動脈粥樣yin化是心血管系統(tǒng)中的常見病、多發(fā)病，以血管內(nèi)膜形成粥樣斑塊或纖維斑塊為特征，是冠xin病、腦梗死、心肌梗死等的主要病因。在血管平滑肌細(xì)胞中，PINK/Parkin表達(dá)增加，由此介導(dǎo)的線粒體自噬水平增強(qiáng)，從而減緩動脈粥樣yin化的進(jìn)展，是動脈粥樣yin化發(fā)病的保護(hù)因素。有研究證明，在動脈粥樣yin化模型的血管平滑肌細(xì)胞中線粒體自噬水平降低，對功能障礙的線粒體清chu減少，導(dǎo)致細(xì)胞供能減少，細(xì)胞凋亡增加，提示可以通過抑制PTEN-PINK1/Parkin介導(dǎo)的線粒體自噬促進(jìn)細(xì)胞凋亡。線粒體自噬在維持心肌細(xì)胞和大血管細(xì)胞的存活和正常功能方面起著不可替代的作用。浙江細(xì)胞自噬電鏡檢測
到目前為止伴隨使用自噬晚期抑制劑，通過檢測LC3B-I/II 轉(zhuǎn)化是自噬流檢測的金指標(biāo)。當(dāng)使用自噬晚期抑制劑巴弗洛霉素 A1 (bafilomycin A1, Baf A1)刺激細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞內(nèi)自噬溶酶體降解被抑制，此時(shí)觀察到的 LC3B-II 的變化jindaibiao自噬小體數(shù)量的改變。當(dāng)細(xì)胞自噬流活化后，LC3B-II 的含量會在使用 Baf A1的基礎(chǔ)上進(jìn)一步增加，而當(dāng)細(xì)胞自噬流阻斷后, LC3B-II 的含量則不會在使用 Baf A1 的基礎(chǔ)上發(fā)生改變。除 Baf A1 外，其他一些能提高溶酶體 pH 值的自噬晚期抑制劑也可以用于自噬流的檢測。若待檢測藥物+Baf A1 組 LC3B-II 與jin Baf A1 處理組相比明顯增加則daibiao所檢測藥物可以增加自噬小體或自噬溶酶體的合成。相反，若處理組與對照組相比，LC3B-II 降低則daibiao處理藥物減少自噬小體的合成。浙江細(xì)胞自噬電鏡檢測自噬體是自噬的標(biāo)志性結(jié)構(gòu)。
自噬可以抑制慢性肝炎或肝硬化向肝病轉(zhuǎn)變，而自噬缺乏則可能會導(dǎo)致肝病發(fā)生。小鼠饑餓實(shí)驗(yàn)中，24h內(nèi)小鼠肝臟35%的蛋白質(zhì)經(jīng)自噬途徑降解。Takamura等研究中，ATG5或ATG7基因缺失的6~9月齡小鼠模型發(fā)生肝腫大或肝瘤，并且肝病細(xì)胞中有大量泛素化蛋白堆積，而正常肝細(xì)胞則沒有；肝病的發(fā)生可能起源于自噬缺失的肝細(xì)胞，具體機(jī)制可能與線粒體腫脹、p62堆積、氧化應(yīng)激、DNA損傷反應(yīng)等有關(guān)。此外，在ATG7缺乏的小鼠模型中特異性下調(diào)p62表達(dá)后，表明p62堆積對肝病發(fā)生可能起促進(jìn)作用。Bao等研究發(fā)現(xiàn)，在石蠟包埋的肝病組織切片中發(fā)現(xiàn)肝病細(xì)胞中有p62蛋白堆積，但周圍未發(fā)生病變的正常肝細(xì)胞中則未發(fā)現(xiàn)p62的異常堆積。
GFP-LC3B 融合蛋白不僅能夠利用其熒光標(biāo)簽進(jìn)行檢測，還可利用溶酶體對標(biāo)簽蛋白的切割通過 Western blot進(jìn)行檢測。GFP-LC3B 蛋白進(jìn)入到自噬溶酶體內(nèi)后 LC3B 部分對溶酶體中的蛋白水解酶較為敏感，較容易被降解。而融合蛋白中的 GFP 部分則對于溶酶體中的蛋白水解酶敏感性較低，不容易被降解。使用GFP 抗體進(jìn)行 Western blot 檢測可能會檢測到 GFP-LC3B-I、GFP-LC3B-II 和游離 GFP 標(biāo)簽三個(gè)條帶，若出現(xiàn)游離 GFP 標(biāo)簽條帶則daibiao細(xì)胞自噬流活化。此外, 在檢測同一細(xì)胞樣品時(shí)還可以使用 LC3B 抗體檢測內(nèi)源性 LC3B-I 向 LC3B-II 轉(zhuǎn)化。心肌細(xì)胞在再灌注期的細(xì)胞自噬增強(qiáng)，此時(shí)由于細(xì)胞自噬引發(fā)的過量死亡，會導(dǎo)致細(xì)胞損傷加重。
細(xì)胞自噬（autophagy）一詞來自希臘單詞auto-，意思是“自己的”，以及phagein，意思是“吃”。所以，細(xì)胞自噬的意思就是“吃掉自己”。細(xì)胞自噬是真核生物中進(jìn)化保守的對細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)進(jìn)行周轉(zhuǎn)的重要過程。該過程中一些損壞的蛋白或細(xì)胞器被雙層膜結(jié)構(gòu)的自噬小泡包裹后，送入溶酶體(動物）或液泡（酵母和植物）中進(jìn)行降解并得以循環(huán)利用。雖然人們早就知道自噬存在，但是只有在大隅良典的精巧實(shí)驗(yàn)之后，人們才意識到它的機(jī)制、懂得了它的重要性。而在自噬的情況下，熒光顯微鏡下GFP-LC3B則聚集在自噬體膜上，以斑點(diǎn)的形式表現(xiàn)出來(LC3B dots or punctae)。浙江細(xì)胞自噬電鏡檢測
對于缺血初期的心肌細(xì)胞來說，細(xì)胞自噬增強(qiáng)，此時(shí)的細(xì)胞自噬主要起保護(hù)作用，防止心肌細(xì)胞過度死亡。浙江細(xì)胞自噬電鏡檢測
在骨生長和骨重建過程中，溶酶體對骨質(zhì)的更新起著重要重要的作用。破骨細(xì)胞的溶酶體酶能釋放到細(xì)胞外，分解和消除陳舊的骨基質(zhì)，這是骨質(zhì)更新的一個(gè)重要步驟。溶酶體酶釋放的具體過程可能是：細(xì)胞內(nèi)的環(huán)化酶活性發(fā)生改變后，隨著cAMP的增加，蛋白質(zhì)激酶被活化而引起微管及其周圍的蛋白質(zhì)的磷酸化，其結(jié)果微管發(fā)生聚集，致使溶酶體向細(xì)胞膜方向移動，并與細(xì)胞膜相互融合，然后溶酶體內(nèi)的水解酶被排出細(xì)胞外，以分解和消除陳舊的骨質(zhì)。浙江細(xì)胞自噬電鏡檢測
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