單細胞測序結(jié)果動輒上百G數(shù)據(jù)量,龐大的數(shù)據(jù)對于分析平臺和分析能力有著很高的要求,首先針對下機數(shù)據(jù)的質(zhì)控環(huán)節(jié):單細胞測序產(chǎn)生數(shù)億的結(jié)果序列,不可避免的會出現(xiàn)低質(zhì)量的測序結(jié)果,存在各種情況的序列污染。因此序列過濾及質(zhì)量評估就會變得極為重要。序列質(zhì)量主要通過測序質(zhì)量值Q20/Q30的占比來表征,即堿基測序結(jié)果的錯誤率在1%/0.1%以下的比例。理想的測序結(jié)果reads的堿基質(zhì)量均高于30。保證數(shù)據(jù)獲得后第一步的處理結(jié)果的準確性,為后續(xù)細胞類型鑒定準確和功能分析打下堅實基礎(chǔ)。未來,單細胞多組學測序技術(shù)的策略會繼續(xù)向轉(zhuǎn)錄組結(jié)合其他多個組學的三組學甚至四組學方向發(fā)展。single cell 單細胞多組學數(shù)據(jù)分析
其實,空間轉(zhuǎn)錄組的概念早就已經(jīng)存在了,目前已經(jīng)發(fā)表的空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)有Slide-seq,LCM-seq,seqFISH,MERFISH,Liversinglecellzonation,Geo-seqandTomo-seq。但是這些方法存在操作復雜、檢測精度不準確、基因和細胞檢測量的限制等問題。10xGenomics公司升級spatialTranscriptomic后推出的Visium空間基因表達解決方案是一款商業(yè)化的高精度、高通量空間轉(zhuǎn)錄組測序方案。烈冰科技自2020年起,國內(nèi)率先搭建空間轉(zhuǎn)錄組測序服務(wù)平臺,聯(lián)合上線單細胞核轉(zhuǎn)錄組測序、AbSeq、單細胞TCR-Seq、單細胞ATAC-Seq(ARCHR測序)、空間轉(zhuǎn)錄組測序產(chǎn)品結(jié)合scRNA-Seq服務(wù),多組學聯(lián)合助力科研人員探索時空等多維度、多角度的動態(tài)變化的生物學信息。烈冰生物為您提供貼心的單細胞研究完整解決方案!蘇州single cell RNA單細胞多組學數(shù)據(jù)分析單細胞多組學突破了以往單細胞檢測的單一性,可更多樣化。
冰凍切片的空間轉(zhuǎn)錄組測序在RNA捕獲、文庫構(gòu)建方面,需要將組織切片貼合在帶有mRNA結(jié)合捕獲探針的載玻片上,通過甲醛固定、H&E染色得到組織切片的形態(tài)結(jié)構(gòu)。再進行透化處理,使細胞中的mRNA釋放,并結(jié)合到芯片相鄰的捕獲探針上。將捕獲的mRNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA并構(gòu)建測序文庫進行上機測序,從而獲取基因表達信息。總體來說,空間轉(zhuǎn)錄組的實驗流程包括:組織凍存-OCT包埋-冷凍切片-固定染色-組織透化-cDNA合成及建庫-上機測序,而需要客戶進行樣本準備的步驟相對簡單:組織凍存與OCT包埋。
單細胞測序技術(shù)的不斷發(fā)展解決了以往群體細胞組學分析面臨的兩個瓶頸:一是大量細胞的混合測序會掩蓋細胞間的異質(zhì)性;二是傳統(tǒng)的測序技術(shù)需要大量的細胞作為起始,細胞數(shù)目稀有的樣品則難以研究.利用單細胞測序方法不僅能夠揭示組織中的細胞類型和稀有亞群、細胞狀態(tài)和命運的變化,還可以研究細胞數(shù)稀有的珍貴樣品,從而幫助人們理解發(fā)育、衰老和疾病發(fā)展的機制。隨著單細胞轉(zhuǎn)錄組、基因組、表觀遺傳組、蛋白組等各組學測序技術(shù)的快速發(fā)展,研究者開始將它們相互組合,使得單個細胞或同類細胞的多個組學數(shù)據(jù)能夠聯(lián)合分析.因此,利用單細胞多組學技術(shù)能夠更有效地研究細胞在特定時空狀態(tài)下各組學間的復雜聯(lián)系,從而揭示細胞狀態(tài)和命運調(diào)控的分子機制。分子檢測型單細胞多組學測序技術(shù)中也有一些集 中于探究單細胞內(nèi)表觀遺傳組各層面的變化及關(guān)聯(lián)。
烈冰生物生信分析團隊緊追國際前沿、整合添加多項國際期刊認可的空轉(zhuǎn)分析工具,構(gòu)建一套完整的數(shù)據(jù)分析流程;精心研發(fā)空轉(zhuǎn)結(jié)果瀏覽器,可同步展示空間轉(zhuǎn)錄組與單細胞測序分析結(jié)果,詳細深入地解析空間轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)。完成從Rawdata(原始數(shù)據(jù))到Spot-Gene的具有定位信息的表達矩陣的過程后,就進入了空轉(zhuǎn)的第二步,去進行Spot的Cluster的過程,熟悉單細胞測序的研究者知道,Cluster在單細胞測序中往往表示為細胞的類型,也就是說能聚在一起采用算法分為一個群體細胞是一個Celltype(當然分情況也會有不同)。而在空轉(zhuǎn)中,也正是由于前面提到了細胞的非單一性,導致了這里的分群并不是單純的同一細胞類型,而應(yīng)該認為是具有相同細胞組成的點陣區(qū)域,或者說是近似的組織結(jié)構(gòu)區(qū)域。單細胞測序是高通量測序下的又一重大技術(shù)突破。青島BD Rhapsody單細胞多組學服務(wù)機構(gòu)
多組學技術(shù)結(jié)合了不同的生物數(shù)據(jù)集,如基因組學、轉(zhuǎn)錄組學和蛋白質(zhì)組學。single cell 單細胞多組學數(shù)據(jù)分析
多樣本數(shù)據(jù)合并:FractionofReadsKept:合并樣本時,各樣本根據(jù)MappedBarcodedReadsperCell數(shù)量計算出來的數(shù)據(jù)利用率。如果各樣本間該參數(shù)值相差很大,需要進行Downsample處理,以數(shù)據(jù)量少的樣本為基準將不同樣本中細胞測序深度標化到同一水平,從而避免因測序深度差異導致的基因檢測數(shù)量、基因表達水平的差異。烈冰科技自主研發(fā)的單細胞云平臺致力于幫助每一位客戶定制化分析數(shù)據(jù),深入解讀數(shù)據(jù)分析結(jié)果,深入挖掘其背后的生物學意義;從操作便捷、結(jié)果可視化、分析可追溯、系統(tǒng)穩(wěn)定等方面助力單細胞研究,加速科研進程!single cell 單細胞多組學數(shù)據(jù)分析
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