杭州qPCR法病毒檢測(cè)公司

基因治  療產(chǎn)品是近年來(lái)國(guó)內(nèi)外藥物研發(fā)的熱點(diǎn)，通常由各種病毒或非病毒載體攜帶治  療基因組成。在病毒載體中，慢病毒載體(LVs)由于其有效的將基因整合進(jìn)靶細(xì)胞基因組、穩(wěn)定的基因表達(dá)等特點(diǎn)，被認(rèn)為是蕞有希望的基因治  療載體?？紤]到慢病毒對(duì)人的病原性及相關(guān)的安全性，所使用的慢病毒載體均為復(fù)制缺陷型載體，但在病毒載體生產(chǎn)過(guò)程中可能由于同源重組或非同源重組導(dǎo)致可復(fù)制性慢病毒(RCL)的產(chǎn)生，RCL可以整合到細(xì)胞基因組中，從而導(dǎo)致原ai基因激   活，抑ai基因破壞等，因此，這類(lèi)產(chǎn)品中的復(fù)制型慢病毒檢測(cè)是安全性檢測(cè)中非常重要的項(xiàng)目，美國(guó)FDA及中國(guó)CDE都要求在生產(chǎn)的整個(gè)過(guò)程及不同階段都要進(jìn)行RCL檢測(cè)，以確保無(wú)RCL的污染。南京正揚(yáng)有復(fù)制型腺相關(guān)病毒檢測(cè)試劑盒性能如何？杭州qPCR法病毒檢測(cè)公司

RCL/RCR病毒檢測(cè)的方法FDA推薦的RCL檢測(cè)方法是利用敏感細(xì)胞對(duì)病毒載體中可能存在的RCL進(jìn)行培養(yǎng)擴(kuò)增，并在培養(yǎng)終點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)。?擴(kuò)增期：將待測(cè)物與對(duì)HIV-1易感并且可大量擴(kuò)增病毒的細(xì)胞系(通常用C8166)孵育，細(xì)胞傳代5次以上，培養(yǎng)至少3周。?指示期：3周后收集培養(yǎng)上清，接種于C8166細(xì)胞中培養(yǎng)7d后檢測(cè)RCL標(biāo)志物。?檢測(cè)：A：P24ELLISA的方法：適用于由載體制備過(guò)程中病毒基因組之間的重組形成RCL的檢測(cè)。B：PERT法：當(dāng)RCL進(jìn)行擴(kuò)增后，也可應(yīng)用PERT檢測(cè)方法測(cè)定逆轉(zhuǎn)錄酶活性。該方法的缺點(diǎn)是在某些細(xì)胞中存在高背景。C：qPCR方法：采用實(shí)時(shí)定量PCR方法(Q-PCR)測(cè)定假型病毒杭州qPCR法病毒檢測(cè)公司南京正揚(yáng)有復(fù)制型病毒檢測(cè)試劑盒試劑盒性能如何？

《CAR-T細(xì)胞治  療產(chǎn)品質(zhì)量控制檢測(cè)研究及非臨床研究考慮要點(diǎn)》一文提到：目前RCR/RCL病毒檢測(cè)方法主要有指示細(xì)胞培養(yǎng)法、ELISA法(p24蛋白測(cè)定)、PCR/q-PCR法（通過(guò)psi-gag或VSV-G聚合酶鏈反應(yīng)）和轉(zhuǎn)錄酶活性測(cè)定法(PERT)等。其中，利用指示細(xì)胞培養(yǎng)法對(duì)生產(chǎn)過(guò)程中的病毒（上清液、病毒生產(chǎn)終末期細(xì)胞）存在的RCL進(jìn)行培養(yǎng)擴(kuò)增，并在培養(yǎng)終點(diǎn)進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)是FDA推薦的RCL檢測(cè)方法。

《CAR-T細(xì)胞治  療產(chǎn)品質(zhì)量控制檢測(cè)研究及非臨床研究考慮要點(diǎn)》一文提到：目前RCR/RCL病毒檢測(cè)方法主要有指示細(xì)胞培養(yǎng)法、ELISA法(p24蛋白測(cè)定)、PCR/q-PCR法（通過(guò)psi-gag或VSV-G聚合酶鏈反應(yīng)）和轉(zhuǎn)錄酶活性測(cè)定法(PERT)等。其中，利用指示細(xì)胞培養(yǎng)法對(duì)生產(chǎn)過(guò)程中的病毒（上清液、病毒生產(chǎn)終末期細(xì)胞）存在的RCL進(jìn)行培養(yǎng)擴(kuò)增，并在培養(yǎng)終點(diǎn)進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)是FDA推薦的RCL檢測(cè)方法。

盡管逆轉(zhuǎn)錄病毒和慢病毒載體被設(shè)計(jì)為具有復(fù)制缺陷，但仍有可能在生產(chǎn)過(guò)程中或輸注到患者體內(nèi)后發(fā)生重組，從而產(chǎn)生新的具有復(fù)制能力的逆轉(zhuǎn)錄病毒/慢病毒（RCR/RCL）。FDA在有關(guān)細(xì)胞產(chǎn)品和患者中檢測(cè)RCR復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒/RCL復(fù)制型慢病毒的指南中建議使用適當(dāng)?shù)?span style="color:#f5c81c;">生物學(xué)和/或分子檢測(cè)方法進(jìn)行病毒載體、細(xì)胞產(chǎn)品和輸注后患者中的RCR復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒/RCL復(fù)制型慢病毒檢測(cè)。南京正揚(yáng)生物自主研發(fā)了可用于基于細(xì)胞培養(yǎng)方法的qPCR檢測(cè)以及CAR-T終產(chǎn)品qPCR檢測(cè)的RCL及RCR檢測(cè)專(zhuān)   用試劑盒，幫助研究者進(jìn)行分析。qPCR法復(fù)制型慢病毒檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn)有哪些？

RCL復(fù)制型慢病毒檢測(cè)的背景：CAR-T（chimericantigenreceptorT-cellimmunotherapy），即嵌合抗原受體T細(xì)胞免疫療法。它是一種醫(yī)治種瘤的新型精確靶向療法，能夠精確、高效，且有希望治好ai癥的免疫醫(yī)治方法。目前，主要有兩種病毒載體用于CAR-T細(xì)胞基因轉(zhuǎn)導(dǎo)：γ逆轉(zhuǎn)錄病毒載體和慢病毒載體。目前基因醫(yī)治產(chǎn)品所用慢病毒載體均是非復(fù)制型的，但在病毒包裝過(guò)程中，可能會(huì)由于同源或非同源重組等機(jī)制產(chǎn)生復(fù)制型慢病毒(RCL)。出于安全、有效、質(zhì)量可控的考慮，應(yīng)當(dāng)對(duì)該類(lèi)病毒進(jìn)行檢測(cè)，以避免在人體內(nèi)無(wú)控地自我復(fù)制，造成傷害，防止發(fā)生臨床安全性隱患事件。復(fù)制型慢病毒檢測(cè)方法有哪些？深圳重組腺相關(guān)病毒檢測(cè)試劑盒

為什么要做重組腺相關(guān)病毒檢測(cè)？杭州qPCR法病毒檢測(cè)公司

病毒作為基因載體已普遍用于基因和細(xì)胞醫(yī)治產(chǎn)品。目前常見(jiàn)的病毒載體包括慢病毒（Lentiviral）、逆轉(zhuǎn)錄病毒（Retrovirus）、腺病毒（Adenovirus）、腺相關(guān)病毒（AAV）等。在生產(chǎn)過(guò)程中，如果被有復(fù)制能力的病毒污染，或載體發(fā)生重組，病毒載體中可能會(huì)混雜有復(fù)制型病毒。復(fù)制型慢病毒/逆轉(zhuǎn)錄病毒（RCL/RCR）可將病毒基因組整合到細(xì)胞基因組中，存在激   活原ai基因、破壞抑ai基因造成二次中瘤的風(fēng)險(xiǎn)；同時(shí)因其具有復(fù)制性，且用水泡性口炎病毒糖蛋白（VSV-G）替代了env編碼的包膜糖蛋白，提高了病毒的嗜性范圍，增加RCR/RCL帶來(lái)的潛在風(fēng)險(xiǎn)；而如果出現(xiàn)復(fù)制型腺相關(guān)病毒（rcAAV），其則會(huì)在被感   染的細(xì)胞中表達(dá)cap或rep基因，容易導(dǎo)致意外的免疫反應(yīng)。因此，各國(guó)法規(guī)對(duì)復(fù)制性   病毒檢測(cè)都提出了明確要求。杭州qPCR法病毒檢測(cè)公司