細胞外泌體價格

來源: 發(fā)布時間:2023-06-07

外泌體的表征分析:Zeta電位:通過電泳光散射(ELS)測量的Zeta電位測量粒子在電泳場中的速度。Zeta電位是膠體分散體穩(wěn)定性的指標(非常值)和囊泡表面電荷的量度(+或-符號)。電子顯微鏡分析:對于電子顯微鏡分析,外泌體制劑在PBS緩沖液中按1:10稀釋,隨后在等體積的4%(w/v)多聚甲醛和1%(v/v)戊二醛中固定5分鐘。然后將樣品置于formvar-carbon涂層的600目銅網(wǎng)格上,并在室溫下干燥5分鐘。隨后將樣品在乙酸雙氧鈾溶液(2%水溶液)中進行對比,并在電子顯微鏡(Jeol1230TEM)下觀察,加速電壓為80kV,并連接到數(shù)碼相機進行觀察。外泌體的轉(zhuǎn)移涉及細胞因子、基質(zhì)降解酶和細胞外基質(zhì)重塑等多種調(diào)節(jié)步驟。細胞外泌體價格

外泌體衍生物miRNA的重要應(yīng)用:外泌體保護miRNA免于降解,使它們比游離miRNA更穩(wěn)定,并能被特定受體細胞有效整合。因此,在外泌體攜帶的貨物中,miRNA可以提供有關(guān)它們來源的細胞類型、靶標和細胞狀態(tài)的身份信息。越來越多的證據(jù)表明,疙瘩細胞來源的外泌體已成為通過傳遞病miRNA促進疙瘩細胞增殖、侵襲、血管生成、遠處轉(zhuǎn)移和疙瘩微環(huán)境重塑的主要候選者。血管生成對于惡性疙瘩的生長和轉(zhuǎn)移至關(guān)重要,因為新血管可以提供額外的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì),還可以清理廢物。比如:病細胞釋放外泌體exo-miR-21、exo-miR-23;外-miR-29;exo-miR-103和exo-miR-210可以促進增殖、血管生成和疙瘩轉(zhuǎn)移。細胞外泌體價格分離過程中避免對外泌體結(jié)構(gòu)和功能造成影響至關(guān)重要。

在生物流體中發(fā)現(xiàn)的細胞外囊泡包括來自內(nèi)體,多泡體的細胞外泌體(30nm至150nm)和來自質(zhì)膜的微泡(150nm至1000nm)。目前已知有多種從生物體液中分離外泌體的方法除了使用高速離心機的離心分離法以外,還有色譜法、超濾過濾法、基于聚合物的沉淀和免疫分離法等。#外泌體干細胞#這些細胞外泌體分離方法提取的外泌體要警惕非外泌體顆粒污染,如凋亡小體、凋亡小囊泡、外泌體和脂蛋白,均會對獲得的外泌體生物活性產(chǎn)生影響。另外,分離方法也會影響細胞外泌體的純度和產(chǎn)量。如果要從培養(yǎng)基中分離外泌體,就要使用無血清培養(yǎng)基或無外泌體胎牛血清。

差速離心法分離外泌體的實驗原理:與等密度和梯度離心相反,差速離心從離心管內(nèi)顆粒的均勻初始分布開始。在開始一輪離心過程中,位于管底部附近的一部分目標小顆粒不可避免地與較大顆粒共同沉淀。這種共沉淀導(dǎo)致較小顆粒的產(chǎn)量降低。然而,選擇大顆粒,起初位于管半月板附近,在開始一輪離心過程中可能沒有足夠的時間到達管底,從而污染較后一個離心步驟產(chǎn)生的小顆粒顆粒。顯然,交叉污染的程度取決于不同粒子群的相對沉降速度和離心條件。在被分離的粒子的沉降速度之間存在顯著(數(shù)量級)差異的情況下,可以有效地優(yōu)化差速離心協(xié)議以獲得目標粒子群的高產(chǎn)量和足夠純度。此外,當不同顆粒部分之間的沉降速率只存在微小差異時,優(yōu)化過程不太成功。在這些情況下,取決于離心條件。外泌體在人體的主要作用是充當局部和全身信號和調(diào)節(jié)系統(tǒng)。

外泌體的表征方法之非光學方法:非光學方法主要包括掃描電子顯微鏡(SEM)、透射電子顯微鏡(TEM)、冷凍電子顯微鏡(Cryo-EM)、原子力顯微鏡(AFM)、免疫檢測方法(ELISA)、傅立葉變換紅外光譜(FTIR)、可調(diào)諧電阻脈沖傳感(TRPS)和單粒子干涉反射成像傳感器(SP-IRIS)。SEM、TEM和AFM方法通常用于直接膜結(jié)構(gòu)和形態(tài)測定,而ELISA檢測提供各種結(jié)構(gòu)顆粒(主要是蛋白質(zhì)和受體)的檢測和量化,例如,用于外泌體形態(tài)的確認。單粒子干涉反射成像傳感器(SP-IRIS)也用于外泌體定量,但也可用于檢測特定標記物和確定外泌體亞群。外泌體受到多種因素的調(diào)控,例如細胞膜電位、氧化應(yīng)激和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑等。上海上清外泌體分離公司

外泌體可以傳遞生物分子,例如蛋白質(zhì)、DNA、mRNA等,影響接收器細胞的表現(xiàn)型和生理活性。細胞外泌體價格

外泌體分離方法之超速離心法:超速離心基于顆粒的大小(重量)及其在離心力(100,000–110,000×g)下的離心沉降。至于去除的細胞碎片和不需要的顆粒可以通過稱為差速離心的幾步慢速離心來獲得。外泌體的純化可以采用蔗糖梯度密度離心純化法:即:在蔗糖梯度(1.13–1.19g/mL)或緩沖液中進行,以實現(xiàn)更高的富集、產(chǎn)量和純度增加。外泌體分離方法之微流控分離法:微流控分離法主要是在微芯片上進行的,這里我們需要提及的是,微流控分離法法可用于外泌體分離(免疫結(jié)合和磁結(jié)合、過濾),效率相對較高(約90%)。細胞外泌體價格

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