轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,項(xiàng)目介紹:RNA-Seq,是基于新一代測(cè)序技術(shù)的轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究方法:首先提取生物樣品的全部轉(zhuǎn)錄的 RNA 并進(jìn)行 mRNA 富集,然后反轉(zhuǎn)錄為 cDNA 后進(jìn)行新一代高通量測(cè)序,在此基礎(chǔ)上進(jìn)行短片段拼接組裝,從而獲得一個(gè)個(gè)單獨(dú)轉(zhuǎn)錄本,進(jìn)而可以對(duì)該生物樣品當(dāng)前狀態(tài)的基因表達(dá)狀況有全局了解。對(duì)不同階段或部位生物樣品的轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行 比較分析,則可以在轉(zhuǎn)錄層面得到基因表達(dá)水平的變化,針對(duì)關(guān)鍵基因則可以進(jìn)行代謝通路(Pathway)的構(gòu)建。Illumina HiSeq2500/4000 可以運(yùn)行PE150/PE250模式。上海ITS高通量測(cè)序公司
生工高通量測(cè)序樣品要求,環(huán)境樣品:如果是新鮮土壤/污泥樣品,可以以冰袋運(yùn)輸,不超過(guò)3天;如果是凍存過(guò)的樣品(-20°C或者-80°C冰箱保存),為避免反復(fù)凍融,建議用足量的干冰(根據(jù)經(jīng)驗(yàn),在秋冬季節(jié),如果打包合適,3公斤塊狀干冰可以維持30-40小時(shí))寄送;如果是水體樣品,建議采用濾膜過(guò)濾后,將濾膜寄送來(lái)生工。生工不負(fù)責(zé)過(guò)濾。要求濾膜3張,冰袋運(yùn)輸,不超過(guò)3天。其余特殊環(huán)境樣品,具體咨詢生工高通量測(cè)序部。
DNA樣品:請(qǐng)?zhí)峁╇娪灸z圖,濃度>20 ng/μl,總量一般1~2 μg。乙醇沉淀DNA或凍干DNA,可冰袋運(yùn)輸,不超過(guò)3天。 上海地區(qū)宏基因組高通量測(cè)序應(yīng)用組織材料樣品(提取RNA用)建議將標(biāo)簽用膠帶貼到管壁,干冰運(yùn)輸。
全基因組測(cè)序是對(duì)未知基因組序列的物種進(jìn)行個(gè)體的基因組測(cè)序,其研究主要包括3個(gè)方面:第一種為不參考任何現(xiàn)有序列從頭組裝測(cè)序,是對(duì)未知基因組序列的物種進(jìn)行基因組測(cè)序,并綜合利用不同測(cè)序技術(shù)和生物信息學(xué)工具對(duì)研究物種進(jìn)行序列拼接和修正,進(jìn)而獲得該物種的基因組序列圖譜;第二種為常見(jiàn)的全基因組重測(cè)序,是對(duì)已知基因組序列的物種進(jìn)行個(gè)體或群體的測(cè)序研究,建立一個(gè)測(cè)序文庫(kù)進(jìn)行單個(gè)個(gè)體或不同個(gè)體混合池測(cè)序,發(fā)現(xiàn)遺傳變異標(biāo)記,進(jìn)行后續(xù)的研究;第三種是在已有參考基因組序列圖譜的基礎(chǔ)上,對(duì)不同品種的具有代表性個(gè)體建立多個(gè)文庫(kù)進(jìn)行全基因組從頭組裝測(cè)序,此方法能夠進(jìn)一步的進(jìn)行參考基因組的修補(bǔ)和發(fā)現(xiàn)短序列比對(duì)難以發(fā)現(xiàn)的遺傳變異。生工生物擁有眾多生物信息分析人才,可進(jìn)行專業(yè)的項(xiàng)目分析,為客戶提供個(gè)性化服務(wù)。
生工高通量測(cè)序樣品要求,組織/細(xì)胞樣品:請(qǐng)使用新鮮取樣的實(shí)驗(yàn)材料,當(dāng)場(chǎng)分成小塊后立即用液氮或干冰乙醇速凍,保存于-80°C冰箱,用足量的干冰(根據(jù)經(jīng)驗(yàn),在秋冬季節(jié),如果打包合適,3公斤塊狀干冰可以維持30-40小時(shí))寄送;于微生物樣品,請(qǐng)客戶如實(shí)聲明所屬物種,對(duì)于可能致病的微生物,生工保留拒收的權(quán)利;對(duì)于需要進(jìn)行RNA抽提的樣品,可以但不建議將組織在液氮中研磨后用TRIzol懸浮后用普通冰袋寄送,具體情況請(qǐng)先取得溝通。X儀器本身有16個(gè)通道(Controller為8通道),每個(gè)通道極限多捕獲20000個(gè)細(xì)胞(Controller為10000個(gè)細(xì)胞) 。
RNA樣品:1.請(qǐng)務(wù)必提供每個(gè)樣品具體的濃度、體積、制備時(shí)間以及物種來(lái)源。比較好附上電泳膠圖或者 Agilent Bioanalyzer 儀器檢測(cè)數(shù)據(jù)等;2.對(duì)于普通轉(zhuǎn)錄組樣品,請(qǐng)?zhí)峁舛取?00 ng/μl、總量≥2 μg 的總 RNA 樣品,樣品請(qǐng)去蛋白并進(jìn)行 DNase處理;一般情況下,普通轉(zhuǎn)錄組測(cè)序需要 RNA 樣品的 OD260/OD280為 2.0~2.2,Agilent Bioanalyzer 2100 器檢測(cè)獲得的總RNA 28S:18S≥1,RIN≥8;對(duì)于全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序樣品(ISO-seq),請(qǐng)?zhí)峁舛却笥?00 ng/ul,總量大于5 μg的總RNA樣品。樣品請(qǐng)去蛋白并進(jìn)行 DNase 處理;全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序需要 RNA 樣品的 OD260/OD280 為 2.0~2.2,2.3Agilent Bioanalyzer 2100 器檢測(cè)獲得的總RNA 28S:18S≥1,RIN≥8.5;單細(xì)胞測(cè)序到底是什么?多重PCR高通量測(cè)序服務(wù)
DNA樣品請(qǐng)用1.5 mL離心管裝好并用封口膜封好,并安置于50 mL離心管內(nèi)或其他類似容器里,并旋緊蓋子。上海ITS高通量測(cè)序公司
樣本寄送時(shí),請(qǐng)將填寫(xiě)完整的紙質(zhì)版《高通量測(cè)序送樣表》密封于塑料袋內(nèi),隨樣本一起寄出,紙質(zhì)版的樣本信息單用于樣本接收人員在收到樣本后及時(shí)并正確的保存并錄入樣本,如無(wú)紙質(zhì)版的樣本信息單可能會(huì)延誤項(xiàng)目周期;樣本管壁或管蓋上標(biāo)明的樣本名稱需要與《高通量測(cè)序送樣表》里樣本名稱一致,這樣可以避免我們收到樣本后與您確認(rèn)樣本編號(hào)而耽誤樣本質(zhì)檢、提取實(shí)驗(yàn);如有特殊情況,請(qǐng)?jiān)凇陡咄繙y(cè)序送樣表》中注明;樣品編號(hào)請(qǐng)避免使用中文、羅馬數(shù)字、“-”以及特殊符號(hào)標(biāo)示,避免分析的時(shí)候系統(tǒng)無(wú)法識(shí)別,導(dǎo)致分析無(wú)法完成;我們分析人員建議編號(hào)可以采用英文字母與阿拉伯?dāng)?shù)字結(jié)合的形式,字符比較好不要過(guò)長(zhǎng),避免繪制部分分析圖的時(shí)候難以全部展示。上海ITS高通量測(cè)序公司
生工生物工程(上海)股份有限公司在同行業(yè)領(lǐng)域中,一直處在一個(gè)不斷銳意進(jìn)取,不斷制造創(chuàng)新的市場(chǎng)高度,多年以來(lái)致力于發(fā)展富有創(chuàng)新價(jià)值理念的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn),在上海市等地區(qū)的醫(yī)藥健康中始終保持良好的商業(yè)口碑,成績(jī)讓我們喜悅,但不會(huì)讓我們止步,殘酷的市場(chǎng)磨煉了我們堅(jiān)強(qiáng)不屈的意志,和諧溫馨的工作環(huán)境,富有營(yíng)養(yǎng)的公司土壤滋養(yǎng)著我們不斷開(kāi)拓創(chuàng)新,勇于進(jìn)取的無(wú)限潛力,生工生物工程供應(yīng)攜手大家一起走向共同輝煌的未來(lái),回首過(guò)去,我們不會(huì)因?yàn)槿〉昧艘稽c(diǎn)點(diǎn)成績(jī)而沾沾自喜,相反的是面對(duì)競(jìng)爭(zhēng)越來(lái)越激烈的市場(chǎng)氛圍,我們更要明確自己的不足,做好迎接新挑戰(zhàn)的準(zhǔn)備,要不畏困難,激流勇進(jìn),以一個(gè)更嶄新的精神面貌迎接大家,共同走向輝煌回來(lái)!