北京高通量測序單細胞測序技術支持

來源: 發(fā)布時間:2022-06-16

基于10X Geomics 動態(tài)微流控技術,利用Tn5轉座酶酶切開放染色質,形成短片段,單細胞ATAC測序在表觀基因組學水平上,揭示單細胞染色質的可及性問題,區(qū)分細胞異質性,獲得開放染色質的位置、轉錄因子的結合位點、核小體的調控區(qū)域和染色質狀態(tài)等信息,是單細胞表觀遺傳學的重要突破:分析每個細胞數(shù)千個獨特的染色質開放區(qū)域,識別細胞類型和細胞狀態(tài);識別重要的轉錄因子,進行譜系和發(fā)育追蹤;探究驅動細胞類型和狀態(tài)之間基因表達差異的非編碼序列;探究細胞類型特異性和基因調控網(wǎng)絡特征等。是當前重要的多組學研究基因表達和表觀遺傳學的手段。十二年測序經(jīng)驗,烈冰生物單細胞多組學領域的佼佼者。北京高通量測序單細胞測序技術支持

單細胞轉錄組測序是在單細胞水平上高通量測序分析基因表達譜的技術,突破傳統(tǒng)高通量測序的局限性,組織解離后,單個樣本一次上機能捕獲500-20000個細胞, 基于每個細胞分別建庫測序,獲得單個細胞的基因結構和基因表達狀態(tài),并鑒定細胞的類型,可以在不同樣本間從細胞類型的組成和豐度角度進行比較,反映細胞間的異質性。而2021年橫空出世的10X Genomics Chromium X平臺實現(xiàn)了單塊chip上的百萬級別通量的細胞捕獲,系統(tǒng)實現(xiàn)16個通道同時運行,每個通道可捕獲2000-20000個細胞(不混樣),并支持原Chromium Controller體統(tǒng)外的多種細胞捕獲百萬級別通量實驗,可準確鑒別稀有細胞類型和適配大規(guī)模單細胞研究。合肥單細胞測序數(shù)據(jù)分析高通量測序技術是對傳統(tǒng)測序一次顛覆性的改變,一次對幾十萬到幾百萬條核酸序列進行測定。

作為單細胞測序的一個重要里程碑,10x genomic公司于2016年2月推出10x Chromium Single Cell Gene Expression Solution,此平臺整合了儀器、試劑盒和信息學軟件,能精確對接illumina測序儀,因此可實現(xiàn)大量大細胞的快速高效標記、測序和分析,獲得單細胞水平的基因表達譜和差異情況,并通過對復雜細胞群體進行深入細致分析,繪制大規(guī)模單細胞表達圖譜。 以量化細胞內的群體異質性,并逐個鑒定細胞類型、細胞狀態(tài)和動態(tài)細胞躍遷。除了有望鑒定新的細胞亞型和稀有細胞群體,單細胞技術還能更好地了解轉錄動態(tài)和基因調控關系。

科技的發(fā)展讓單細胞測序已經(jīng)應用于疾病發(fā)展過程中的關鍵過程和事件,如前病變向惡性的轉化、惡性向轉移性的發(fā)展,以及對多種用藥的反應。單細胞測序技術作為一個需要將組織解離成為單細胞懸液,或者是采用細胞核捕獲的策略捕獲單細胞核,進而對于每一個單細胞或者細胞核進行測序得到結果的技術,其空間定位信息是丟失的。這就衍生出了一個問題就是如果單細胞A與B并不出現(xiàn)在一個組織區(qū)域中他們會互相影響或者轉化么?免疫研究中,兩個具有非常強的PDL1-PD1的配對關系的細胞在組織切片上風馬牛不相及,這樣PDL1-PD1的關系會生效么?助力探索生命時空多維度的動態(tài)變化的生物學信息;助力醫(yī)療健康時代!

一味的追求高細胞數(shù)量的捕獲,小心得不償失,原因在這:單細胞測序所有的分析都是基于細胞聚類進行,而細胞聚類是在區(qū)分cell和non-cell后,獲得細胞基因表達譜,通過降維(pca),無監(jiān)督聚類以及可視化(t-SNE)得到的。進行細胞聚類時需要考慮到每個細胞的基因表達模式,因此即使是相同的數(shù)據(jù),在剔除幾個細胞的情況下,前后獲得的聚類圖也會出現(xiàn)明顯不同。而當細胞捕獲數(shù)過多時,無論是假陰性和假陽性數(shù)據(jù)還是多細胞數(shù)據(jù),都會對正常細胞聚類產(chǎn)生影響,造成聚類結果失真。這也是很多文章,特別是很多高分文章,為什么單個樣本捕獲細胞數(shù)在2000-3000的原因了。烈冰建議單個樣本捕獲細胞數(shù)在3000-5000個時,數(shù)據(jù)量在100G左右時,可以滿足分析和文章發(fā)表的多重需求。深度的單細胞測序數(shù)據(jù)解讀助力醫(yī)療健康大時代。廣州10X Chromium X單細胞測序數(shù)據(jù)分析培訓班

豐富的測序和數(shù)據(jù)分析經(jīng)驗,烈冰配套全程個性化、定制化地數(shù)據(jù)分析服務。北京高通量測序單細胞測序技術支持

10X Genomics 是一種基于 drop 的微流控技術,液體在配套芯片中的微管道中流動,因此細胞直徑會受到芯片中微管道直徑的限制,微流體通道的直徑約為 50 ~ 60 um,因此捕獲細胞的直徑不能超過 40um。當細胞直徑過大時,容易出現(xiàn)管道堵塞,造成GEM生成失敗,對于神經(jīng)科學研究和心血管疾病研究的老師而言,準備采用單細胞技術用于課題研究的時候,往往會遇到一個尷尬的問題,就是目標細胞,例如神經(jīng)元細胞、成熟心肌細胞由于體積過大,不適用于 10X 單細胞技術。其中神經(jīng)元細胞的直徑很大,直接超過了芯片中管道的直徑,雖然心肌細胞直徑低于 50um,但是成熟心肌細胞的長度很長,有可能堵塞通道造成實驗失敗,這也是為什么現(xiàn)在很多已發(fā)表的心臟單細胞文章,主要研究方向是心臟發(fā)育的原因了,主要還是因為未發(fā)育成熟的心肌細胞比較小,不會出現(xiàn)堵塞管道的風險。因此可以考慮組織解離后過 40um 濾網(wǎng),過濾掉大細胞,避免出現(xiàn)管道堵塞、實驗失敗的風險。此種方案的缺點是大細胞被過濾掉,丟失相關細胞數(shù)據(jù);另外組織解離獲得高質量細胞懸液以后,繼續(xù)做細胞裂解抽細胞核,開展細胞核測序。具體可訪問烈冰官網(wǎng)給我們留言,烈小冰將安排專業(yè)技術為您詳細解答。北京高通量測序單細胞測序技術支持

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