核酸提取，是分子生物學(xué)中較常見的基本操作，一般分為DNA提取與RNA提取，提取核酸的質(zhì)量直接影響后續(xù)的檢測工作，暫對常見的問題進(jìn)行了一個(gè)總結(jié)。DNA提?。?.A260/280比值較低？或者A260/280比值較高？用水作為洗脫液比較偏低，或者蛋白質(zhì)殘留，但如果操作過程中使用了苯酚，則更可能是苯酚殘留。而比較高可能是大量RNA殘留，沒有使用RNaseA，或RNaseA活性下降。A260值提示的含量與電泳檢測時(shí)提示的含量有可見的誤差則為苯酚殘留。DNA提取需要通過添加蛋白酶消化蛋白質(zhì)。深圳血液DNA提取哪家劃算
RNA提取和DNA提取實(shí)驗(yàn)中常見問題及過程中的注意事項(xiàng)：降解：降解問題是RNA制備中常常到的問題。因?yàn)樵赗NA提取過程中，樣品儲存不當(dāng)或裂解效率低等情況都會導(dǎo)致降解。對于DNA提取，降解不是一個(gè)大問題，因?yàn)閷τ赑CR，DNA可以被剪切并且工作正常，如果不希望有較多剪切的DNA，可以使用弱裂解的方法。PCR清理時(shí)的注意事項(xiàng)：PCR凈化其實(shí)并不是DNA提取技術(shù)本身，但它是一種效率高且簡單的技術(shù)，它只是添加高濃度的結(jié)合鹽（通常每體積PCR反應(yīng)3-5體積鹽）和離心來過濾。在實(shí)驗(yàn)過程中，PCRClean-up試劑盒出現(xiàn)故障也會導(dǎo)致整個(gè)實(shí)驗(yàn)功虧一簣。因?yàn)樵赑CR反應(yīng)中有較多吸收260度紫外線的物質(zhì)，比如：核苷酸、去污劑、鹽和引物。所以，PCR凈化試劑盒經(jīng)常無法正常工作可能是由于PCR反應(yīng)失敗所造一般成較難清理。北京血漿DNA提取公司DNA提取后可以用于PCR擴(kuò)增、測序、基因編輯等多種應(yīng)用。
RNA提取一般在pH值低于7時(shí)進(jìn)行。在堿性pH值下，由于核糖的2'位置存在OH基團(tuán)，RNA更容易被堿性水解降解。此外，RNA在酸性pH值下傾向于保留在水相中。外泌體DNA提取注意事項(xiàng)：1.實(shí)驗(yàn)過程中較好戴一次性干凈手套、口罩，使用超純水。2.如樣本量不足200μL，請用0.85%生理鹽水補(bǔ)至200μL。RNA提取中常見的問題之RNA中有基因組DNA污染：材料中核酸含量高：脾臟、胸腺等組織中的核酸含量較高，可進(jìn)行多次酚/氯仿抽。提以去除多余的DNA。也可以在提取后加入DNaseI處理，降解DNA。材料過量：增加試劑用量。
DNA提取試劑盒的保存方式：室溫。低溫保存可能會有沉淀析出。如果發(fā)生析出現(xiàn)象，請于50℃溶解后，再于室溫保存。DNA提取試劑盒主要可以分為以下幾大類：小量全血基因組DNA提取試劑盒、中量全血基因組DNA提取試劑盒、組織/細(xì)胞基因組DNA提取試劑盒、中量/大量組織/細(xì)胞基因組DNA提取試劑盒、全血/組織/細(xì)胞基因組DNA提取試劑盒、CTAB植物基因DNA提取試劑盒、新型植物基因組DNA提取試劑盒、酵母基因組DNA提取試劑盒、M13噬菌體單鏈基因組DNA提取試劑盒。RNA提取需要保持樣本的完整性和純度，以避免污染或降解。
RNA提取：1.凍存細(xì)胞與新鮮細(xì)胞的RNA提取有區(qū)別嗎？具體該怎么操作？新鮮細(xì)胞與凍存細(xì)胞RNA提取沒什么區(qū)別。千萬不能等細(xì)胞溶解了存狀態(tài)把Trizol直接加到凍存管了，一起化開，振蕩振蕩就可以了。與從組織中提RNA差不多。2.RNA得率低:該組織或者細(xì)胞中RNA含量偏低：不同細(xì)胞和組織中RNA的豐度不同，如肝臟，胰腺，心臟等是高豐度組織(總RNA含量2-4μg/mg)，腦，胚胎，腎臟，肺，胸腺，卵巢等是中豐度組織(總RNA含量0.05-2μg/mg)，膀胱，骨，脂肪等是低豐度組織(總RNA含量<0.05μg/mg)。組織起始量太少或者太多：樣品量過少，則細(xì)胞組織中RNA含量較低；樣品量過多則可能超過裂解液的裂解能力，裂解將不完全，從而導(dǎo)致RNA得率低。DNA提取的樣品準(zhǔn)備之生物組織：組織勻漿法。寧波離心柱法RNA提取公司
DNA提取需要脂質(zhì)被洗滌劑和表面活性劑分解。深圳血液DNA提取哪家劃算
RNA提取的一些問題，RNA降解：提取的材料不新鮮。新鮮組織取得后應(yīng)立即置于液氮中或立即放入RNAstore試劑中，以保證提取效果。處理樣品量過大。污染了RNase。雖然試劑盒中提供的緩沖液都不含RNase，但使用過程中很容易污染RNase，應(yīng)小心操作。堿裂解法提取的質(zhì)粒DNA進(jìn)行瓊脂糖電泳進(jìn)行鑒定時(shí)，看到的三條帶分別是什么？堿法抽提得到質(zhì)粒樣品中不含線性DNA，得到的三條帶是以電泳速度的快慢排序的，分別是超螺旋、開環(huán)和復(fù)制中間體（即沒有復(fù)制完全的兩個(gè)質(zhì)粒連在了一起）。如果你不小心在溶液II加入后過度振蕩，會有第四條帶，這條帶泳動(dòng)得較慢，遠(yuǎn)離這三條帶，是20-100kb的大腸桿菌基因組DNA的片斷。深圳血液DNA提取哪家劃算
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