單細胞測序?qū)嶒炘贅颖炯毎蠙C分選簽，需要對細胞數(shù)量、細胞活性進準判斷，這對Single Cell分選標記、建庫、下機數(shù)據(jù)的質(zhì)量都具有著決定性的作用。如若細胞計數(shù)偏高，將會影響建庫的成功率；計數(shù)偏低，則會提高雙細胞的比例；而細胞活率過低，就會使測序數(shù)據(jù)的利用率大打折扣，因此把好單細胞懸液質(zhì)量這一關(guān)尤為重要。而在鋪板過程中，由于不同操作人員手法具有不可避免的差異，不同的液體流速將直接影響單細胞的入孔效果。因此烈冰生物BD Rhapsody單細胞分選平臺配套了專門定制的電動移液器，其具有Prime Treat、Cell Load、Bead Load、Wash、Lysis、Retrieval多種操作模式，來對應(yīng)各種不同的操作。通過已經(jīng)設(shè)定的程序來控制液體的流速，大幅度降低人為操作習慣帶來的差異，保證實驗操作的一致性。BD 單細胞捕獲平臺搭配BD Scanner，全流程實時質(zhì)控，項目質(zhì)量盡在掌握。廣東BD VDJ單細胞測序
對于單細胞測序而言，常常需要先構(gòu)建細胞圖譜，在此基礎(chǔ)上再開展后續(xù)各項分析，并且數(shù)據(jù)分析時以細胞聚類（cell cluster）為討論對象，而不是像常規(guī)Bulk測序一樣以組別為分析對象，因此單細胞測序項目對樣本入組要求沒有Bulk測序那樣嚴格，但是單細胞測序，特別是目的為圖譜研究時，需要通過提高樣本復雜度（增加樣本數(shù)），盡可能的構(gòu)建某一疾病類型、群體細胞圖譜信息。因此，單細胞測序?qū)嶒炘O(shè)計時首先需要保證生物學重復，不同樣本來源的樣本建議單獨進行細胞解離和捕獲、建庫、測序，以保證捕獲到足夠的細胞數(shù)，單個樣本分別捕獲細胞時，后續(xù)分析除了整體分析以外，還可以做單樣本分析，保證分析的完備準確性。蘇州BD VDJ單細胞測序烈冰測序服務(wù)已助力300余篇國際期刊研究文章發(fā)表。
您的珍貴樣本，還可以放心依賴烈冰生物BD Rhapsody單細胞捕獲系統(tǒng)，BD RhapsodyTM單細胞捕獲系統(tǒng)采用微孔技術(shù)，對細胞的捕獲沒有偏好性，實現(xiàn)高達80%的微孔板捕獲率，由于單個微孔板中容納了22萬+個微孔，而現(xiàn)階段單細胞測序?qū)嶒灱夹g(shù)通常要求單個樣本捕獲3000-5000，至高達10000個細胞，即可滿足科研探索需求，因此這種“泊松分布”的原理類似于上樣細胞的無限稀釋過程，但22萬+微孔的存在，也對大體量細胞數(shù)目的科學研究有很好的包容性，細胞通量分為可擴展至100-40000個細胞的捕獲（單個微孔板），滿足您的多重需求。
什么時候要用到去死細胞的操作呢？跟進烈冰生物多年單細胞測序服務(wù)經(jīng)驗來看，當細胞懸液進行質(zhì)量和活性檢測后，考慮對細胞活性在50%-70%的懸液進行去除死細胞的操作。而太低活性的懸液（小于30%），懸液中細胞大量死亡，可能已經(jīng)丟失了原組織內(nèi)的細胞比例和狀態(tài)，失真嚴重，建議重新收集樣本進行新的實驗，保證數(shù)據(jù)的高質(zhì)量和實驗結(jié)果的準確性。但需要注意到，去除死細胞的操作會損失一定的細胞數(shù)量，因此希望您在提供樣本時，盡可能提供足量的細胞，以備實驗過程中可能存在的細胞死亡的問題，BD Rhapsody單細胞捕獲平臺對樣本起始細胞量的要求較低，一般提供10萬個細胞以上均可滿足需求，特殊樣本可詳細咨詢烈冰生物。烈冰斥巨資引進Novaseq6000，開啟更大通量測序新紀元。
針對單細胞測序的細胞上樣數(shù)，為什么不建議捕獲到的細胞數(shù)量越高越好？一味地追求高數(shù)量的細胞捕獲可能會存在一些問題。例如在上機細胞懸液濃度固定時，如果目標細胞捕獲數(shù)增加到8000甚至10000，上樣細胞懸液體積勢必增加，在細胞懸液質(zhì)量不是很理想（細胞活性<90%、碎片率>5%、結(jié)團率均>5%）的情況下，引入的背景信號會增加，分析結(jié)果不理想的直接體現(xiàn)包括：cell、non-cell無法有效區(qū)分和Fraction reads in cells偏低。當cell和non-cell無法有效區(qū)分時，會使得數(shù)據(jù)出現(xiàn)假陽性和假陰性結(jié)果！當目標細胞捕獲數(shù)很大時，多細胞率會增加，數(shù)據(jù)分析時，此部分“cell”表現(xiàn)為基因檢測數(shù)和UMI檢測數(shù)是正常cell的N倍（N是一個GEM包裹的細胞數(shù)），導致所有細胞的統(tǒng)計數(shù)據(jù)（單個細胞基因檢測中位數(shù)、單個細胞UMI檢測中位數(shù)）虛高。此部分“cell”雖然可以通過設(shè)置數(shù)據(jù)分析閾值進行過濾，但是容易會有此類數(shù)據(jù)的殘留和正常高基因檢測細胞的人為去除！十二年測序經(jīng)驗，烈冰生物單細胞多組學領(lǐng)域的佼佼者。陜西BD VDJ單細胞轉(zhuǎn)錄組測序
單細胞測序是高通量測序下的又一重大技術(shù)突破。廣東BD VDJ單細胞測序
據(jù)不完全統(tǒng)計，截至2022年6月，烈冰生物助力發(fā)表單細胞文章近40篇，從平臺應(yīng)用比例來看，應(yīng)用10X Genomics和BD Rhapsody兩大平臺發(fā)文比例各占50%左右，研究類型涵蓋疾病發(fā)展，靶點探索，免疫研究，神經(jīng)發(fā)育，干細胞分化，植物發(fā)育，退行病變，糖尿病，COVID-19等等研究；從發(fā)表期刊水平來看，烈冰生物聯(lián)合發(fā)表的單細胞文章，CNS一區(qū)期刊占比在30%以上，其中包括immunity三篇，Nature子刊3篇（Nature cell biology,Nature Plants，Nature communication）,風濕類領(lǐng)域ARD期刊1篇，CUT 1篇，Advanced Science多篇，IF大于10分以上文章占比高達68.5%，烈冰專屬單細胞測序服務(wù)團隊，將與您攜手譜寫下一篇“高分”新文章。廣東BD VDJ單細胞測序
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