核內(nèi)體(earlyendosomes)，早期核內(nèi)體進一步內(nèi)陷形成多泡體(multivesicularbodies，MVBs)，其中一部分多泡體與溶酶體(lysosome)融合，進而降解;另一部分與細胞膜融合，將其內(nèi)部所包含的囊泡釋放至胞外，即為外泌體。外泌體具有獨特的物理化學(xué)性質(zhì)，其直徑為30～200nm，密度為1.13～1.19g/mL，組成包括細胞來源相關(guān)的脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、RNA、DNA等物質(zhì)，在其表面連接有大量的糖鏈，如甘露糖、聚乳糖胺和α2，6-唾液酸等。人體內(nèi)多種細胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體，包括干細胞、免疫細胞、內(nèi)皮細胞、及平滑肌細胞等。湖南胸水外泌體WB
研究采用蔗糖密度梯度離心聯(lián)合2次PEG6000沉淀，極大地降低了外泌體的提取成本，且獲得的外泌體不僅表達外泌體公認(rèn)的標(biāo)志蛋白分子，同時也表達胎盤特異性蛋白分子，證明通過這種方法獲得的外泌體是胎盤來源外泌體。通過蔗糖密度梯度離心后得到的外泌體沉淀經(jīng)蛋白質(zhì)SDS-PAGE膠電泳，銀染后可見各蛋白分子條帶清晰可見，動態(tài)光散射分析粒徑，結(jié)果顯示獲得的外泌體顆粒粒徑大部分分布于28-91nm之間，與文獻報道外泌體顆粒大小相一致。胎盤外泌體經(jīng)過PKH67熒光染料染色后，與細胞共孵育，熒光顯微鏡下觀察外泌體具備進入細胞的活性，進一步驗證了我們應(yīng)用此種改良的分離方法可有效的獲得胎盤來源的外泌體。本研究通過蔗糖密度梯度離心聯(lián)合2次PEG6000沉淀成功分離得到母體血清中胎盤來源外泌體，并從蛋白標(biāo)志分子、電鏡、粒徑及分布、進入細胞活性四方面對其進行了鑒定，為研究妊娠期間胎盤外泌體在正常妊娠及胎盤源性并發(fā)癥中的作用奠定了基礎(chǔ)。遼寧外泌體示蹤精漿外泌體與精子成熟有關(guān)，其對人類免疫缺陷病毒-1（HIV-1）感ran有抑制作用。
與PC-3細胞相比，PC-3細胞外泌體中含有較高豐度的鞘糖脂、鞘磷脂、膽固醇和磷脂酰絲氨酸。外泌體常見的表面蛋白質(zhì)包括四跨膜蛋白(如CD63、CD9、CD81)、黏附蛋白(如L1CAM、LAMP2)、整合素和糖蛋白(如纖連蛋白)等，而外泌體囊泡內(nèi)蛋白質(zhì)則與來源細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)密切相關(guān)，包含例如熱休克蛋白(HSP70、HSP90)和細胞骨架蛋白(actin、tubulin、cofilin)等。除此之外，外泌體中還攜帶有來源細胞的miRNAs、mRNAs、non-codingRNAs、circularRNAs和DNA等遺傳物質(zhì)。外泌體的完整囊泡結(jié)構(gòu)能夠保護其內(nèi)部生物分子不受體液中各種酶的影響從而保持其完整性和生物活性。
幾乎所有的細胞都可以在自發(fā)或在一定刺激條件下產(chǎn)生外泌體，不同的細胞產(chǎn)生的外泌體具有不同的功能，這些外泌體參與了一系列生理和病理過程，如ai癥發(fā)生與發(fā)展、抗原呈遞、免疫調(diào)節(jié)、組織愈合等。來自血細胞(包括血小板、白細胞和紅細胞)的外泌體具有參與凝血、提供促血管生成因子、誘導(dǎo)血管生成等生理功能;妊娠期外泌體能夠影響局部血管生成、調(diào)節(jié)分化、激huo免疫、促進胚胎發(fā)育;肝臟細胞產(chǎn)生的外泌體有利于維護肝臟內(nèi)穩(wěn)態(tài)。由此可見，正常細胞產(chǎn)生的外泌體對維持機體的正常生命活動起重要作用。可采取通過透射電鏡確定外泌體大小。
外泌體介導(dǎo)中流耐藥性:中流細胞來源的外泌體中某些miRNAs和non-codingRNAs(lncRNA)的變化在中流化療抗藥性的發(fā)生中起重要作用。Qu等研究發(fā)現(xiàn)lncRNA可以通過競爭性結(jié)合miR-34/miR-449，促進晚期腎細胞ai細胞中的跨膜受體酪氨酸激酶anexelekto(AXL)和tyrosine[1]proteinkinaseMet(c-MET)表達，引發(fā)舒尼替尼耐藥。而外泌體能夠?qū)⑦@一lncRNA運輸至舒尼替尼敏感的ai細胞，從而傳播舒尼替尼的抗性。外泌體中的miR21能夠抑制卵巢ai細胞凋亡，并通過結(jié)合肌動蛋白絲相關(guān)蛋白凋亡酶激huo因子(apoptoticproteaseactivatingfactor1，APAF1)使得卵巢ai細胞產(chǎn)生對紫杉醇的抗藥性。示蹤病毒使用CD63作為生物標(biāo)記，通過將CD63與熒光蛋白偶聯(lián)，帶熒光的膜蛋白會在表達至外泌體膜上。浙江植物外泌體粒徑檢測
臨床前研究的證據(jù)表明干細胞釋放的外泌體可作為心肌修復(fù)的潛在無細胞治理劑。湖南胸水外泌體WB
姜黃素的臨床應(yīng)用也存在著問題，比如其水溶性差，在體內(nèi)代謝快速以及易被快速清chu。利用鼠淋巴瘤細胞系(EL-4)的外泌體作為姜黃素的載體，可以提高姜黃素的溶解性、穩(wěn)定性以及生物利用度，將姜黃素和載有姜黃素的外泌體腹膜內(nèi)注射到脂多糖(LPS)誘發(fā)的敗血性休克的小鼠模型中，結(jié)果顯示經(jīng)外泌體運載的姜黃素可促進小鼠肺部抑制免疫反應(yīng)的CD11b+Gr-1+細胞的凋亡而表現(xiàn)出抗yan癥的效果，而單純姜黃素的注射不能起到促進CD11b+Gr-1+細胞的凋亡效果(與注射PBS的對照組類似)。研究者還進行了目前常用的脂質(zhì)體負載姜黃素，與外泌體負載姜黃素對比。脂質(zhì)體和外泌體均具備作為姜黃素的載體的能力，但外泌體由于其更易被Gr-1+細胞吞噬，從而可以起到更好的zhiliao效果。湖南胸水外泌體WB
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