上海市ITS高通量測序平臺

通過顯微鏡使用血球計數(shù)板質(zhì)檢能觀察到懸液背景質(zhì)量和細(xì)胞數(shù)目及活性的評估。讓我們再來回顧一下臺盼藍(lán)染色原理：臺盼藍(lán)染色原理：臺盼藍(lán)不能透過活細(xì)胞正常完整的細(xì)胞膜，故活細(xì)胞不被染色。而死細(xì)胞的細(xì)胞膜透性增高，可使染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)而使死細(xì)胞染成淡藍(lán)色。怎樣通過血球計數(shù)板進(jìn)行質(zhì)檢操作呢？將血球計數(shù)板擦拭干凈，取干凈的蓋玻片蓋在計數(shù)板上；將細(xì)胞懸液混勻（或10μl臺盼藍(lán)+10μl細(xì)胞懸液），吸出10μl懸液至計數(shù)板上蓋玻片的一側(cè)使細(xì)胞核懸液鋪滿蓋玻片和計數(shù)板之間；在顯微鏡下分別對V1/V2/V3/V4四個計數(shù)區(qū)域進(jìn)行計數(shù)；按細(xì)胞計數(shù)公式進(jìn)行計算，計算公式：細(xì)胞總數(shù)={(V1+V2+V3+V4)/4}*10000*懸液體積*稀釋倍數(shù)，V1/V2/V3/V4為各個計數(shù)區(qū)的細(xì)胞數(shù)目，細(xì)胞活率=活細(xì)胞數(shù)目/總細(xì)胞數(shù)目*100%。對于需要進(jìn)行RNA抽提的部分特殊樣品，可以將組織在液氮中研磨后用TRIzol懸浮后用普通冰袋寄送。上海市ITS高通量測序平臺

通過顯微鏡使用血球計數(shù)板質(zhì)檢得到質(zhì)檢結(jié)果：明場（細(xì)胞未染色）：主要可以觀察懸液背景質(zhì)量（背景干凈，無雜質(zhì)碎片，無細(xì)胞團(tuán)塊）；臺盼藍(lán)場（細(xì)胞與臺盼藍(lán)染色后）：主要可以觀察活性（主要為活細(xì)胞，未染色藍(lán)色的為活細(xì)胞）；通過臺盼藍(lán)場計算活率：90%>80%；細(xì)胞濃度:710cells/μl;等結(jié)果來看，血球計數(shù)板質(zhì)檢結(jié)果的展示可以看出所有指標(biāo)均符合上機標(biāo)準(zhǔn)，屬于高質(zhì)量單細(xì)胞懸液。以上就是我們本次的單細(xì)胞懸液質(zhì)檢指南分享啦。上海市單細(xì)胞測序高通量測序測序生工高通量測序部擁有豐富的樣品處理經(jīng)驗，日均處理樣品200余例。

懸液制備好后質(zhì)檢結(jié)果的判斷也是大家需要掌握的必備技能。單細(xì)胞懸液質(zhì)檢關(guān)卡究竟是怎樣運作的呢？單細(xì)胞懸液質(zhì)控要求：?細(xì)胞濃度：700-1200cells/μl；?細(xì)胞活率>80%（當(dāng)細(xì)胞懸液活率低于70%時建議進(jìn)行去除死細(xì)胞處理）；細(xì)胞團(tuán)及碎片雜質(zhì)<5%（無細(xì)胞粘連，無明顯的細(xì)胞碎片和細(xì)胞團(tuán)，并保證細(xì)胞的完整性）；?細(xì)胞狀態(tài)：細(xì)胞直徑在7-40um之間（細(xì)胞直徑過大則建議進(jìn)行抽核處理）；?不存在逆轉(zhuǎn)錄抑制劑和非細(xì)胞的核酸分子。

轉(zhuǎn)錄組測序，項目介紹：RNA-Seq，是基于新一代測序技術(shù)的轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究方法：首先提取生物樣品的全部轉(zhuǎn)錄的 RNA 并進(jìn)行 mRNA 富集，然后反轉(zhuǎn)錄為 cDNA 后進(jìn)行新一代高通量測序，在此基礎(chǔ)上進(jìn)行短片段拼接組裝，從而獲得一個個單獨轉(zhuǎn)錄本，進(jìn)而可以對該生物樣品當(dāng)前狀態(tài)的基因表達(dá)狀況有全局了解。對不同階段或部位生物樣品的轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行 比較分析，則可以在轉(zhuǎn)錄層面得到基因表達(dá)水平的變化，針對關(guān)鍵基因則可以進(jìn)行代謝通路（Pathway）的構(gòu)建。RNA樣品建議用足量干冰運輸。

small RNA測序，項目簡介：Small RNA是一類重要的體內(nèi)調(diào)節(jié)分子，長度在18-30 nt之間，主要包括miRNA、piRNA和siRNA。它的功能主要是誘導(dǎo)基因沉默，參與基因轉(zhuǎn)錄后調(diào)控，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、分化，以及個體發(fā)育、生殖等重要生物學(xué)過程。高通量測序技術(shù)可以對樣本中所有small RNA家族進(jìn)行測序和表達(dá)定量，從而解析miRNA、siRNA、piRNA和其它非編碼RNA以及相應(yīng)靶序列。測序使用Illumina Xten平臺，測序原始數(shù)據(jù)質(zhì)控后，進(jìn)行Clean reads 長度分布統(tǒng)計，small RNA注釋，已知 miRNA 注釋，已知piRNA注釋，ncRNA分析，新 miRNA 預(yù)測（有參考基因組），差異基因可視化分析，miRNA 家族分析，差異表達(dá) miRNA 聚類分析，miRNA靶基因預(yù)測，靶基因GO、KEGG富集分析。關(guān)鍵是KBSeq還可以省錢。上海無參轉(zhuǎn)錄組高通量測序高通量

使用足量的干冰運輸，并且盡量選用較快的郵遞方式，以降低運輸過程中樣品降解的可能性。上海市ITS高通量測序平臺

長鏈非編碼RNA(lncRNA)測序(只限有參考基因組物種)，項目介紹：長鏈非編碼RNAs（Long non-coding RNAs，LncRNAs）是一類轉(zhuǎn)錄本長度大于200 nt且不編碼蛋白質(zhì)的RNAs（不含rRNA），普遍存在于各種生物體內(nèi)。哺乳動物基因組序列中4%~9%的序列產(chǎn)生的轉(zhuǎn)錄本是LncRNA（相應(yīng)的蛋白編碼RNA比例是1%）。近年來研究表明，LncRNA參與了多種重要的調(diào)控過程，如X染色體沉默、基因組印記及染色質(zhì)修飾等。通過LncRNA測序，可以快速獲得與其生物學(xué)過程或者疾病相關(guān)的LncRNA的表達(dá)變化，從而促進(jìn)LncRNA的深入研究。上海市ITS高通量測序平臺

生工生物工程（上海）股份有限公司匯集了大量的優(yōu)秀人才，集企業(yè)奇思，創(chuàng)經(jīng)濟(jì)奇跡，一群有夢想有朝氣的團(tuán)隊不斷在前進(jìn)的道路上開創(chuàng)新天地，繪畫新藍(lán)圖，在上海市等地區(qū)的醫(yī)藥健康中始終保持良好的信譽，信奉著“爭取每一個客戶不容易，失去每一個用戶很簡單”的理念，市場是企業(yè)的方向，質(zhì)量是企業(yè)的生命，在公司有效方針的領(lǐng)導(dǎo)下，全體上下，團(tuán)結(jié)一致，共同進(jìn)退，齊心協(xié)力把各方面工作做得更好，努力開創(chuàng)工作的新局面，公司的新高度，未來生工生物工程供應(yīng)和您一起奔向更美好的未來，即使現(xiàn)在有一點小小的成績，也不足以驕傲，過去的種種都已成為昨日我們只有總結(jié)經(jīng)驗，才能繼續(xù)上路，讓我們一起點燃新的希望，放飛新的夢想！