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對于細(xì)胞樣品,送樣量需達(dá)到 5 × 106(5乘10的6次方)數(shù)量級。富集后置于 2 ml Ep管中,用 1 ml TRIzol 重懸,注意取樣后立即用液氮或干冰乙醇速凍,保存于-80°C 冰箱,埋于足量的干冰中用保溫箱寄送。強(qiáng)烈建議細(xì)胞樣品先做細(xì)胞鑒定及支原體/衣原體污染之后,再送出來。對于血液樣本,只接收未凍存過的抗凝血新鮮樣本??鼓齽┎豢墒褂酶嗡剽c,可用EDTA或ACD抗凝劑,取血后以冰袋保存,切記不能使血液凍結(jié),從取血之時開始計算,須在48小時之內(nèi)送達(dá)生工上??偛扛咄繙y序部。如果不能提供新鮮樣本,則請?zhí)峁难褐刑崛〉目俁NA樣本。備樣要求詳見B、RNA 樣品。ChIP項(xiàng)目至少要求50ng DNA,以Qubit 2.0檢測為準(zhǔn)。其余具體咨詢生工高通量測序部。多重擴(kuò)增高通量測序高通量
懸液制備好后質(zhì)檢結(jié)果的判斷也是大家需要掌握的必備技能。單細(xì)胞懸液質(zhì)檢關(guān)卡究竟是怎樣運(yùn)作的呢?單細(xì)胞懸液質(zhì)控要求:?細(xì)胞濃度:700-1200cells/μl;?細(xì)胞活率>80%(當(dāng)細(xì)胞懸液活率低于70%時建議進(jìn)行去除死細(xì)胞處理);細(xì)胞團(tuán)及碎片雜質(zhì)<5%(無細(xì)胞粘連,無明顯的細(xì)胞碎片和細(xì)胞團(tuán),并保證細(xì)胞的完整性);?細(xì)胞狀態(tài):細(xì)胞直徑在7-40um之間(細(xì)胞直徑過大則建議進(jìn)行抽核處理);?不存在逆轉(zhuǎn)錄抑制劑和非細(xì)胞的核酸分子。上海市單細(xì)胞測序高通量測序測序特別申明:不能采用過柱離心的方法提取總RNA。
樣本寄送時,請將填寫完整的紙質(zhì)版《高通量測序送樣表》密封于塑料袋內(nèi),隨樣本一起寄出,紙質(zhì)版的樣本信息單用于樣本接收人員在收到樣本后及時并正確的保存并錄入樣本,如無紙質(zhì)版的樣本信息單可能會延誤項(xiàng)目周期;樣本管壁或管蓋上標(biāo)明的樣本名稱需要與《高通量測序送樣表》里樣本名稱一致,這樣可以避免我們收到樣本后與您確認(rèn)樣本編號而耽誤樣本質(zhì)檢、提取實(shí)驗(yàn);如有特殊情況,請在《高通量測序送樣表》中注明;樣品編號請避免使用中文、羅馬數(shù)字、“-”以及特殊符號標(biāo)示,避免分析的時候系統(tǒng)無法識別,導(dǎo)致分析無法完成;我們分析人員建議編號可以采用英文字母與阿拉伯?dāng)?shù)字結(jié)合的形式,字符比較好不要過長,避免繪制部分分析圖的時候難以全部展示。
生工高通量測序部擁有豐富的樣品處理經(jīng)驗(yàn),日均處理樣品200余例,涵蓋污泥、糞便、海底沉泥、水體濾膜、植物組織、動物組織/細(xì)胞等樣品,省去您處理樣品的繁瑣過程。生物信息分析經(jīng)驗(yàn)豐富,可以滿足客戶標(biāo)準(zhǔn)分析到定制分析作圖的需求。且生工一直秉持只要生工已經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化的分析內(nèi)容(以生工分析報告模板為準(zhǔn)),全部free。生工生物擁有生命科學(xué)領(lǐng)域較全的產(chǎn)品及服務(wù)體系,可以承接從分子到蛋白各個層級的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目,一站式解決問題。同時生工生物單細(xì)胞團(tuán)隊目前已同時擁有10xGenomicsChromiumController和ChromiumX雙平臺,可為您提供超高通量和低通量單細(xì)胞樣本雙重。生工一直秉持只要生工已經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化的分析內(nèi)容(以生工分析報告模板為準(zhǔn)),全部無費(fèi)用。
通過顯微鏡使用血球計數(shù)板質(zhì)檢得到質(zhì)檢結(jié)果:明場(細(xì)胞未染色):主要可以觀察懸液背景質(zhì)量(背景干凈,無雜質(zhì)碎片,無細(xì)胞團(tuán)塊);臺盼藍(lán)場(細(xì)胞與臺盼藍(lán)染色后):主要可以觀察活性(主要為活細(xì)胞,未染色藍(lán)色的為活細(xì)胞);通過臺盼藍(lán)場計算活率:90%>80%;細(xì)胞濃度:710cells/μl;等結(jié)果來看,血球計數(shù)板質(zhì)檢結(jié)果的展示可以看出所有指標(biāo)均符合上機(jī)標(biāo)準(zhǔn),屬于高質(zhì)量單細(xì)胞懸液。以上就是我們本次的單細(xì)胞懸液質(zhì)檢指南分享啦。DNA樣品請?zhí)峁╇娪灸z圖,濃度>20 ng/μl,總量一般1~2 μg。乙醇沉淀DNA或凍干DNA,可冰袋運(yùn)輸,不超過3天。單細(xì)胞測序高通量測序原理
一臺10xGenomics Chromium X儀器能夠在單次運(yùn)行中分析數(shù)百至數(shù)十萬個細(xì)胞,讓百萬級的細(xì)胞研究變得常規(guī)。多重擴(kuò)增高通量測序高通量
使用顯微鏡進(jìn)行懸液質(zhì)檢操作時應(yīng)注意:1.使用血球計數(shù)板時,可以提前鏡檢觀察每小格計數(shù)室內(nèi)是否潔凈無雜質(zhì)。若有雜質(zhì)灰層,則需要多次清洗,直至計數(shù)室潔凈無瑕;2.質(zhì)檢前將懸液輕微震蕩或使用擴(kuò)口gun頭吹打混勻;3.臺盼藍(lán)染色后需要盡快完成細(xì)胞計數(shù),一般建議不要超過10分鐘;4.如果方格中細(xì)胞數(shù)目過多,難以數(shù)清,應(yīng)當(dāng)對細(xì)胞懸液進(jìn)行稀釋以便于計數(shù);5.對于壓在方格界線上的細(xì)胞應(yīng)當(dāng)計數(shù)同側(cè)相鄰兩邊上的細(xì)胞數(shù),一般可采取“數(shù)上線不數(shù)下線,數(shù)左線不數(shù)右線”的原則處理,另兩邊不計數(shù)。多重擴(kuò)增高通量測序高通量
生工生物工程(上海)股份有限公司位于香閔路698號。公司業(yè)務(wù)涵蓋生化試劑,實(shí)驗(yàn)耗材,實(shí)驗(yàn)試劑,研發(fā)等,價格合理,品質(zhì)有保證。公司秉持誠信為本的經(jīng)營理念,在醫(yī)藥健康深耕多年,以技術(shù)為先導(dǎo),以自主產(chǎn)品為重點(diǎn),發(fā)揮人才優(yōu)勢,打造醫(yī)藥健康良好品牌。生工生物秉承“客戶為尊、服務(wù)為榮、創(chuàng)意為先、技術(shù)為實(shí)”的經(jīng)營理念,全力打造公司的重點(diǎn)競爭力。