病毒作為基因載體已普遍用于基因和細(xì)胞醫(yī)治產(chǎn)品。目前常見的病毒載體包括慢病毒(Lentiviral)、逆轉(zhuǎn)錄病毒(Retrovirus)、腺病毒(Adenovirus)、腺相關(guān)病毒(AAV)等。在生產(chǎn)過程中,如果被有復(fù)制能力的病毒污染,或載體發(fā)生重組,病毒載體中可能會混雜有復(fù)制型病毒。復(fù)制型慢病毒/逆轉(zhuǎn)錄病毒(RCL/RCR)可將病毒基因組整合到細(xì)胞基因組中,存在激 活原ai基因、破壞抑ai基因造成二次中瘤的風(fēng)險;同時因其具有復(fù)制性,且用水泡性口炎病毒糖蛋白(VSV-G)替代了env編碼的包膜糖蛋白,提高了病毒的嗜性范圍,增加RCR/RCL帶來的潛在風(fēng)險;而如果出現(xiàn)復(fù)制型腺相關(guān)病毒(rcAAV),其則會在被感 染的細(xì)胞中表達(dá)cap或rep基因,容易導(dǎo)致意外的免疫反應(yīng)。因此,各國法規(guī)對復(fù)制性 病毒檢測都提出了明確要求。復(fù)制型病毒檢測試劑盒要求有哪些?廣州重組腺相關(guān)病毒檢測原理
南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的RCL基因拷貝數(shù)檢測試劑盒(RT-PCR熒光探針法)、RCR基因拷貝數(shù)檢測試劑盒(RT-PCR熒光探針法)、rcAAV-5/N檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)既適用于基于細(xì)胞培養(yǎng)法對復(fù)制型病毒的qPCR法的檢測,也適用于對無細(xì)胞基質(zhì)的病毒收獲液(上清液)等樣品的復(fù)制型病毒檢測。試劑盒進(jìn)行了多面的性能驗(yàn)證,靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好、符合法規(guī)要求。南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的RCL基因拷貝數(shù)檢測試劑盒(RT-PCR熒光探針法)、RCR基因拷貝數(shù)檢測試劑盒(RT-PCR熒光探針法)、rcAAV-5/N檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)既適用于基于細(xì)胞培養(yǎng)法對復(fù)制型病毒的qPCR法的檢測,也適用于對無細(xì)胞基質(zhì)的病毒收獲液(上清液)等樣品的復(fù)制型病毒檢測。試劑盒進(jìn)行了多面的性能驗(yàn)證,靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好、符合法規(guī)要求。杭州rcAAV病毒檢測服務(wù)復(fù)制型慢病毒檢測方法有哪些?
南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的RCL復(fù)制型慢病毒/RCR復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測試劑盒的特點(diǎn):①檢測試劑盒采用qRT-PCR原理,操作便捷,2-3小時可出結(jié)果。②試劑盒檢測體系經(jīng)過精心研發(fā),可以阻止氣溶膠污染物在下一次的檢測反應(yīng)中產(chǎn)生擴(kuò)增,可以蕞大程度的減少檢測過程中污染情況的發(fā)生。③RCL和RCR病毒檢測方法成熟,試劑盒性能穩(wěn)定,檢測靈敏度高,可以快速準(zhǔn)確的獲得供試品中靶向基因的含量,幫助研究者進(jìn)行分析。歡迎聯(lián)系!
根據(jù)FDA2006年發(fā)布的關(guān)于RCR復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測的指南和2018年新更新的檢測指南征求意見稿,目前RCR復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒/RCL復(fù)制型慢病毒檢測的金標(biāo)準(zhǔn)是共培養(yǎng)法,即將測試樣品(病毒載體上清液、生產(chǎn)終末細(xì)胞、體外轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞等)與允許細(xì)胞系進(jìn)行共培養(yǎng),至少5次傳代以擴(kuò)增任何潛在的RCR復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒/RCL復(fù)制型慢病毒,然后在指示階段,通過檢測特異性核酸、蛋白的方法進(jìn)行測定,qPCR/RT-PCR法具備操作便捷快速、特異性好、靈敏度高、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn),是RCR/RCL檢測的優(yōu) 選方法。南京正揚(yáng)的重組腺相關(guān)病毒檢測試劑盒性能如何?
南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的RCL復(fù)制型慢病毒檢測試劑盒適用于定量檢測慢病毒載體生產(chǎn)的細(xì)胞醫(yī)治產(chǎn)品和基因醫(yī)治產(chǎn)品中復(fù)制型慢病毒RCL,如生產(chǎn)病毒的細(xì)胞庫、終末細(xì)胞、病毒載體及CAR-T細(xì)胞。采用熒光探針RT-PCR的方法檢測慢病毒載體上特定序列,配套有RCL定量參考品,用于精確定量樣品中復(fù)制型慢病毒RCL的拷貝數(shù),產(chǎn)品具備檢測性能可靠、靈敏度高、特異性好、操作便捷快速等優(yōu)點(diǎn)。南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的RCL復(fù)制型慢病毒檢測試劑盒適用于定量檢測慢病毒載體生產(chǎn)的細(xì)胞醫(yī)治產(chǎn)品和基因醫(yī)治產(chǎn)品中復(fù)制型慢病毒RCL,如生產(chǎn)病毒的細(xì)胞庫、終末細(xì)胞、病毒載體及CAR-T細(xì)胞。采用熒光探針RT-PCR的方法檢測慢病毒載體上特定序列,配套有RCL定量參考品,用于精確定量樣品中復(fù)制型慢病毒RCL的拷貝數(shù),產(chǎn)品具備檢測性能可靠、靈敏度高、特異性好、操作便捷快速等優(yōu)點(diǎn)。重組腺相關(guān)病毒檢測要求有哪些?蘇州qPCR法病毒檢測品牌
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用qPCR法進(jìn)行rcAAV復(fù)制型腺相關(guān)病毒檢測時,出現(xiàn)擴(kuò)增曲線復(fù)孔間熒光信號值降低及復(fù)孔間擴(kuò)增曲線重復(fù)性差的原因可能是什么?復(fù)孔間部分曲線熒光信號值降低的現(xiàn)象比較常見,通常與反應(yīng)管內(nèi)存在氣泡相關(guān),隨反應(yīng)溫度升高,氣泡破裂導(dǎo)致熒光信號值降低。上機(jī)前需仔細(xì)檢查反應(yīng)管內(nèi)是否有氣泡殘留。另外,針對加樣誤差引起的復(fù)孔間重復(fù)性差,實(shí)驗(yàn)人員上崗前需加強(qiáng)培訓(xùn)并考核,移液器務(wù)必定期校準(zhǔn)并正確掌握使用方法。此外,還需注意確保試劑與樣品混勻,離心后再上機(jī)。廣州重組腺相關(guān)病毒檢測原理