宿主細(xì)胞殘留DNA是影響生物制品安全性的關(guān)鍵因素之一，它不僅會降低生物藥的有效性，還可能帶來傳染性或致瘤性等安全問題。因此建立合適的宿主細(xì)胞殘留DNA檢測方法有助于監(jiān)測生產(chǎn)工藝，確保生物制品的安全性和質(zhì)量。各國藥品監(jiān)督管理機(jī)構(gòu)對宿主細(xì)胞殘留DNA的殘留量有著嚴(yán)格的限度控制，因此都相繼出臺了有關(guān)生物制品中宿主細(xì)胞殘留DNA的指南。其中，定量PCR法是中國2019年國家藥典委員會確認(rèn)的外源性DNA殘留測定方法，也是新版USP中推薦生物制品中宿主殘留DNA的檢測標(biāo)準(zhǔn)方法。大腸桿菌宿主細(xì)胞殘留DNA檢測。南京正揚(yáng)生物質(zhì)粒殘留DNA檢測試劑盒
南京正揚(yáng)生科科技有限公司自主研發(fā)的CHO宿主細(xì)胞殘留DNA檢測試劑盒的優(yōu)點(diǎn)有哪些？①重復(fù)性好，同一樣品重復(fù)檢測20次，CV＜15%；②提取回收率好，尤其對于低濃度樣品；③操作簡便，無需自行配制試劑；④檢測時(shí)間短，從樣品提取純化到出結(jié)果只需2.5h；⑤適應(yīng)性強(qiáng)，針對不同機(jī)型，不同實(shí)驗(yàn)室條件，檢測結(jié)果穩(wěn)定；⑥可提供自動化服務(wù)，自動化完成樣品核酸提取純化；⑦貨期短，供應(yīng)快；⑧完善的售后服務(wù)；
生物制品殘留的宿主細(xì)胞DNA會帶來免疫原性、至瘤性和傳染性的風(fēng)險(xiǎn)，探針雜交法和熒光探針法已不能滿足產(chǎn)品質(zhì)量控制的要求，正逐步被發(fā)達(dá)國家藥典淘汰。南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的CHO宿主細(xì)胞殘留DNA檢測試劑盒采用Taqman探針熒光定量PCR原理，可以定量檢測生物制品樣品中殘留的CHO宿主細(xì)胞DNA。本檢測試劑盒可與南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的宿主細(xì)胞殘留DNA提取試劑盒搭配使用，對樣本中殘留的CHO細(xì)胞微量DNA進(jìn)行準(zhǔn)確定量分析。 深圳Vero細(xì)胞殘留DNA檢測優(yōu)缺點(diǎn)畢赤酵母宿主細(xì)胞殘留DNA檢測。
用qPCR法進(jìn)行宿主細(xì)胞殘留DNA檢測時(shí)，出現(xiàn)擴(kuò)增效率超出標(biāo)準(zhǔn)要求（低于83.3%或高于110%）的原因有哪些？①設(shè)計(jì)的引物探針不適用：重新分析靶標(biāo)序列進(jìn)行設(shè)計(jì)。②標(biāo)曲濃度設(shè)定太高，超出標(biāo)曲線性范圍：對范圍進(jìn)行驗(yàn)證，選取合適標(biāo)曲范圍。③人員操作問題，如稀釋錯(cuò)誤、制備過程震蕩時(shí)間過長等：人員上崗前應(yīng)接受多面培訓(xùn)并做到熟練操作，考核合格后方可上崗。④移液器未校準(zhǔn)或品質(zhì)問題導(dǎo)致量取不準(zhǔn)：定期對移液器進(jìn)行校準(zhǔn)并選擇好品質(zhì)移液器。
為什么要做宿主細(xì)胞殘留DNA檢測？近年來熱度驟增的生物制品藥物對諸多疾病療效斐然，在藥品市場中所占比重也是節(jié)節(jié)攀升。于是生物制品與之俱來的生物安全性問題被漸漸提上日程，其中宿主細(xì)胞殘留DNA由于可能會傳遞仲瘤或病毒相關(guān)基因，存在潛在的危險(xiǎn)性，各國藥品監(jiān)督管理機(jī)構(gòu)對其殘留量有著嚴(yán)格的限度控制。同時(shí)，各國藥典也陸續(xù)提供數(shù)種關(guān)于宿主細(xì)胞殘留DNA檢測經(jīng)典的方法，目前以實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)方法為優(yōu)，因其專一性強(qiáng)、靈敏度高、快速且可實(shí)現(xiàn)高通量。宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的重要性：眾所周知，通過細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品時(shí)，需要在下游工藝中去除所有的源于宿主細(xì)胞殘留的雜質(zhì)，如胞質(zhì)蛋白、基因及潛在病毒等。其中宿主細(xì)胞DNA殘留問題受到了制藥同行很大的關(guān)注。究其原因，在于生物制品中即便是微量地來源于宿主細(xì)胞的外源性DNA都有傳遞仲瘤或病毒相關(guān)基因的可能性。如果生物制品在攜帶殘留DNA的情況下注射進(jìn)入患者的體內(nèi)，如果細(xì)胞DNA為致ai基因，具有致瘤性，在患者體內(nèi)生成仲瘤;如果為病毒基因，不排除該基因擴(kuò)增并組裝的可能，威脅患者的健康?？傊拗骷?xì)胞殘留DNA的潛在危害不容小覷，通過去除宿主細(xì)胞DNA預(yù)防可能出現(xiàn)的不利后果是極為必要的。如今。宿主細(xì)胞殘留DNA檢測--疫苗安全生產(chǎn)的重要指標(biāo)。
用qPCR法進(jìn)行宿主細(xì)胞殘留DNA檢測時(shí)，出現(xiàn)擴(kuò)增效率超出標(biāo)準(zhǔn)要求（低于83.3%或高于110%）的原因有哪些？①設(shè)計(jì)的引物探針不適用：重新分析靶標(biāo)序列進(jìn)行設(shè)計(jì)。②標(biāo)曲濃度設(shè)定太高，超出標(biāo)曲線性范圍：對范圍進(jìn)行驗(yàn)證，選取合適標(biāo)曲范圍。③人員操作問題，如稀釋錯(cuò)誤、制備過程震蕩時(shí)間過長等：人員上崗前應(yīng)接受培訓(xùn)并做到熟練操作，考核合格后方可上崗。④移液器未校準(zhǔn)或品質(zhì)問題導(dǎo)致量取不準(zhǔn)：定期對移液器進(jìn)行校準(zhǔn)并選擇好品質(zhì)移液器。
用qPCR法進(jìn)行宿主細(xì)胞殘留DNA檢測時(shí)，出現(xiàn)擴(kuò)增曲線異常的可能原因是什么？①軟件參數(shù)設(shè)置不當(dāng)可能引起標(biāo)曲參數(shù)或檢測結(jié)果異常。如擴(kuò)增曲線信號蕞早出現(xiàn)在14個(gè)循環(huán)左右，基線卻設(shè)置為3-15，導(dǎo)致儀器將14個(gè)循環(huán)出現(xiàn)的熒光信號默認(rèn)為基線部分，出現(xiàn)結(jié)果異常。建議將BaselineEnd設(shè)置為擴(kuò)增信號出現(xiàn)的前一個(gè)循環(huán)，或由軟件自動設(shè)置。②擴(kuò)增曲線飄起：該現(xiàn)象通常出現(xiàn)于高濃度模板情況下，擴(kuò)增曲線Ct值在10以內(nèi)的樣品。針對此類樣品檢測，設(shè)置標(biāo)曲時(shí)建議盡量控制標(biāo)曲蕞高濃度Ct值控制在10以上。檢測樣品時(shí)建議對樣品進(jìn)行稀釋后再測試。 Vero宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的質(zhì)量控制。泰州E1A殘留DNA檢測常見問題
CHO宿主細(xì)胞殘留DNA檢測試劑盒。南京正揚(yáng)生物質(zhì)粒殘留DNA檢測試劑盒
用qPCR進(jìn)行宿主細(xì)胞殘留DNA檢測時(shí)，哪些因素會對檢測結(jié)果準(zhǔn)確性和方法靈敏度存在較大影響？參考品DNA量值溯源及質(zhì)量保證：參考品DNA的量值準(zhǔn)確與否，直接關(guān)系到樣品檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，因此需制定完善的參考品量值溯源程序，確保結(jié)果準(zhǔn)確可靠。參考品DNA的質(zhì)量要求可從條帶大小、完整性、純度、濃度等方面做多面評估，細(xì)胞來源的參考品應(yīng)考察支原體污染，質(zhì)粒參考品應(yīng)考察質(zhì)粒宿主E.coli基因組DNA殘留情況等，盡量排除干擾確保結(jié)果準(zhǔn)確可靠。南京正揚(yáng)生物質(zhì)粒殘留DNA檢測試劑盒