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單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序中,制備高質(zhì)量的單細(xì)胞懸液至關(guān)重要。而懸液制備好后質(zhì)檢結(jié)果的判斷也是大家需要掌握的必備技能。單細(xì)胞懸液質(zhì)檢關(guān)卡究竟是怎樣運作的呢?單細(xì)胞懸液質(zhì)控要求:?細(xì)胞濃度:700-1200cells/μl;?細(xì)胞活率>80%(當(dāng)細(xì)胞懸液活率低于70%時建議進(jìn)行去除死細(xì)胞處理);細(xì)胞團(tuán)及碎片雜質(zhì)<5%(無細(xì)胞粘連,無明顯的細(xì)胞碎片和細(xì)胞團(tuán),并保證細(xì)胞的完整性);?細(xì)胞狀態(tài):細(xì)胞直徑在7-40um之間(細(xì)胞直徑過大則建議進(jìn)行抽核處理);?不存在逆轉(zhuǎn)錄抑制劑和非細(xì)胞的核酸分子。如果是水體樣品,建議采用濾膜過濾后,將濾膜寄送來生工。lncRNA高通量測序項目
16s/18s/ITS微生物分類測序,項目介紹:環(huán)境微生物是自然界中分布建議廣、種類建議多、數(shù)量比較大的生物類群,其群落結(jié)構(gòu)及多樣性和微生物的功能及代謝機(jī)理是微生物生態(tài)學(xué)的研究熱點,對于我們研究微生物與環(huán)境的關(guān)系、環(huán)境治理和微生物資源的利用以及人類醫(yī)療健康有著重要的理論和現(xiàn)實意義。隨著高通量測序技術(shù)的發(fā)展以及大量序列數(shù)據(jù)的積累,通用引物擴(kuò)增結(jié)合高通量測序技術(shù),可以快速檢索環(huán)境內(nèi)微生物的群落結(jié)構(gòu)。這項運用我們稱之為微生物分類測序。如Illumina公司的MiSeq高通量測序平臺不僅可實現(xiàn)對多樣品的多個可變區(qū)同時測序,而且在測序速度和測序通量上都有進(jìn)一步提升,目前此平臺已在微生物多樣性群落結(jié)構(gòu)研究方面受到了廣大學(xué)者的認(rèn)可。上海羥甲基化測序高通量測序應(yīng)用單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序指在單細(xì)胞水平上對 mRNA 進(jìn)行高通量測序和分析的技術(shù)。
通過顯微鏡使用血球計數(shù)板質(zhì)檢能觀察到懸液背景質(zhì)量和細(xì)胞數(shù)目及活性的評估。讓我們再來回顧一下臺盼藍(lán)染色原理:臺盼藍(lán)染色原理:臺盼藍(lán)不能透過活細(xì)胞正常完整的細(xì)胞膜,故活細(xì)胞不被染色。而死細(xì)胞的細(xì)胞膜透性增高,可使染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)而使死細(xì)胞染成淡藍(lán)色。怎樣通過血球計數(shù)板進(jìn)行質(zhì)檢操作呢?將血球計數(shù)板擦拭干凈,取干凈的蓋玻片蓋在計數(shù)板上;將細(xì)胞懸液混勻(或10μl臺盼藍(lán)+10μl細(xì)胞懸液),吸出10μl懸液至計數(shù)板上蓋玻片的一側(cè)使細(xì)胞核懸液鋪滿蓋玻片和計數(shù)板之間;在顯微鏡下分別對V1/V2/V3/V4四個計數(shù)區(qū)域進(jìn)行計數(shù);按細(xì)胞計數(shù)公式進(jìn)行計算,計算公式:細(xì)胞總數(shù)={(V1+V2+V3+V4)/4}*10000*懸液體積*稀釋倍數(shù),V1/V2/V3/V4為各個計數(shù)區(qū)的細(xì)胞數(shù)目,細(xì)胞活率=活細(xì)胞數(shù)目/總細(xì)胞數(shù)目*100%。
單細(xì)胞測序技術(shù)的應(yīng)用:單細(xì)胞測序技術(shù)可以檢測復(fù)雜組織中單個細(xì)胞不同的生物學(xué)特性,這可以極大的幫助我們進(jìn)一步了解細(xì)胞與細(xì)胞之間的差異。"這幾乎就像通過幾顆星星看到了整個宇宙。"哈佛大學(xué)分子和細(xì)胞生物學(xué)教授 Alexander Schier的這句話應(yīng)用在這里也是很合適了。這幅圖正是來自于在2018年4月 Science 雜志發(fā)表的三篇[8-10]來自哈佛醫(yī)學(xué)院和哈佛大學(xué)的研究人員關(guān)于單細(xì)胞基因測序文章中的一幅結(jié)果圖,Alexander Schier教授也是其中一篇文章的作者。這幾篇文章使用多種檢測技術(shù)組合,其中包括對數(shù)千個發(fā)育中的斑馬魚和青蛙胚胎單細(xì)胞測序,在胚胎發(fā)育建議初的24小時內(nèi)追蹤單個細(xì)胞的發(fā)育情況,可以揭示出胚胎細(xì)胞何時何地轉(zhuǎn)變?yōu)樾碌募?xì)胞狀態(tài)和類型并向我們展示了組織和整個機(jī)體從單細(xì)胞發(fā)育的完整歷程。如果你的樣品是質(zhì)?;蛘呤蔷海菫槭裁床辉囋囄覀兊腒BSeq呢?
生工高通量測序樣品要求,組織/細(xì)胞樣品:請使用新鮮取樣的實驗材料,當(dāng)場分成小塊后立即用液氮或干冰乙醇速凍,保存于-80°C冰箱,用足量的干冰(根據(jù)經(jīng)驗,在秋冬季節(jié),如果打包合適,3公斤塊狀干冰可以維持30-40小時)寄送;于微生物樣品,請客戶如實聲明所屬物種,對于可能致病的微生物,生工保留拒收的權(quán)利;對于需要進(jìn)行RNA抽提的樣品,可以但不建議將組織在液氮中研磨后用TRIzol懸浮后用普通冰袋寄送,具體情況請先取得溝通。對于需要進(jìn)行RNA抽提的部分特殊樣品,可以將組織在液氮中研磨后用TRIzol懸浮后用普通冰袋寄送。上海羥甲基化測序高通量測序應(yīng)用
ChIP項目至少要求50ng DNA,以Qubit 2.0檢測為準(zhǔn)。其余具體咨詢生工高通量測序部。lncRNA高通量測序項目
微生物基因組重測序(有參):目前越來越多的微生物基因組被解析出來了。從而使得科研工作者們可以對某些物種微生物進(jìn)行進(jìn)行物種進(jìn)化、種群特征、選擇壓力等研究。利用高通量測序技術(shù),對有參考基因組微生物進(jìn)行多個體的基因組重測序,精細(xì)分析其與參考基因組的SNP、InDel、SV等變異信息。微生物基因組從頭測序(無參):對于不斷分離培養(yǎng)微生物的客戶來說,要確定一個菌株是否是新菌株或者新菌種,較快捷的辦法就是,直接進(jìn)行基因組測序。利用高通量測序技術(shù),對這些基因組進(jìn)行高深度測序,然后進(jìn)行基因組組裝,獲得基因組的框架圖或者精細(xì)圖甚至是完成圖。從而可以快速解析其基因組結(jié)構(gòu)、基因功能、進(jìn)化關(guān)系。lncRNA高通量測序項目
生工生物工程(上海)股份有限公司匯集了大量的優(yōu)秀人才,集企業(yè)奇思,創(chuàng)經(jīng)濟(jì)奇跡,一群有夢想有朝氣的團(tuán)隊不斷在前進(jìn)的道路上開創(chuàng)新天地,繪畫新藍(lán)圖,在上海市等地區(qū)的醫(yī)藥健康中始終保持良好的信譽,信奉著“爭取每一個客戶不容易,失去每一個用戶很簡單”的理念,市場是企業(yè)的方向,質(zhì)量是企業(yè)的生命,在公司有效方針的領(lǐng)導(dǎo)下,全體上下,團(tuán)結(jié)一致,共同進(jìn)退,齊心協(xié)力把各方面工作做得更好,努力開創(chuàng)工作的新局面,公司的新高度,未來生工生物工程供應(yīng)和您一起奔向更美好的未來,即使現(xiàn)在有一點小小的成績,也不足以驕傲,過去的種種都已成為昨日我們只有總結(jié)經(jīng)驗,才能繼續(xù)上路,讓我們一起點燃新的希望,放飛新的夢想!