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南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測試劑盒簡介:RCR基因拷貝數(shù)檢測試劑盒適用于定量檢測逆轉(zhuǎn)錄病毒載體生產(chǎn)的細(xì)胞醫(yī)治產(chǎn)品和基因醫(yī)治產(chǎn)品中復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒RCR,如生產(chǎn)病毒的細(xì)胞庫、終末細(xì)胞、病毒載體及CAR-T細(xì)胞等。采用熒光探針RT-PCR的方法檢測逆轉(zhuǎn)錄病毒載體上的特定序列,試劑盒配套有RCR定量參考品,用于精確定量樣品中復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒RCR的拷貝數(shù)。南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測試劑盒簡介:RCR基因拷貝數(shù)檢測試劑盒適用于定量檢測逆轉(zhuǎn)錄病毒載體生產(chǎn)的細(xì)胞醫(yī)治產(chǎn)品和基因醫(yī)治產(chǎn)品中復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒RCR,如生產(chǎn)病毒的細(xì)胞庫、終末細(xì)胞、病毒載體及CAR-T細(xì)胞等。采用熒光探針RT-PCR的方法檢測逆轉(zhuǎn)錄病毒載體上的特定序列,試劑盒配套有RCR定量參考品,用于精確定量樣品中復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒RCR的拷貝數(shù)。復(fù)制型慢病毒檢測的法規(guī)監(jiān)管要求。蘇州PCR法病毒檢測試劑盒
基于細(xì)胞培養(yǎng)法和qPCR快檢法都能實(shí)現(xiàn)對重組腺相關(guān)病毒載體(rAAV)中復(fù)制型腺相關(guān)病毒(rcAAV)的污染率的檢測,但兩者在實(shí)際檢測中都存在檢測值不夠準(zhǔn)確的風(fēng)險(xiǎn)(基于細(xì)胞培養(yǎng)法存在低于實(shí)際值的風(fēng)險(xiǎn)qPCR快檢法存在高于實(shí)際值的風(fēng)險(xiǎn))。南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的復(fù)制性腺相關(guān)病毒檢測試劑盒(PCR熒光探針法)是一款既適用于基于細(xì)胞培養(yǎng)法對rcAAV的檢測,也適用于對rcAAV的直接檢測的試劑盒,可達(dá)到兩種方法間相互驗(yàn)證、相互補(bǔ)充的目的。試劑盒中Reference基因和Target基因包含在同一定量參考品中可同時(shí)實(shí)現(xiàn)對rAAV載體和rcAAV濃度快速、靈敏、特異性的定量檢測。RCL病毒檢測試劑盒復(fù)制型病毒檢測試劑盒。
用qPCR法進(jìn)行rcAAV復(fù)制型腺相關(guān)病毒檢測時(shí),出現(xiàn)擴(kuò)增曲線異常的可能原因是什么?①軟件參數(shù)設(shè)置不當(dāng)可能引起標(biāo)曲參數(shù)或檢測結(jié)果異常。如擴(kuò)增曲線信號蕞早出現(xiàn)在14個(gè)循環(huán)左右,基線卻設(shè)置為3-15,導(dǎo)致儀器將14個(gè)循環(huán)出現(xiàn)的熒光信號默認(rèn)為基線部分,出現(xiàn)結(jié)果異常。建議將BaselineEnd設(shè)置為擴(kuò)增信號出現(xiàn)的前一個(gè)循環(huán),或由軟件自動(dòng)設(shè)置。②擴(kuò)增曲線飄起:該現(xiàn)象通常出現(xiàn)于高濃度模板情況下,擴(kuò)增曲線Ct值在10以內(nèi)的樣品。針對此類樣品檢測,設(shè)置標(biāo)曲時(shí)建議盡量控制標(biāo)曲蕞高濃度Ct值控制在10以上。檢測樣品時(shí)建議對樣品進(jìn)行稀釋后再測試。
RCL復(fù)制型慢病毒檢測:鑒于RCL的潛在威脅,從慢病毒載體生產(chǎn)工藝的各個(gè)環(huán)節(jié):主細(xì)胞庫(MCB)、工作細(xì)胞庫(WCB)、終末端細(xì)胞(EOPC)、慢病毒收獲液(UPB)、轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞甚至CAR-T治 療病人的臨床樣本都需要進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)控檢測來核實(shí)是否存在RCL,從而可以大限度地避免病人因CAR-T治 療發(fā)生二次腫 瘤。復(fù)制型慢病毒RCL的指示細(xì)胞培養(yǎng)法檢測需28天,耗時(shí)較長;而基于VSV-G序列的Q-PCR方法和基于gag序列的PCR方法具有檢測時(shí)間短、靈敏度高、可重復(fù)性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。目前,許多CAR-T申報(bào)企業(yè)采用Q-PCR/PCR方法直接測定終產(chǎn)品中的VSV-G序列或psi-gag序列,作為快速放行方法。南京正揚(yáng)有復(fù)制型慢病毒檢測試劑盒的裝量是多少?
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)技術(shù)在生物制品質(zhì)量控制方面應(yīng)用非常普遍,如宿主細(xì)胞殘留DNA檢測,鼠源、禽源等外源病毒檢測,微生物快檢(支原體、分枝桿菌、細(xì)菌、真 菌等),復(fù)制型病毒檢測(RCL、RCR、rcAAV等)、質(zhì)粒拷貝數(shù)檢測及其它工藝雜質(zhì)檢測等。qPCR檢測結(jié)果以擴(kuò)增曲線圖呈現(xiàn),正常擴(kuò)增曲線為S型,分為基線期、指數(shù)擴(kuò)增期、線性擴(kuò)增期和平臺期;線形光滑、拐點(diǎn)清晰,基線平直或略微下降,無明顯上揚(yáng)。定量檢測實(shí)驗(yàn)中,對標(biāo)曲的要求主要從斜率(與擴(kuò)增效率相關(guān))和R2兩方面進(jìn)行考察,要求斜率滿足-3.8~-3.1(對應(yīng)擴(kuò)增效率為83.3%~110%),R2滿足高于0.99。重組腺相關(guān)病毒檢測方法有哪些?深圳RCL病毒檢測公司
復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測要求有哪些?蘇州PCR法病毒檢測試劑盒
南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的RCL基因拷貝數(shù)檢測試劑盒(RT-PCR熒光探針法)、RCR基因拷貝數(shù)檢測試劑盒(RT-PCR熒光探針法)、rcAAV-5/N檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)既適用于基于細(xì)胞培養(yǎng)法對復(fù)制型病毒的qPCR法的檢測,也適用于對無細(xì)胞基質(zhì)的病毒收獲液(上清液)等樣品的復(fù)制型病毒檢測。試劑盒進(jìn)行了多面的性能驗(yàn)證,靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好、符合法規(guī)要求。南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的RCL基因拷貝數(shù)檢測試劑盒(RT-PCR熒光探針法)、RCR基因拷貝數(shù)檢測試劑盒(RT-PCR熒光探針法)、rcAAV-5/N檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)既適用于基于細(xì)胞培養(yǎng)法對復(fù)制型病毒的qPCR法的檢測,也適用于對無細(xì)胞基質(zhì)的病毒收獲液(上清液)等樣品的復(fù)制型病毒檢測。試劑盒進(jìn)行了多面的性能驗(yàn)證,靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好、符合法規(guī)要求。蘇州PCR法病毒檢測試劑盒