美國(guó)FDA要求對(duì)于采用γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒載體和慢病毒載體的產(chǎn)品，需要在整個(gè)生產(chǎn)過(guò)程及不同階段進(jìn)行RCR復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒／RCL復(fù)制型慢病毒檢測(cè)，針對(duì)載體生產(chǎn)用主細(xì)胞庫(kù)、工作細(xì)胞庫(kù)、生產(chǎn)終末細(xì)胞、載體上清液及在體外培養(yǎng)超過(guò)4天的載體轉(zhuǎn)到細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)。針對(duì)慢病毒載體使用時(shí)RCL的檢測(cè)，除了金標(biāo)準(zhǔn)——指示細(xì)胞培養(yǎng)法，還需要選擇2種不同原理的快檢方法對(duì)其進(jìn)行補(bǔ)充檢測(cè)。RT-PCR法具備操作便捷快速、特異性好、靈敏度高、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，是RCR/RCL補(bǔ)充檢測(cè)的優(yōu) 選方法。南京正揚(yáng)的重組腺相關(guān)病毒檢測(cè)試劑盒的裝量是多少？rcAAV病毒檢測(cè)特點(diǎn)
復(fù)制型病毒/病毒載體回復(fù)突變（ReplicationCompetentVirus,RCV），可產(chǎn)生于病毒載體制造過(guò)程中的所有步驟當(dāng)中。并且，RCV感 染宿主細(xì)胞后能隨宿主細(xì)胞在培養(yǎng)液中增殖、擴(kuò)增對(duì)人體健康具有嚴(yán)重的隱患，是免疫細(xì)胞治 療類產(chǎn)品，如CAR-T產(chǎn)品的主要安全性風(fēng)險(xiǎn)之一。近年來(lái)，CAR-T細(xì)胞制備過(guò)程中，伴隨載體的不斷升級(jí)優(yōu)化，重組產(chǎn)生的復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒/慢病毒(ReplicationCompetentRetrovirus/Lentivirus,RCR/RCL)逐漸降低，但產(chǎn)生RCR/RCL的風(fēng)險(xiǎn)隱患至今仍不能完全排除。由2022年5月發(fā)布的《體外基因修飾系統(tǒng)藥學(xué)研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》指出RCR/RCL檢測(cè)作為安全性檢測(cè)在細(xì)胞藥物的研發(fā)和生產(chǎn)過(guò)程中至關(guān)重要，相關(guān)產(chǎn)品不得檢出RCR/RCL，可知病毒載體相關(guān)產(chǎn)品中，RCR/RCL病毒檢測(cè)至關(guān)重要。復(fù)制型腺相關(guān)病毒檢測(cè)優(yōu)缺點(diǎn)復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測(cè)適用性樣品有哪些？
RCL復(fù)制型慢病毒檢測(cè)的背景：CAR-T（chimericantigenreceptorT-cellimmunotherapy），即嵌合抗原受體T細(xì)胞免疫療法。它是一種醫(yī)治種瘤的新型精確靶向療法，能夠精確、高效，且有希望治好ai癥的免疫醫(yī)治方法。目前，主要有兩種病毒載體用于CAR-T細(xì)胞基因轉(zhuǎn)導(dǎo)：γ逆轉(zhuǎn)錄病毒載體和慢病毒載體。目前基因醫(yī)治產(chǎn)品所用慢病毒載體均是非復(fù)制型的，但在病毒包裝過(guò)程中，可能會(huì)由于同源或非同源重組等機(jī)制產(chǎn)生復(fù)制型慢病毒(RCL)。出于安全、有效、質(zhì)量可控的考慮，應(yīng)當(dāng)對(duì)該類病毒進(jìn)行檢測(cè)，以避免在人體內(nèi)無(wú)控地自我復(fù)制，造成傷害，防止發(fā)生臨床安全性隱患事件。
慢病毒載體是以人類免疫缺陷Ⅰ型病毒（humanimmunodeficiencyvirus，HIV-1）為基礎(chǔ)發(fā)展起來(lái)的基因醫(yī)治載體，屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒家族，又區(qū)別于一般的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，比逆轉(zhuǎn)錄病毒載體具有更強(qiáng)的感 染能力，具有容納外源性目的基因片段大、穩(wěn)定整合、持久表達(dá)、免疫反應(yīng)小等優(yōu)點(diǎn)，是常用的基因轉(zhuǎn)移載體。而載體作為基因醫(yī)治的工具，可能帶來(lái)插入突變、復(fù)制型病毒、外源因子污染等風(fēng)險(xiǎn)，同時(shí)其攜帶的遺傳物質(zhì)是CAR-T細(xì)胞的重要組成部分，是使T細(xì)胞具有強(qiáng)大的識(shí)別和殺傷腫瘤細(xì)胞活性的重要基礎(chǔ)，考慮到病毒載體技術(shù)的廣泛應(yīng)用，具有復(fù)制能力的慢病毒/逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測(cè)成為重要問(wèn)題，F(xiàn)DA及歐盟先后出臺(tái)相關(guān)文件，要求建立靈敏、可靠的復(fù)制能力的慢病毒/逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測(cè)方法。為什么要做復(fù)制型腺相關(guān)病毒檢測(cè)？
用qPCR法進(jìn)行rcAAV復(fù)制型腺相關(guān)病毒檢測(cè)時(shí)，出現(xiàn)擴(kuò)增曲線末尾起跳的原因可能是什么？①陰性質(zhì)控或無(wú)模板對(duì)照曲線末尾出現(xiàn)起跳情況，考慮環(huán)境存在污染所致，建議對(duì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境做好控制，如使用低吸附帶濾芯搶頭和低吸附ep管，保證實(shí)驗(yàn)分區(qū)（樣品處理區(qū)、試劑保存及配制區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)）、用DNA清除劑處理環(huán)境等。②待測(cè)樣品曲線末尾出現(xiàn)起跳情況，在確保陰性質(zhì)控或無(wú)模板對(duì)結(jié)果正常的情況下，可以進(jìn)行復(fù)測(cè)，復(fù)測(cè)結(jié)果一致，則考慮是樣品中待測(cè)物濃度較低所致。復(fù)制型慢病毒檢測(cè)適用性樣品有哪些？正揚(yáng)生物RCR病毒檢測(cè)
南京正揚(yáng)生物開(kāi)發(fā)的重組腺相關(guān)病毒檢測(cè)試劑盒的靈敏度是多少？rcAAV病毒檢測(cè)特點(diǎn)
CAR-T的生產(chǎn)中常用慢病毒載體將CAR基因高效地導(dǎo)入T細(xì)胞中。盡管慢病毒載體具有復(fù)制缺陷，但如果在慢病毒生產(chǎn)過(guò)程中發(fā)生重組可能有形成復(fù)制型慢病毒（RCL）或復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒（RCR）的潛在風(fēng)險(xiǎn)。根據(jù)蕞新發(fā)布的《體外基因修飾系統(tǒng)藥學(xué)研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》和《免疫細(xì)胞治 療產(chǎn)品藥學(xué)研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》,復(fù)制型病毒作為重要的安全性風(fēng)險(xiǎn)關(guān)注點(diǎn)，需評(píng)估制備和臨床使用的風(fēng)險(xiǎn)。因此使用慢病毒載體相關(guān)的細(xì)胞產(chǎn)品，RCL和RCR病毒檢測(cè)作為安全性檢測(cè)在細(xì)胞藥物的研發(fā)和生產(chǎn)過(guò)程中至關(guān)重要。rcAAV病毒檢測(cè)特點(diǎn)