所謂的高通量測(cè)序技術(shù)，又名大規(guī)模平行測(cè)序，是將 DNA（或者 cDNA）隨機(jī)片段化、加接頭，制備測(cè)序文庫(kù)，通過(guò)對(duì)文庫(kù)中數(shù)以萬(wàn)計(jì)的克隆(colony)進(jìn)行延伸反應(yīng)，檢測(cè)對(duì)應(yīng)的信號(hào)，獲取序列信息。與傳統(tǒng)測(cè)序法（Sanger法等）相比，高通量測(cè)序技術(shù)在處理大規(guī)模樣品時(shí)具有明顯的優(yōu)勢(shì)，又快（兩天）又多（數(shù)百萬(wàn)克?。?，成為目前組學(xué)研究的主要技術(shù)。單細(xì)胞測(cè)序是一個(gè)系統(tǒng)的工程，開(kāi)展項(xiàng)目前您可能會(huì)先評(píng)估它提供的見(jiàn)解是否與您的研究問(wèn)題相匹配，如果匹配，實(shí)驗(yàn)過(guò)程如何規(guī)劃，實(shí)驗(yàn)平臺(tái)如何選擇，樣本如何制備，數(shù)據(jù)如何分析等等，而在這一切開(kāi)始之前，我們的服務(wù)就已經(jīng)開(kāi)始了，從銷(xiāo)售到實(shí)驗(yàn)到專(zhuān)業(yè)技術(shù)支持，我們開(kāi)通全線對(duì)接渠道，幫助您快速定位項(xiàng)目訴求，提供從實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)到文章發(fā)表的全流程，我們始終是您貼心的科學(xué)合作伙伴。截至2021年10月，烈冰助力發(fā)表單細(xì)胞測(cè)序文章近20篇。吉林單細(xì)胞測(cè)序服務(wù)
多樣本數(shù)據(jù)合并：Fraction of Reads Kept：合并樣本時(shí)，各樣本根據(jù)Mapped Barcoded Reads per Cell數(shù)量計(jì)算出來(lái)的數(shù)據(jù)利用率。如果各樣本間該參數(shù)值相差很大，需要進(jìn)行Downsample處理，以數(shù)據(jù)量少的樣本為基準(zhǔn)將不同樣本中細(xì)胞測(cè)序深度標(biāo)化到同一水平，從而避免因測(cè)序深度差異導(dǎo)致的基因檢測(cè)數(shù)量、基因表達(dá)水平的差異。烈冰科技自主研發(fā)的單細(xì)胞云平臺(tái)致力于幫助每一位客戶(hù)定制化分析數(shù)據(jù)，深度解讀數(shù)據(jù)分析結(jié)果，深入挖掘其背后的生物學(xué)意義；從操作便捷、結(jié)果可視化、分析可追溯、系統(tǒng)穩(wěn)定等方面助力單細(xì)胞研究，加速科研進(jìn)程！南昌單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)支持單細(xì)胞科聯(lián)合空間轉(zhuǎn)錄組，展示組織切片中不同區(qū)域的基因表達(dá)情況，揭示精細(xì)病理區(qū)域中“喚醒”的信號(hào)通路。
單細(xì)胞測(cè)序?qū)嶒?yàn)再樣本細(xì)胞上機(jī)分選簽，需要對(duì)細(xì)胞數(shù)量、細(xì)胞活性進(jìn)準(zhǔn)判斷，這對(duì)Single Cell分選標(biāo)記、建庫(kù)、下機(jī)數(shù)據(jù)的質(zhì)量都具有著決定性的作用。如若細(xì)胞計(jì)數(shù)偏高，將會(huì)影響建庫(kù)的成功率；計(jì)數(shù)偏低，則會(huì)提高雙細(xì)胞的比例；而細(xì)胞活率過(guò)低，就會(huì)使測(cè)序數(shù)據(jù)的利用率大打折扣，因此把好單細(xì)胞懸液質(zhì)量這一關(guān)尤為重要。而在鋪板過(guò)程中，由于不同操作人員手法具有不可避免的差異，不同的液體流速將直接影響單細(xì)胞的入孔效果。因此烈冰生物BD Rhapsody單細(xì)胞分選平臺(tái)配套了專(zhuān)門(mén)定制的電動(dòng)移液器，其具有Prime Treat、Cell Load、Bead Load、Wash、Lysis、Retrieval多種操作模式，來(lái)對(duì)應(yīng)各種不同的操作。通過(guò)已經(jīng)設(shè)定的程序來(lái)控制液體的流速，大幅度降低人為操作習(xí)慣帶來(lái)的差異，保證實(shí)驗(yàn)操作的一致性。
二代測(cè)序技術(shù)在測(cè)序方法上取得了重大突破，基于“邊合成邊測(cè)序”（sequencing by synthesis）和大規(guī)模平行測(cè)序技術(shù)（massive parallel analysis,MPS），使測(cè)序通量和讀取速度得到極大提升，例如Illumina Solexa測(cè)序儀。Illumina的測(cè)序原理可以簡(jiǎn)化為四步：樣品文庫(kù)構(gòu)建、簇生成、測(cè)序和數(shù)據(jù)分析。由于讀長(zhǎng)限制，樣品DNA或由RNA逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA需要被打斷成300-500bp的片段，并在3'和5'端接上3種序列：1）Index，用于區(qū)分樣品來(lái)源；2）Adapter，用于結(jié)合測(cè)序通道上的位點(diǎn)；3）Primer binding site，用于結(jié)合PCR引物啟動(dòng)擴(kuò)增反應(yīng)。經(jīng)驗(yàn)豐富的實(shí)驗(yàn)團(tuán)隊(duì)，為獲得示組織內(nèi)真實(shí)表達(dá)水平的高質(zhì)量冷凍切片提供硬件和技術(shù)保障。
一味的追求高細(xì)胞數(shù)量的捕獲，小心得不償失，原因在這：?jiǎn)渭?xì)胞測(cè)序所有的分析都是基于細(xì)胞聚類(lèi)進(jìn)行，而細(xì)胞聚類(lèi)是在區(qū)分cell和non-cell后，獲得細(xì)胞基因表達(dá)譜，通過(guò)降維（pca），無(wú)監(jiān)督聚類(lèi)以及可視化（t-SNE）得到的。進(jìn)行細(xì)胞聚類(lèi)時(shí)需要考慮到每個(gè)細(xì)胞的基因表達(dá)模式，因此即使是相同的數(shù)據(jù)，在剔除幾個(gè)細(xì)胞的情況下，前后獲得的聚類(lèi)圖也會(huì)出現(xiàn)明顯不同。而當(dāng)細(xì)胞捕獲數(shù)過(guò)多時(shí)，無(wú)論是假陰性和假陽(yáng)性數(shù)據(jù)還是多細(xì)胞數(shù)據(jù)，都會(huì)對(duì)正常細(xì)胞聚類(lèi)產(chǎn)生影響，造成聚類(lèi)結(jié)果失真。這也是很多文章，特別是很多高分文章，為什么單個(gè)樣本捕獲細(xì)胞數(shù)在2000-3000的原因了。烈冰建議單個(gè)樣本捕獲細(xì)胞數(shù)在3000-5000個(gè)時(shí)，數(shù)據(jù)量在100G左右時(shí)，可以滿足分析和文章發(fā)表的多重需求。單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)提供了單個(gè)細(xì)胞水平下的科學(xué)研究視角。蘇州10X單細(xì)胞測(cè)序商業(yè)化服務(wù)
從樣本處理到終端數(shù)據(jù)分析，只要您需要，烈冰提供全流程的無(wú)憂服務(wù)。吉林單細(xì)胞測(cè)序服務(wù)
單細(xì)胞RNA-seq、RNA-seq和逆轉(zhuǎn)錄qPCR（RT-qPCR）都采用一個(gè)共同過(guò)程，即分離RNA并將其轉(zhuǎn)化為cDNA進(jìn)行分析。不過(guò)，每種分析在開(kāi)展方式和獲得的數(shù)據(jù)上有所不同。RNA-seq和RT-qPCR都是先從大量細(xì)胞中分離RNA，然后將其轉(zhuǎn)化為cDNA。RNA-seq是使用cDNA來(lái)構(gòu)建新一代測(cè)序文庫(kù)，從而測(cè)定整個(gè)轉(zhuǎn)錄組的基因表達(dá)。RT-qPCR則是從cDNA中擴(kuò)增特定靶點(diǎn)，并通過(guò)熒光測(cè)定表達(dá)水平。RT-qPCR限于已知靶點(diǎn)，而RNA-seq可實(shí)現(xiàn)無(wú)偏倚的全轉(zhuǎn)錄組基因表達(dá)分析。然而，這兩者只能提供細(xì)胞群體內(nèi)基因表達(dá)的平均情況。單細(xì)胞RNA-seq則在分離RNA之前將單細(xì)胞分離到微孔或單個(gè)微反應(yīng)容器中。然后用細(xì)胞特異性的條形碼標(biāo)記RNA，確保來(lái)自每個(gè)細(xì)胞的cDNA可以追溯到起源細(xì)胞。與RNA-seq相似，帶有條形碼的cDNA也被用于構(gòu)建新一代測(cè)序文庫(kù)，從而能夠?qū)γ總€(gè)細(xì)胞的整個(gè)轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行基因表達(dá)測(cè)定。吉林單細(xì)胞測(cè)序服務(wù)
上海烈冰生物醫(yī)藥科技有限公司致力于醫(yī)藥健康，以科技創(chuàng)新實(shí)現(xiàn)***管理的追求。烈冰生物作為生物科技、醫(yī)藥科技、信息科技、計(jì)算機(jī)科技領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開(kāi)發(fā)、技術(shù)服務(wù)、技術(shù)轉(zhuǎn)讓、技術(shù)咨詢(xún)，市場(chǎng)營(yíng)銷(xiāo)策劃，市場(chǎng)信息咨詢(xún)與調(diào)查（不得從事社會(huì)調(diào)查、社會(huì)調(diào)研、民意調(diào)查、民意測(cè)驗(yàn)），從事貨物及技術(shù)的進(jìn)出口業(yè)務(wù)，計(jì)算機(jī)、軟件及耗材（除專(zhuān)控），軟件開(kāi)發(fā)【依法須經(jīng)批準(zhǔn)的項(xiàng)目，經(jīng)相關(guān)部門(mén)批準(zhǔn)后方可開(kāi)展經(jīng)營(yíng)活動(dòng)】的企業(yè)之一，為客戶(hù)提供良好的單細(xì)胞測(cè)序，生物大數(shù)據(jù)云分析平臺(tái)，空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序。烈冰生物致力于把技術(shù)上的創(chuàng)新展現(xiàn)成對(duì)用戶(hù)產(chǎn)品上的貼心，為用戶(hù)帶來(lái)良好體驗(yàn)。烈冰生物始終關(guān)注醫(yī)藥健康行業(yè)。滿足市場(chǎng)需求，提高產(chǎn)品價(jià)值，是我們前行的力量。